共查询到20条相似文献，搜索用时 62 毫秒
1.
[目的]建立一个高效的猪肺炎支原体气溶胶富集和检测技术,以弥补临床上猪肺炎支原体气溶胶检测技术的空白。[方法]结合液体冲击式采样器和过滤式采样器的原理,自行设计一个气溶胶双重富集装置,并在密闭环境下采集人工制备的猪肺炎支原体气溶胶,荧光定量PCR检测以确定该装置的采集效率。再通过收集不同猪群中的气溶胶进行检测以确定该装置临床应用的可行性。首先,收集人工感染Mhp阴性仔猪后不同时间猪舍内的气溶胶;其次,收集1个猪支原体肺炎发病猪场和1个阳性未发病猪场的产房、保育舍和育肥舍共11个猪舍的气溶胶,荧光定量PCR或套式PCR检测所收集的气溶胶。[结果]实验室模拟采样的采集效率达到(37.04±6.43)%,人工感染猪肺炎支原体后7天即在饲养房间的气溶胶中检到猪肺炎支原体;2个猪场共11个不同猪舍气溶胶中猪肺炎支原体检测结果均为阳性,检出率100%。[结论]成功建立了一个高敏感性的猪肺炎支原体气溶胶富集检测技术,适用于临床上猪肺炎支原体气溶胶的检测。 相似文献
2.
《农业科学与技术》2015,(5)
[目的]本试验旨在探索一种对猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)培养物中的支原体进行快速检测的竞争定量PCR方法。[方法]设计一对Mhp特异性引物,检测Mhp培养物;又根据支原体种属保守基因序列设计一对引物,通过酶切缺失法构建竞争模板,其携带与目的片段相同的引物结合区。[结果]以一系列稀释的竞争模板的对数值为横坐标(X轴),竞争模板和目标模板扩增产物的光密度比值的校正值的对数值为纵坐标(Y轴)绘制标准曲线,根据Y=0所对应的竞争模板的量推算求得支原体的拷贝数。以变色单位的对数值为X轴,支原体的拷贝数为Y轴,绘制出标准曲线,两者之间高度相关。[结论]成功建立了一种快速测定Mhp培养物中支原体量的竞争PCR方法。 相似文献
3.
[目的]本试验旨在探索一种对猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）培养物中的支原体进行快速检测的竞争定量 PCR方法。[方法]设计一对Mhp特异性引物,检测Mhp培养物;又根据支原体种属保守基因序列设计一对引物,通过酶切缺失法构建竞争模板,其携带与目的片段相同的引物结合区。[结果]以一系列稀释的竞争模板的对数值为横坐标（X轴）,竞争模板和目标模板扩增产物的光密度比值的校正值的对数值为纵坐标（Y轴）绘制标准曲线,根据 Y=0所对应的竞争模板的量推算求得支原体的拷贝数。以变色单位的对数值为 X轴,支原体的拷贝数为 Y轴,绘制出标准曲线,两者之间高度相关。[结论]成功建立了一种快速测定 Mhp培养物中支原体量的竞争PCR方法。 相似文献
4.
检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法.结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5 μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间为90 min,酶标抗体1∶10 000(体积比)稀释,最佳作用时间为60 min.对136份样品检测结果表明,建立的猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法与美国IDEXX公司生产的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒检测的符合率达到83.8%,假阴性率8.8%,假阳性率1.5%. 相似文献
5.
[目的]研究猪肺炎支原体P97R1基因在毕赤酵母中的分泌表达及初步应用。[方法]根据Genbank中猪肺炎支原体P97R1基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白P97R1基因,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P97R1;PICZα-A-P97R1经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株GS115;将PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌P97R1蛋白于发酵上清液中,并通过SDS-PAGE电泳以及Western-blotting对其进行鉴定。[结果]P97R1蛋白基因获得了分泌性表达,表达量达499μg/ml,而且具有良好的反应原性;同时用表达蛋白经过各项优化建立了猪肺炎支原体间接ELISA检测方法,经检测该方法具有良好的特异性和重复性。[结论]该研究为猪肺炎支原体免疫检测试剂盒和基因工程疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
6.
猪肺炎支原体(Mhp)是猪气喘病的主要病原体。利用Mhp NJ株的DnaK基因通过SOE-PC(splicing withoverlap extension PCR)R扩增和突变,获得了目的片段并插入表达载体pET-28a(+)中,然后转入宿主菌BL21(DE3)。重组质粒经1 mmol/L IPTG在37°C温度下诱导5 h,目的蛋白可达到总蛋白的14.1%。Western Blotting证明表达的重组蛋白具有猪肺炎支原体反应原性,用该重组蛋白建立的ELISA方法可检测到猪肺炎支原体抗体。此为该病基因工程疫苗抗原的筛选和ELISA诊断试剂盒的研制奠定基础。 相似文献
7.
根据GenBank中猪肺炎支原体（Mhp）J株P36蛋白基因（登录号X67286）的核苷酸序列设计1对引物,建立了快速检测Mhp的PCR方法。该方法能扩增出948bp的Mhp特异性条带,其敏感性达到可检测出0．735ng的MhpDNA,但对鸡毒支原体、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪流感病毒、猪呼吸与繁殖综合征病毒均未检测出相应目的条带;将克隆获得的目的片段与GenBank已发表的MhpJ株的P36基因进行比较,同源性达到99．9％。采用所建立的PCR方法对42份疑似猪支原体肺炎（MPS）病料进行临床诊断,发现有13份呈阳性（31．0％）。可见,该PCR方法适合于MPS的临床诊断,可为其防控提供可靠依据。 相似文献
8.
猪肺炎支原体人工感染引起易感猪各肺叶病变差异的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为研究猪肺炎支原体对易感猪肺脏及各肺叶部位的损伤差异性,选二元猪(大白×二花脸)和三元猪(杜洛克×长白×大白) 2个品系,共6批次的猪肺炎支原体(Mhp)阴性猪,经人工"气管定位注射"途径感染猪肺炎支原体,于感染后28 d剖检,通过肉眼观察,运用"猪支原体肺炎的肺病变28分制评分法"对肺脏及各个肺叶部位所显示的病变情况进行测算、评分、统计和分析,并对所收集的肺泡灌洗液(BAFL)中猪肺炎支原体病原进行PCR检测。结果表明:猪肺炎支原体能引起肺脏各个肺叶产生特异性"虾肉样"病变,该病变主要呈现在心叶和尖叶部位。不同肺叶所呈现的病变程度存在一定的差异,其中猪肺炎支原体对心叶造成病变最严重,且右心叶比左心叶严重。猪肺炎支原体引起的右肺的病变程度高于左肺,推测其在右肺部位的定植水平可能高于左肺。通过猪肺炎支原体人工感染引起易感猪各肺叶病变差异的研究,为丰富猪支原体肺炎的临床诊断方法和致病机制、疫苗免疫效果评价研究提供了参考依据。 相似文献
9.
P65蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,与其他支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。本实验应用原核表达的重组 P65蛋白免疫小鼠,用 Mhp全菌蛋白和P65蛋白筛选,制备了1株特异性单克隆抗体3G12。鉴定结果表明,该株单克隆抗体可与 P65蛋白和 Mhp全菌蛋白反应,采用间接 ELISA法测得3G12细胞培养上清与P65蛋白反应抗体的效价为1∶12800,与全菌蛋白反应抗体的效价为1∶3200;3G12腹水与P65蛋白反应的抗体效价为1∶4000000以上,与168全菌蛋白反应的抗体效价为1∶20000以上,细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体。本研究成功获得到1株针对 P65和Mhp全菌的单克隆抗体,为猪肺炎支原体致病机制和检测方法的进一步研究提供了基础。 相似文献
10.
11.
利用巢式PCR和荧光定量PCR比较检测猪场中感染猪肺炎支原体研究(英文) 总被引：1，自引：0，他引：1
William Keeru KIMARU ;白方方 ;武昱孜 ;Joyce Wanjiru MAINGI ;华利忠 ;刘茂军 ;张旭 ;邵国青 ;鲍恩东 《农业科学与技术》2014,(6):918-921
[目的]2012年3月至12月从江苏泰州某猪场采集303份鼻拭子样品,利用巢式PCR和荧光定量PCR比较检测猪肺炎支原体的感染情况。[方法]采集7、14、21、28、30和35日龄的猪的鼻拭子,4℃浸泡于PBS过夜,TIANamp?细菌DNA提取试剂盒提取DNA。然后进行Mhp183的荧光定量PCR及P36的巢式PCR检测。[结果]通过巢式PCR检测,12.5%(38/303)份样品为猪肺炎支原体阳性,用荧光定量PCR检测,50.2%(152/303)的样品为阳性。两种方法检测均为阳性的样品为22份,占7.3%,两种方法检测均为阴性的样品为127份,占41.9%。两种检测方法的感染模式相同,均在7日龄和35日龄的小猪中感染率最高,巢式PCR的感染率分别为15.6%和18.4%,荧光定量PCR的感染率分别为53.1%和56.6%。[结论]两种PCR方法均适用于猪场感染状态的检测。 相似文献
12.
猪肺炎支原体套式PCR检测方法的建立及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
根据GenBank中登录的猪肺炎支原体P36(L-乳酸脱氢酶)全基因序列,设计合成了2对引物,建立套式PCR方法。运用该方法对猪肺炎支原体不同菌株培养物进行了扩增,并对经肺内免疫猪支原体肺炎活疫苗后支气管肺泡灌洗液进行了检测。结果表明,不同菌种均能扩增出427 bp的目的条带,而其他病原菌未出现特异性扩增条带。建立的套式PCR方法检测猪肺炎支原体的最低检测限度为10个CCU(颜色变化单位)。支气管肺泡灌洗液检测结果表明,经肺内免疫的猪支气管肺泡灌洗液扩增结果均为阳性。 相似文献
13.
猪肺炎支原体(Mhp)是引起养猪企业损失的重大猪呼吸道疾病,而黏附因子P97蛋白是Mhp发病的主要致病因素。为了解P97蛋白对猪支原体肺炎致病机理,本综述分析了国内外关于猪肺炎支原体P97蛋白的研究论文,从黏附因子P97的分子结构、免疫原性,以及P97蛋白基因工程疫苗研发等多方面进行归纳,阐述了P97的研究现状。P97蛋白能够刺激机体产生特异性抗体,具有非常好的免疫原型,是构建重组蛋白疫苗的重要候选蛋白,能够为建立猪肺炎支原体实验室诊断和生物工程疫苗研制提供参考。 相似文献
14.
15.
研究旨在获得猪肺炎支原体山西地方株,以期补充猪肺炎支原体山西地方株的菌株信息,为山西猪支原体肺炎的诊断及防治提供理论依据。将具有猪支原体肺炎典型病理特征的肺脏剪成米粒大小,放入KM2液体培养基,盲传培养后在固体培养基中纯化培养,用16S rRNA和种特异性基因P36进行PCR检测,对P36扩增结果测序与登录NCBI GenBank的猪肺炎支原体进行同源性比较,并构建系统发育树。结果显示,液体培养基变色提示培养基中含有猪肺炎支原体;菌落中间暗、边缘光滑,呈典型的"煎蛋样",大小0.2μm左右,生理生化特性符合支原体特性;16S r RNA和P36基因经PCR扩增确认分离菌株为猪肺炎支原体,并命名为JZ01株。JZ01株是从山西最近发病且致病性严重的猪肺中分离而来,其不仅能成功适应人工培养基,而且传代生长良好,为潜在的疫苗菌株。 相似文献
16.
《农业科学与技术》2014,(11)
P65蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,与其他支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。本实验应用原核表达的重组P65蛋白免疫小鼠,用Mhp全菌蛋白和P65蛋白筛选,制备了1株特异性单克隆抗体3G12。鉴定结果表明,该株单克隆抗体可与P65蛋白和Mhp全菌蛋白反应,采用间接ELISA法测得3G12细胞培养上清与P65蛋白反应抗体的效价为1∶12 800,与全菌蛋白反应抗体的效价为1∶3 200;3G12腹水与P65蛋白反应的抗体效价为1∶4 000 000以上,与168全菌蛋白反应的抗体效价为1∶20 000以上,细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体。本研究成功获得到1株针对P65和Mhp全菌的单克隆抗体,为猪肺炎支原体致病机制和检测方法的进一步研究提供了基础。 相似文献
17.
猪肺炎支原体与猪鼻支原体分离鉴定及鉴别检测 总被引：1，自引：0，他引：1
《河南农业科学》2017,(11)
为建立猪肺炎支原体与猪鼻支原体的鉴别诊断方法,对从河南省及周边地区猪场采集的患呼吸道疾病的猪只样品进行支原体的分离培养,针对猪肺炎支原体与猪鼻支原体设计了2对引物,扩增片段大小分别为480 bp和360 bp,对所分离纯化的病原微生物进行了菌落形态观察及分子鉴定。结果显示,分离的病原微生物为支原体,菌落呈典型的"煎蛋样"特征;通过单一PCR扩增反应,分别得到了猪肺炎支原体与猪鼻支原体相应的目的扩增片段。表明分离到了猪肺炎支原体与猪鼻支原体。在单一扩增的基础上,建立了猪肺炎支原体与猪鼻支原体二重PCR反应方法,可同时得到2条目的条带,与单一PCR扩增结果一致。表明建立的二重PCR方法可用于猪肺炎支原体与猪鼻支原体的同时检测和鉴别诊断。 相似文献
18.
19.
[目的]研究1株米根霉菌体对胰酶粉浸提液中色素的生物吸附作用。[方法]分别考察菌体预处理、菌体添加量、菌球吸附粒径、溶液初始值、吸附时间、温度等对生物吸附脱色的影响。[结果]米根霉菌体对胰酶粉浸提液中色素的最佳脱色条件为：0.2 mol/L NaOH溶液热处理20 min,添加菌体量2%,菌体粒径0.6 mm,溶液初始pH值6.0,吸附脱色时间160 min、10℃,脱色率在89.5%以上,激肽原酶活性损耗小。[结论]米根霉菌体对胰酶粉浸提液脱色效果显著。 相似文献
20.
猪肺炎支原体斑点杂交检测方法的建立及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立猪肺炎支原体斑点杂交检测方法,并用于猪肺样品的检测,根据GenBank中登录的猪肺炎支原体(Mhp)P36基因序列,设计并合成一条地高辛标记的DNA寡核苷酸探针。进行Mhp斑点杂交反应,建立最佳反应体系和反应条件,对该方法进行特异性和敏感性试验,并采用最佳反应体系和反应条件在尼龙膜上对猪肺组织样品进行检测。结果表明,该检测方法可有效从可疑病料的猪肺组织中检出Mhp感染,检出率为39.5%。本研究建立的Mhp斑点杂交检测方法快速、敏感、特异,对Mhp的临床检测具有较好的应用价值。 相似文献