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优化农杆菌介导的月季遗传转化系统的研究 总被引：12，自引：0，他引：12
为了建立月季品种‘萨蔓莎’根癌农杆菌介导的遗传转化系统，我们通过衡量GUS基因瞬间表达水平，探讨了各因子对基因转化的影响.结果表明:外植体、光照条件、共培养培养基中无机盐含量及乙酰丁香酮（AS）含量是重要的影响因子；共培养时间、共培养温度及农杆菌菌液浓度对根癌农杆菌的生长以至基因转化有重要影响.优化后的转化条件为:将月季胚性愈伤组织与OD６００值为0.5～0.8的农杆菌菌液侵染20min，然后在含300μmol/L AS并且无机盐减半的MS培养基上黑暗、23℃条件下共培养3d. 相似文献
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根癌农杆菌介导苹果遗传转化研究进展 总被引：13，自引：1，他引：13
论述和分析了影响苹果高效离体再生的主要因素 ,包括试验材料苹果的基因型、外植体生理状态、培养基类型、植物激素、Ag NO3、前期暗培养、抗生素等内外因子 ,以及影响根癌农杆菌介导苹果遗传转化的主要因素 ,包括苹果基因型、外植体生理状态、菌株类型、菌液浓度、活化物质的应用、共培养、预培养、选择培养、培养基成分等内外因子。并对其研究现状、存在的问题及应用前景作了简要概述 相似文献
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根癌农杆菌介导的玉米大斑病菌转化条件的优化 总被引：2，自引：0，他引：2
为构建大规模的玉米大斑病菌ATMT突变体库,本研究对根癌农杆菌介导的玉米大斑病菌的转化条件进行了优化,包括共培养温度与时间、孢子萌发时间、转化受体材料、共培养介质等。结果表明:头孢噻肟钠和羧苄青霉素浓度为200/200μg/mL时可有效抑制根癌农杆菌的生长;当玉米大斑病菌分生孢子萌发24 h后,在20℃条件下与根癌农杆菌共培养48 h,共培养介质为微孔滤膜时转化效果最佳,转化效率可达到90～110个转化子/105个孢子。 相似文献
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根癌农杆菌对结球白菜的转化 总被引：1，自引：0，他引：1
为了给外源有用基因导入结球白菜并高效稳定地表达提供依据，以结球白菜的子叶－子叶柄为外植体，采用农杆菌共培养法把外源基因C58／pV11导入结球白菜，在选择最优的转化条件－根癌农杆菌侵染外植体15min，农杆菌培养和共培养时在培养基中均加入AS，培养基pH为5．2，共培养3d的条件下，获得转基因植株，其中抗性植株的抗草丁膦试验，转基因植株DNA的PCR及PCR－Southern斑点杂交鉴定等结果表明，50％的抗性植株的基因组中有外源基因的整合。 相似文献
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以甘蓝型油菜湘油15号为试验材料,对农杆菌转化体系中外植体预培养时间、培养基中AgNO_3浓度、农杆菌侵染时的菌液浓度、共培养基pH值等进行了优化研究,确立了优化的遗传转化条件。结果表明,外植体在农杆菌侵染和共培养前预培养3 d,可明显提高子叶外植体和下胚轴外植体出愈率和抗性芽苗分化率,有利于获得较高的转化效率;在基因转化中,AgNO_3的最佳使用浓度为30μmol/L,最佳的农杆菌侵染菌液OD_(600)为0.4,共培养基pH值5.4是油菜农杆菌介导转化中优化的转化条件。 相似文献
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农杆菌介导法将LFY基因导入苹果的研究 总被引：6，自引：0，他引：6
以M26苹果叶片为外植体,利用GUS瞬时表达率,对农杆菌介导法转化苹果的因素进行优化,通过含LFY基因的根癌农杆菌EHA105转化苹果叶片,获得了提早开花的转基因植株。结果表明:以OD600=0.3~0.5农杆菌菌液侵染叶片,25℃条件下共培养,共培养后的叶片延迟筛选3 d,在附加卡那霉素30 mg/L的再生培养基中选择培养,转化芽再生率可达6.97%。PCR检测初步证明目的LFY基因已整合到苹果基因组中。 相似文献
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影响农杆菌介导花生遗传转化率主要因素的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
为提高农杆菌介导的花生遗传转化效率,以花生新品种丰花2号胚小叶为外植体,研究不同时期加入乙酰丁香酮(AS)和进行超声波处理对转化效率的影响.在农杆菌活化和与外植体共培养时分别加入浓度为0.50、100、150、200 靘ol/L的AS,在农杆菌侵染过程中分别进行0、2、4、6、8、10、15 min的超声波处理.试验结果表明,在农杆菌活化或共培养时,培养基中添加50和100 靘ol/L的AS对花生基因转化效率的影响不明显,AS浓度为150和200 靘ol/L时,转化效率明显下降;超声波处理6 min对花生遗传转化有促进作用.对转化苗进行PCR检测证明外源基因已整合到花生基因组中. 相似文献
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通过对影响根癌农杆菌介导小黑杨花粉植株转化效果各种因素的研究,建立了小黑扬花粉植株高效稳定的转化体系.研究结果表明:小黑杨花粉植株叶片外植体在分化培养基中预培养2 d,用OD600值为0.1的工程菌液侵染3～5min,黑暗条件下共培养2～3 d,采用适宜的脱菌方法有利于提高遗传转化率,而用在培养基中加入CaCl2则不利于遗传转化:叶片外植体与农杆菌共培养后.经过抗性芽的诱导、叶片的冉分化和根的再生,3个月后即可获得抗性苗;抗性植株经PCR和Southem斑点杂交检测,表明外源基因已转入小黑杨花粉植株的基因组中. 相似文献
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Beijersbergen A Dulk-Ras AD Schilperoort RA Hooykaas PJ 《Science (New York, N.Y.)》1992,256(5061):1324-1327
Agrobacterium tumefaciens transfers part of its Ti plasmid, the transferred DNA (T-DNA), to plant cells during tumor induction. Expression of this T-DNA in plant cells results in their transformation into tumor cells. There are similarities between the process of T-DNA transfer to plants and the process of bacterial conjugation. Here, the T-DNA transfer machinery mediated conjugation between bacteria. Thus, products of the Vir region of the Ti plasmid of Agrobacterium tumefaciens, normally involved in transfer of DNA from bacteria to plants, can direct the conjugative transfer of an IncQ plasmid between agrobacteria. 相似文献
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通过根癌农杆菌介导法将反义fad2-1基因导入大豆子叶节,研究了农杆菌菌液浓度、预培养时间、共培养时间、恢复培养时间、乙酰丁香酮浓度和pH值对大豆子叶节形成丛生芽的影响,建立了有效的转化体系,获得了转基因大豆再生植株。PCR、PCR-Southern blotting检测结果表明,反义fad2-1基因成功转入并整合于大豆基因组。GC检测结果表明,转反义fad2-1基因大豆种子油酸含量比非转基因大豆种子的油酸含量提高了14.44%,而亚油酸含量降低了20.27%。 相似文献
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Agrobacterium tumefaciens induces tumors in plants by transferring and integrating oncogenes (T-DNA) into the chromosomes of host plant cells. Agrobacterium strains were used to transfer complementary DNA copies of a potato spindle tuber viroid (PSTV) to plant cells at a wound site on tomato plant stems. Subsequently, infectious viroid RNA was found in the leaves of these plants, indicating systemic PSTV infection. This process utilized the T-DNA transfer mechanisms of Agrobacterium since PSTV infection required most virulence genes (vir) as well as one of the DNA sequences that flank either side of the Agrobacterium T-DNA. However, transfer still occurred from virE mutants of Agrobacterium, strains that fail to induce tumors even though a completely functional T-DNA is present. The virE gene seems to be directly involved in the integration of foreign DNA into plant chromosomes. 相似文献
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影响农杆菌介导草菇遗传转化的因素研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以草菇Volvariella volvacea菌株V51为受体材料,用农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导法转入抗冷冻蛋白基因(afp),探索不同的转化受体、农杆菌种类、乙酰丁香酮(AS)的浓度、共培养的温度、时间等因素对转化效率的影响,并采用PCR及Southern杂交检测afp基因是否整合到草菇的基因组中.结果表明:以D660 nm为0.15的EHA105为侵染的农杆菌菌株,加入200μmol/L AS进行预培养,侵染菌丝球后转入含有AS为200μmol/L的IMA培养基上,28℃,共培养60 h为最佳转化条件.PCR与Southern杂交结果证明afp基因已整合到草菇的基因组中. 相似文献
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St Schell J 《Science (New York, N.Y.)》1987,237(4819):1176-1183
Transgenic plants are generated in nature by Agrobacterium tumefaciens, a pathogen that produces disease through the transfer of some of its own DNA into susceptible plants. The genes are carried on a plasmid. Much has been learned about how the plasmid is transferred, how the plasmid-borne genes are organized, regulated, and expressed, and how the bacteria's pathogenic effects are produced. The A. tumefaciens plasmid has been manipulated for use as a general vector for the transfer of specific segments of foreign DNA of interest (from plants and other sources) into plants; the activities of various genes and their regulation by enhancer and silencer sequences have been assessed. Future uses of the vector (or others like it that have different host ranges) by the agriculture industry are expected to aid in moving into vulnerable plants specific genes that will protect them from such killers as nonselective herbicides, insects, and viruses. 相似文献
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高频再生系统是外源基因成功转化的先决条件,但再生系统不等同于转化系统。为提高农杆菌共培养后胡萝卜的再生频率,以日本新黑田五寸参和林丰改良五寸参2个品种胡萝卜下胚轴为外植体,利用农杆菌介导法将人源白细胞介素-2基因(IL-2)导入其中,探讨了共培养后诱导培养基中激素浓度和筛选剂对再生的影响。结果显示:不同基因型胡萝卜的分化对激素浓度的反应不同,林丰改良五寸参在3种培养基上的胚性愈伤率差异不显著;日本新黑田五寸参胚性愈伤率和每个外植体分化的抗性株数随激素浓度的提高而呈上升趋势,2,4-D和6-BA浓度为1.0mg/L时胚性愈伤率和每个外植体分化的抗性株数最高,分别为87.50%和59株;日本新黑田五寸参以bar基因为标记基因、PPT作筛选剂时,分化较好。因此,遗传转化过程中,为提高共培养后胡萝卜胚状体的分化率,对共培养后的诱导培养基进行再优化是必要的。 相似文献
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农杆菌介导的烟草瞬时表达试验条件优化 总被引：1，自引：0，他引：1
以烟草叶片为试材,用转入植物表达载体pBI121的根癌农杆菌EHA105进行遗传转化。通过分析菌液不同浓度、侵染时间、乙酰丁香酮浓度及共培养时间对GUS基因表达的影响,研究其瞬时表达的最佳条件。结果显示:用OD600值为0.6的农杆菌侵染6min,在培养基中添加120μmol.L-1的乙酰丁香酮,共培养2d,能够得到高效的GUS基因瞬时表达。 相似文献
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Horsch RB Fraley RT Rogers SG Sanders PR Lloyd A Hoffmann N 《Science (New York, N.Y.)》1984,223(4635):496-498
Morphologically normal plants were regenerated from Nicotiana plumbaginifolia cells transformed with an Agrobacterium tumefaciens strain containing a tumor-inducing plasmid with a chimeric gene for kanamycin resistance. The presence of the chimeric gene in regenerated plants was demonstrated by Southern hybridization analysis, and its expression in plant tissues was confirmed by the ability of leaf segments to form callus on media containing kanamycin at concentrations that were normally inhibitory. Progeny derived from several transformed plants inherited the foreign gene in a Mendelian manner. 相似文献