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通过分析β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase, GUS）基因产物,对水稻HIGH-TILLERING DWARF1(HTD1)基因启动子在转基因拟南芥中的表达特性进行初步研究。用已构建的含HTD1基因启动子和GUS报告基因的植物表达载体,通过农杆菌介导转化拟南芥,对转基因拟南芥进行GUS组织化学染色,观察该启动子的表达特性。结果表明,在HTD1基因启动子的驱动下,GUS报告基因主要在转基因拟南芥幼苗期的叶片、叶柄、下胚轴以及主根基部的维管组织中表达。 相似文献
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为丰富花生种子特异启动子资源,本研究利用PCR技术在花生基因组中克隆了种子贮藏蛋白基因PSC32的启动子AHSSP1,利用半定量RT-PCR检测了PSC32基因表达模式,借助NewPLACE在线分析了AHSSP1序列中存在的顺式作用元件,并构建了AHSSP1驱动GUS报告基因的表达载体,经农杆菌转化获得转基因拟南芥,经GUS组织化学染色鉴定了该启动子的功能。结果表明,PSC32基因957 bp长的启动子AHSSP1序列具备种子特异表达启动子特有的3个RY REPEAT元件。半定量RT-PCR分析发现,PSC32基因在花生成熟种子中表达,而在饱果成熟期根、茎、叶片、花、入土前的果针、成熟种子的果壳中均不表达。GUS组织化学染色发现,转基因拟南芥成熟种子以及萌发种子的子叶、下胚轴和胚根均能够被染上蓝色;长出真叶后,子叶和下胚轴仍能被染色,而根和真叶不能被染上蓝色;成年期转基因拟南芥的叶片也不能被染上蓝色。而野生型拟南芥整个生长时期均不能被染上蓝色。以上现象说明AHSSP1是一个种子特异启动子。本研究丰富了花生种子特异启动子的资源,对花生籽仁品质改良或以花生籽仁作为“生物反应器”的研究具有重要的应用价值。 相似文献
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向日葵种子特异性启动子Ha ds10G1的克隆及其功能验证 总被引：3，自引：0，他引：3
利用PCR技术从向日葵基因组DNA中克隆了Lea蛋白基因家族中Ha ds10 G1基因上游1414bp的调控序列，序列分析表明-1—1414bp与报道序列同源性为100%，将其与GUS基因融合构建植物表达载体后，通过农杆菌介导法转化烟草NC89，PCR扩增初步证明目的片段已整合到烟草基因组中，转基因植株的GUS活性检测表明，在茎、叶中无GUS活性，GUS活性只存在于种子中，因此，Ha ds10 G1启动子具有种子特异性的功能。 相似文献
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Katsuhiko Mineta Eiichi Akahoshi Keishiro Takahashi Tatsuya Horiguchi Hiroaki Hayashi Takuji Ohyama 《Soil Science and Plant Nutrition》2013,59(1):189-197
Accumulation of mRNA for MT2a, a metallothionein of Arabidopsis thaliana, is known to be upregulated by excess copper (Cu). We compared the localization of the promoter activity of the MT2a gene and the accumulation site(s) of CU in the roots of transgenic A. thaliana. Open reading frame of the β-glucuronidase (GUS) gene was fused with the MT2a gene promoter and introduced into A. thaliana. Strong GUS activity was observed in the region near or within the stele in the presence of CU at a high concentration (high-CU condition). Electron probe X-ray micro-analysis demonstrated that under high-CU conditions, CU accumulated most abundantly in the cortex, where GUS activity was not significantly induced. These results indicate that the sites showing the MT2a promoter activity and CU accumulation did not coincide with each other, suggesting that CU is not a direct activator of the MT2a promoter. 相似文献
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Schwekendiek A Spring O Heyerick A Pickel B Pitsch NT Peschke F de Keukeleire D Weber G 《Journal of agricultural and food chemistry》2007,55(17):7002-7009
Resveratrol, a well-known phytoalexin and antioxidant, is produced by the action of stilbene synthase (STS) in some plant species. Hop (Humulus lupulus L.) plants of the Tettnang variety were transformed with a gene encoding for STS from grapevine. Under the control of the constitutive 35S cauliflower mosaic virus promoter, expression of the transgene resulted in accumulation of resveratrol and high levels of its glycosylated derivatives in leaves and inflorescences. Piceid, the predominant derivative, reached a concentration of up to 560 microg/g of fresh weight (f.w.) in hop cones, whereas no stilbenes were detected in nontransformed controls (wild-type). In transgenic plants the amounts of alpha- and beta-acids, naringenin chalcone, and prenylated flavonoids did not change significantly when compared with nontransformed plants. Transgenic plants showed normal morphology and flower development as did the nontransformed controls. The results clearly show that in hop constitutive expression of sts interferes neither with plant development nor with the biosynthesis of secondary metabolites relevant for the brewing industry. Since resveratrol is a well-known phytoalexin and antioxidant, sts transgenic hop plants could display enhanced pathogen resistance against microbial pathogens, exhibit new beneficial properties for health, and open new venues for metabolic engineering. 相似文献
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Satoshi ITO Haruhiko INOUE Takanori KOBAYASHI Masaaki YOSHIBA Satoshi MORI Naoko K. NISHIZAWA Kyoko HIGUCHI 《Soil Science and Plant Nutrition》2009,55(2):277-282
Barley ( Hordeum vulgare L.) nicotianamine synthase gene ( HvNAS1 ) expression in barley is strongly induced by Fe deficiency in the roots and rice ( Oryza sativa L.) nicotianamine synthase gene ( OsNAS1 ) expression in rice is induced by Fe deficiency both in the roots and in the shoots. In dicots, NAS genes are not strongly induced by Fe deficiency, and they function to maintain Fe homeostasis. Rice OsNAS1promoter::GUS or barley HvNAS1promoter::GUS was introduced into tobacco ( Nicotiana tabacum L.) and tissue specificities and systemic regulation of their expression were compared. A split-root experiment revealed that the HvNAS1 promoter exhibited functions similar to those of Fe-acquisition-related genes in tobacco roots, suggesting that this promoter responded to certain Fe-deficiency systemic signals and to the Fe concentration in the rhizosphere. The HvNAS1 promoter might harbor a type of universal system of gene expression for Fe acquisition. However, the OsNAS1 promoter did not respond to local application of Fe to the roots and induced GUS activities in mature leaves in response to Fe deficiency. This promoter might possess numerous types of cis -acting sequences that are involved in Fe metabolism. 相似文献
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MxIrt1基因是从小金海棠（Malus xiaojinensis Cheng et Jiang）中克隆得到的Fe（II）转运蛋白基因，具有“ZIP基因家族”的保守功能域，推测该基因与苹果中铁的转运吸收有关。本研究构建MxIrt1基因的植物表达载体pCWIrt，通过农杆菌介导转化拟南芥IRT1突变体irt1-1。GUS染色以及Southern杂交检测结果显示，MxIrt1基因已经整合到拟南芥基因组中。在缺铁胁迫条件下，转基因植株提高了突变体irt1-1的耐缺铁能力，表明MxIrt1基因参与了铁的吸收。 相似文献
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为了研究拟南芥扩张蛋白AtEXPA1基因启动子上与转录调控有关的元件,我们通过PCR技术克隆了AtEXPA1基因上游897bp具有启动子活性的序列,再将启动子作不同程度截短,所有片段与GUS基因融合,构建植物表达载体,采用基因枪轰击拟南芥叶片和PEG介导转化烟草原生质体,通过定性和定量检测GUS的活性,发现在靠近翻译起始密码子的上游144bp之间存在增强转录活性的元件。将PEG介导转化的烟草原生质体,分别进行光诱导,冷诱导, 脱落酸（ABA）,盐处理,根据GUS定量检测的结果,推测（1）在AtEXPA1基因启动子上广泛存在与光调控有关的元件,（2） -897～-626 bp之间存在冷负调控元件, （3）-626～-444 bp之间存在与ABA负调控有关的元件,（4）-626～-282 bp之间存在与盐负调控有关的元件。 相似文献
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利用PCR方法从油菜(Brassica napus)基因组中扩增得到花瓣特异性启动子XY355,构建该启动子与玉米(Zea mays)花青素调节基因Lc的植物表达载体pXY60。通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导,将pXY60分别转化烟草(Nicotiana tabacum)和矮牵牛(Petunia hybrida)。对再生植株进行PCR检测,结果表明,外源基因已经整合到转基因烟草和矮牵牛的基因组中。观察发现,转基因植株的表型发生了明显变化:转基因烟草的花色由浅红变成了红色,转基因矮牵牛的花色由白色变成了浅紫色。 相似文献
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转柽柳金属硫蛋白基因（MT1）烟草的获得及对重金属镉的抗性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
将柽柳（Tamarix. sp）金属硫蛋白基因（MT1）插入到植物表达载体pBI121，利用农杆菌（Agrobactrium tumefaciens）介导法将MT1导入烟草基因组。对转基因T1植株的卡那霉素抗性分析表明，多数转基因植株后代表现为3:1的分离比例，只有少数转基因植株的抗性分离表现为15:1或不符合孟德尔遗传的分离比例。说明整合到烟草基因组的外源基因多为单拷贝基因，也有少数为多拷贝基因。对具有卡那霉素抗性的转基因植株进行PCR-Southern检测和Northern杂交分析表明，外源MT1基因已整合到烟草基因组，并且得到了正确表达。转基因植株对重金属镉的抗性比对照显著提高，表现为转基因植株的株高和鲜重均明显优于非转基因株系。 相似文献
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为研究BrABF1基因在不结球白菜中的表达模式并探索其在开花调控中的作用,本研究以不结球白菜苏州青品种为试验材料,通过同源克隆获得BrABF1基因序列,对其氨基酸序列进行比对和进化分析,利用亚细胞定位技术研究BrABF1的空间表达,采用β-D-葡糖醛酸酶(GUS)染色方法研究BrABF1在植物中的表达模式,利用PlantCARE在线软件预测BrABF1基因的启动子的顺式作用元件。构建植物表达载体pEarlyGate101-BrABF1-YFP转化拟南芥,统计野生型和转基因拟南芥植株的开花时间。结果表明,BrABF1基因含有1 104 bp开放阅读框(ORF),编码367个氨基酸。BrABF1与甘蓝型油菜和野甘蓝(原变种)同源性最高,进化关系最近。BrABF1定位在细胞核上。BrABF1启动子驱动的GUS蛋白主要在拟南芥的叶脉中特异性表达。BrABF1启动子序列包含大量的顺式作用元件,如光响应元件、植物激素响应元件、低温响应元件和逆境胁迫响应元件等。转基因拟南芥植株开花时间晚于野生型,表明BrABF1基因能抑制植物的开花。本研究结果为提高不结球白菜商品价值提供了理论基础。 相似文献
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<SPAN style= 《农业生物技术学报》2007,15(1):85-89
利用PCR的方法从油菜(Brassica napus)基因组中扩增得到花瓣特异性启动子XY355，将XY355与玉米花青素调节基因Lc融合构建植物表达载体pXY60。用冻融法将pXY60转入根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）LBA4404，然后以烟草（Nicotiana tabaccum L.）和矮牵牛（Petunia hybrida）的叶盘为外植体，通过根癌农杆菌介导法进行遗传转化。对再生植株的PCR检测证明外源基因已经整合到转基因烟草和矮牵牛的基因组中。对转基因烟草和矮牵牛的表型进行观察：转Lc基因烟草的花色由浅红变成了红色，转Lc基因矮牵牛的花色由白色变成了浅紫色。 相似文献
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枯草杆菌蛋白酶基因家族(SBT)是控制植物生长发育和响应环境胁迫的重要基因家族。为进一步了解木薯SBT基因家族的数量、基本特征、功能域和进化关系等,在全基因组水平通过生物信息学方法对SBT基因家族进行了鉴定和分析,并对其中一个成员的功能进行了分析。进化树分析结果表明,在木薯基因组中共鉴定到69个SBT成员,其中Manes.18G044300与拟南芥抗旱基因SDD1亲缘关系最近,因此将该成员命名为MeSDD1;22个成员无内含子,69个成员的蛋白携带5个高度保守的结构域,一部分SBT成员在染色体上呈紧密的串联分布,启动子存在干旱响应元件。用qRT-PCR检测筛选出表达量高的2个纯合株系用于后续研究。相关生理指标检测结果表明,2个转基因株系叶片的相对含水量均显著高于野生型;转基因株系离体叶片失水率小于野生型;转基因株系的气孔密度显著小于野生型;断水处理14 d,转基因株系的萎焉程度轻于野生型,表明MeSDD1增强了拟南芥植株的抗旱性。本研究结果为木薯抗旱育种提供了基因资源,并为后续研究MeSDD1介导的抗旱分子机制奠定了理论基础。 相似文献
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以本实验室构建的重组南瓜(Cucurbita moschata)韧皮部特异启动子dENP构建了植物表达载体pBdENP。利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA44O4介导转化马铃薯(Solanum tuberosum)品种Favorita，经过抗生素筛选，共获得转pBdENP和对照pBI121的抗卡那霉素马铃薯再生植株106株。通过PCR初步筛查，筛选出65株为转基因阳性植株。通过Southern blot对部分植株进一步分析,确证外源gus基因已经插入到转基因马铃薯植株的基因组中，插入拷贝数在1个或2个以上。对这些转基因马铃薯植株进行GUS染色结果表明, dENP和CaMV35S启动子一样均能驱动gus基因的表达，前者仅在马铃薯的韧皮部内特异表达，而CaMV35S启动子驱动的gus基因为组成型性表达。GUS酶活力测定结果进一步表明dENP和CaMV35S启动子驱动gus基因表达水平没有明显区别。以上结果证明dENP启动子驱动的外源基因在马铃薯中也具有韧皮部特异而高效表达的特征，从而可用于马铃薯抗病、抗蚜虫转基因研究。 相似文献
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转CBF1基因增强水稻的耐逆性 总被引：11，自引：1，他引：10
为改良水稻(Oryza sativaL.)的耐逆性,以来源于成熟种子的胚性愈伤组织为受体材料,通过农杆菌介导法将拟南芥(Arabidopsis thaliana)耐逆相关CBF1基因导入粳稻品种秀水11基因组,经GUS组织化学染色、PCR检测和Southern杂交分析验证,获得一批转基因植株。T1代检测结果显示,所转基因已遗传给后代,且大多数株系的分离比符合3∶1。试验表明,在高盐与高渗胁迫下,转基因株系较非转化对照具有显著或极显著生长优势,表现苗高负增长率较小,长出的根数较多,根长较长;经低温胁迫处理后,转基因株系的叶片相对电导率显著或极显著低于对照。这些结果证明水稻转基因株系的耐逆性得到了增强。 相似文献
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水稻OsHsfA7基因RNA干扰载体的构建及遗传转化研究 总被引：1，自引：1，他引：0
为研究水稻热激转录因子基因OsHsfA7的功能及其在水稻耐热育种方面的应用价值,本文通过构建水稻OsHsfA7基因RNA干扰载体获得功能抑制变异材料,从反向遗传学进行基因的功能分析。扩增OsHsfA7c DNA3'编码区470bp片段,分别以反向和正向插入到中间载体pBSK连接的GUS片段两侧,然后将得到的RNA干扰片段克隆到改造的植物表达载体p1301M,构建以CaMV35S启动子驱动表达的水稻OsHsfA7基因RNA干扰表达载体。将该载体转入根癌农杆菌EHA105后,采用农杆菌介导法进行了水稻日本晴品种的遗传转化,获得了23株具有潮霉素抗性的转基因植株,其中12株经GUS染色呈蓝色并且DNA检测10株已插入目的片段,RNA检测其中6株OsHsfA7基因的表达水平下降甚至未检出。结果说明本研究构建的OsHsfA7基因RNA干扰载体对该基因表达沉默是有效的。 相似文献
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Lunkenbein S Coiner H de Vos CH Schaart JG Boone MJ Krens FA Schwab W Salentijn EM 《Journal of agricultural and food chemistry》2006,54(6):2145-2153
An octaploid (Fragaria x ananassa cv. Calypso) genotype of strawberry was transformed with an antisense chalcone synthase (CHS) gene construct using a ripening related CHS cDNA from Fragaria x ananassa cv. Elsanta under the control of the constitutive CaMV 35S promoter via Agrobacterium tumefaciens. Out of 25 transgenic lines, nine lines showed a reduction in CHS mRNA accumulation of more than 50% as compared to the untransformed cv. Calypso control. The antisense CHS construct was found to be integrated into the genome, with a copy number ranging from one to four. The pigmentation of the fruit was only affected when less than 5% of the control CHS expression level was detected. A stable antisense phenotype over a period of 4 years was obtained in the primary transgenic lines at a rate of 1:20. As a consequence of the reduced activity of CHS, the levels of anthocyanins, flavonols, and proanthocyanidins were downregulated and precursors of the flavonoid pathway were shunted to the phenylpropanoid pathway leading to highly increased levels of cinnamoyl glucose (520% of control), caffeoyl glucose (816% of control), and feruloyl glucose (1092% of control) as well as p-coumaryl alcohol (363% of control) and p-coumaryl-1-acetate (1079% of control), which occur only as trace components in untransformed control fruits. These results demonstrate that the introduction of an antisense CHS construct in strawberry results in an unpredictable biochemical phenotype, thereby confirming that CHS function is an important regulatory point of substrate flow between the flavonoid and the phenylpropanoid pathways. 相似文献