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1.
鸡传染性支气管炎病毒地方流行株的分离与鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
从山西各地区疑似鸡传染性支气管炎(IB)的病料中,分离到5株鸡传染性支气管炎病毒(IBV)分离株,并对分离病毒进行了病毒形态观察、对鸡新城疫病毒(NDV)的干扰、鸡胚致病性试验、动物回归试验、血凝特性试验、病毒理化特性测定等生物特性鉴定及IBV N基因特异性片段的检测.电镜观察,可见直径为60～120 am,有囊膜及纤突呈冠状排列的病毒粒子;对NDV有明显的干扰作用;分离株的传代物均有明显的致鸡胚矮小化作用;动物回归感染死亡鸡肾脏病变明显,表现肾脏肿大、花斑肾现象,输尿管内充塞大量尿酸盐;无直接血凝性,经1%胰酶处理后可凝集鸡红细胞;分离株对乙醚和氯仿敏感;采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对分离毒株进行扩增,结果均扩增出特异N基因核酸片段. 相似文献
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传染性支气管炎病毒(IBV)干扰鸡新城疫病毒(NDV)在鸡胚上的生长现象已被作为一种诊断传染性支气管炎的方法。用IBV—NDV干扰试验对十五株来自疑为传染性支气管炎鸡群的病毒进行分析:接种IBV10小时后再接种NDV La Sota毒株,后通过血凝(HA)试验测定,有八株能干扰La Sota在鸡胚上的生长。 IBV这种干扰作用具有特异性,因为它可被相应的IBV抗血清所抑制。此种方法证明干扰作用是敏感的。在一些IBV继代代数少的情况下、虽然IBV不引起鸡胚产生病变,但可干扰NDV的HA活性。此外,血清学反应IBV阴性的样品不能干扰NDV在鸡胚上的生长。从以上情况看,对于分离IBV野毒来说,IBV—NDV干扰试验显然是一种改进的诊断方法。 相似文献
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为观察鸡传染性支气管炎病毒（IBV）HN99株对新城疫病毒（NDV）增殖的干扰作用,该试验采用不同浓度的IBV标准株M41和地方株HN99与鸡新城疫病毒（NDV）分别按不同接种顺序同胚增殖,利用病毒血凝试验（HA）测定NDV的效价,观察IBV对NDV的干扰作用,从而为检测IBV地方株HN99提供方法,也为同胚增殖两种病毒提供一系列的数据参考。试验结果表明,鸡传染性支气管炎病毒地方株HN99对NDV的干扰作用与其浓度和接种顺序有关。 相似文献
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鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离及其N基因片段的克隆和测序 总被引：4，自引：0，他引：4
通过形态学观察、动物回归试验、鸡胚接种试验、病毒干扰试验以及血凝试验分离鉴定了1株肾型鸡传染性支气管炎病毒(IBV)。在透射电子显微镜下，病毒粒子多呈球形，直径为80～120nm，有囊膜，表面有冠状突起。鸡胚连续盲传至第1～2代，开始出现死亡或出现侏儒胚；分离株可显著干扰NDV在鸡胚中的增殖；病毒尿囊液无凝血活性，但经5g／L胰蛋白酶处理后。能够凝集10mL/L的鸡红细胞。利用RT—PCR技术对分离株的N基因进行了扩增，经克隆、序列测定和分析比较，证实分离株为肾型IBV，命名为AH3—04株。 相似文献
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从山西疑似IB的病料中,分离到1株IBV分离株,该分离株在电镜下可见到直径为60～120nm,有囊膜及纤突呈冠状排列的病毒粒子;对NDV有明显的干扰作用;分离株的传代物都有明显的致鸡胚矮小化作用;动物回归感染死亡鸡肾脏病变明显,表现肾脏肿大、花斑肾现象,输尿管内充塞大量尿酸盐;无直接血凝性,经1%胰酶处理后可凝集鸡红细胞;分离株对乙醚和氯仿敏感;采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对分离毒株进行扩增,结果均扩增出特异N基因核酸片断,以上结果表明该分离病毒为IBV.将该分离株制备灭活苗进行免疫试验,试验保护率为100%,结果显示了该分离株具有良好的免疫效力. 相似文献
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从哈尔滨市某肉鸡养殖场疑似传染性支气管炎的病死鸡中分离到1株肾型IBV,并对其进行鸡胚矮小化、血凝性、电镜下特征、新城疫干扰试验、致病性等生物学鉴定和N基因的RT-PCR鉴定。结果表明,该病毒分离株在鸡胚上传至第四代(F)4开始出现死亡或侏儒胚;病毒不凝集鸡红细胞;透射电镜下可见多呈球形、直径约80～120nm的病毒粒子,具有冠状病毒的典型形态特点;该病毒可干扰新城疫LaSota株在鸡胚中的增殖;将分离毒第4代尿囊液接种于6日龄雏鸡,7d后开始出现死亡,死亡率高达67%(6/9),病死鸡剖解后可见肾脏明显肿大、苍白,具有传染性支气管炎的典型病变;分离毒第5代尿囊液经N基因特异性RT-PCR获得大小约438bp的目的片断。初步确定所分离病毒为肾型IBV。 相似文献
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表达鸡传染性支气管炎病毒S基因的重组新城疫病毒构建 总被引：1，自引：0，他引：1
为构建以新城疫病毒(NDV)为活毒载体表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S基因的重组病毒,本研究利用RT-PCR技术,以IBV的Massachusetts41株RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到IBV S基因(3534bp),将其插入到NDV感染性克隆pBRN-FL中,构建了含有IBV S基因的重组NDV cDNA克隆pBRN-FL-IBVS。利用磷酸钙转染法,在辅助质粒pBS-NP、pBS-P和pBS-L的共同作用下,将pBRN-FL-IBVS转染表达T7聚合酶重组痘病毒感染的BSR细胞,救获重组NDV(rL-IBVS)。采用RT-PCR检测接种重组病毒的鸡胚尿囊液,结果表明rL-IBVS中含有相应外源基因。IFA试验表明,rL-IBVS可与鸡抗IBV的高免血清发生特异性反应,证明S蛋白在感染的BSR细胞中得到表达。其鸡胚平均致死时间、脑内致病指数和静脉内致病指数等指标显示rL-IBVS保持了亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病力特性。本研究采用反向遗传操作技术构建了表达IBV S蛋白的重组NDV,为进一步研制IBV和NDV的重组基因工程活载体疫苗奠定了基础。 相似文献
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试验旨在观察鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）和鸡新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）之间的增殖干扰现象,分析在免疫过程中两种疫苗存在的免疫干扰,为确定疫苗的免疫程序提供依据。采用完全随机试验设计,选取10日龄鸡胚尿囊腔接种不同浓度的IBV、NDV以及不同浓度混合的IBV和NDV,收集尿囊液测定其血凝效价（HA）;用不同浓度的IBV、NDV以及不同浓度混合的IBV和NDV分别免疫BALB/c小鼠及SPF雏鸡,收集血清,间接酶联免疫吸附法（ELISA）和血凝抑制（HI）试验测定IBV和NDV的抗体效价及抑制效价。结果表明,同胚培养时,无论先接种IBV后接种NDV还是先接种NDV后接种IBV或IBV和NDV同时接种,IBV对NDV均有干扰作用,而NDV对IBV没有干扰作用;接种IBV和NDV的小鼠,其产生IBV和NDV的抗体效价均低于单独免疫组,免疫的次序及免疫间隔时间对IBV和NDV的抗体效价均有影响,IBV对NDV的免疫效果具有较大的干扰作用。不同针混合免疫方式能提高IBV和NDV的抗体效价;接种IBV和NDV的雏鸡,免疫次序及免疫相隔时间对IBV和NDV的抗体效价均有影响,IBV对NDV的免疫效果具有较大的干扰作用;雏鸡和小鼠免疫血清HI试验数据表明,免疫次序及免疫间隔时间对IBV和NDV抗体的产生均有影响,但对NDV抗体的产生影响更明显,随着免疫间隔时间的增加,IBV和NDV的抗体水平呈增加趋势,雏鸡比小鼠更能敏感地反映出IBV对NDV的免疫干扰作用。混合注射时IBV和NDV的抗体水平均降低,IBV对NDV的免疫效果有干扰作用。因此,在同胚培养、小鼠及雏鸡的免疫中,IBV对NDV有干扰作用,而NDV对IBV无干扰作用。混合接种时IBV和NDV抗体效价均下降,IBV对NDV的免疫效果有干扰作用。免疫次序及免疫间隔时间对IBV和NDV抗体的产生均有影响,但随着免疫间隔的增加,IBV和NDV的抗体水平呈增加趋势。 相似文献
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鸡新城疫病毒(NDV)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)均是危害养鸡生产的因素之一,本研究分别以SPF鸡胚发育情况和抗体滴度评价环糊精包合碘杀灭NDV和IBV的效果。以聚维酮碘(1∶626)作为对照药物,环糊精包合碘设计1∶500、1∶1 000、1∶1 500 3个试验浓度,以NDV和IBV攻毒鸡胚作为负对照。结果表明,NDV病毒对照组平均抗体滴度为8.4,试验组均为0;IBV病毒对照组均出现侏儒胚现象,试验组均未出现侏儒胚;随环糊精包合碘浓度的增大,鸡胚重量有降低的趋势。本研究表明环糊精包合碘能够完全杀灭NDV和IBV,其对鸡胚的刺激性低于聚维酮碘。 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒CQ/01/2004株的分离与鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
2004年从重庆某肉用鸡场疑似鸡传染性支气管炎的病鸡中采集病料，按常规处理后接种9～10日龄鸡胚，通过鸡胚连续传代培养3代，并对该分离毒株的鸡胚致病性、血凝性和NDV的干扰特性进行检测．同时进行了动物回归试验。结果表明，该分离株具有IBV感染特征，可使鸡胚胚体出血、蜷缩、矮化；该分离毒株无直接血凝性，对NDV有明显的干扰作用；动物回归试验中有75％的感染鸡在10d内发病或死亡。剖检病死鸡可见肾苍白、肿胀，肾小管内充塞大量尿酸盐，支气管有出血点、有大量粘液。采用反转录．聚合酶链式反应（RT-PCR）技术对CQ／01／2004的纤突蛋白S1基因进行扩增、克隆和序列测定，结果表明该基因具有IBVSl基因的共有分子特征，将测序结果提交GenBank进行同源性检索，发现分离株CQ／01／2004和J株S1的同源性最高，核苷酸同源性为94％，氨基酸同源性为89．4％，与M41的核苷酸同源性为80．6％，氨基酸同源性为78．0％。试验结果表明，分离的病毒株CQ／01／2004为鸡传染性支气管炎病毒。 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒(IBV)具有不同致病特性,将IBV XDC-2株接种9日龄SPF鸡胚培养,可引起鸡胚死亡和出现侏儒胚,病毒EID50达5×10-5.33/mL。将IBV XDC-2株接种18日龄SPF鸡,饲养观察14 d,病鸡临床症状表现为:精神沉郁,羽毛凌乱,双翅下垂,轻微腹泻,多数拉白色水样稀粪。病死鸡出现肾肿大、呈花斑状、大量尿酸盐沉积。鸡发病率为100%,死亡率为25%。死亡鸡肺脏、肾组织制作组织切片,发现病理变化明显,主要为:肾小管扩张,上皮细胞呈玻璃样变性,部分管腔内可见坏死脱落之上皮细胞,于肾间质可见大量单核细胞浸润,肾间质有充血、出血现象;肺内动脉、毛细血管充血,淋巴细胞浸润。死亡鸡肺脏、肾组织接种鸡胚分离病毒,RT-PCR检测结果为阳性,表明该分离株为鸡传染性支气管炎病毒,具有很强的嗜肾性。 相似文献
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从黑龙江省绥化市某养鸡场疑似鸡传染性支气管炎的鸡群中采集病料,经鸡胚传代、电镜观察、生物学特性和分子生物学鉴定以及动物回归试验,表明该分离株具有明显的鸡传染性支气管炎病毒特征,具有鸡胚出现卷曲、出血、发育延迟等作用;对新城疫病毒有明显的干扰作用;动物回归试验导致未免疫鸡出现明显的感染症状,剖检可见明显的肾脏肿胀、尿酸盐沉积现象,同时可见呼吸道有出血现象。对该毒株的N基因进行扩增,并将其序列与NCBI的参考毒株的N基因进行序列对比,发现其与国内的分离株SC和N毒株的N基因具有较高的同源性,为97.6%;与国外参考毒株和国内的疫苗株同源性较低,为84.8%。表明分离的病毒为鸡传染性支气管炎病毒。 相似文献
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鸡新城疫病毒与传染性支气管炎病毒同胚培养的试验研究 总被引：2，自引：1，他引：1
将鸡新城疫病毒（NDV）和鸡传染性支气管炎病毒（IBV）按一定的稀释比例等量混合接种9~10日龄SPF鸡胚,让其在同一鸡胚中增殖（简称同胚培养）。试验结果表明,用5倍稀释的ND-Lasota病毒液与 5000倍稀释的IBH120病毒液等体积混合后尿囊腔接种鸡胚,能在同一鸡胚中正常增殖,接种后96 h收毒,用红细胞凝集试验（HA）测得NDV、IBV两种病毒的血凝价分别为11 log2和12 log2,不低于各自病毒单独增殖的HA滴度,病毒的增殖基本趋于平衡。同时也证实了在合适的培养条件下,IBV对NDV的复制不会产生干扰。 相似文献
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We investigated the interaction between Newcastle disease virus (NDV) and Escherichia coli in cell cultures, embryonated eggs, and 8-wk-old chickens. We measured the interactions on the basis of bacterial adherence and NDV hemagglutination titer in chickens, chicken embryos, and chicken embryo cell culture. Depending on the inoculation order of E. coli, a significant alteration of the growth of NDV was observed in both chickens and chicken embryos. When certain strains of E. coli were given before NDV exposure, the virus titers were lowered. In chickens, the mean virus titer was significantly (P < 0.05) lowered in the crop, the proventriculus, the gizzard, and the jejunum. However, there were no significant differences (P < 0.05) between the two groups for NDV titers in the duodenum, ileum, and cecum. In chicken embryos, when E. coli serotypes O78 and O119:B14 were inoculated before NDV exposure, the mean NDV titers were significantly (P < 0.5) lowered. However, there were no significant differences (P < 0.05) in NDV titer between the two groups when E. coli serotypes O78:K80:NM and O1ab:K NM were inoculated 24 hr before NDV exposure. When NDV was given prior to E. coli exposure, NDV titer was higher in both chickens and chicken embryos. In chickens, when NDV was given 48 hr before E. coli inoculation, NDV was detected in the proventriculus, gizzard, jejunum, ileum, and cecum, whereas no virus was detected in the control groups (NDV only). In the crop, NDV was detected at a significantly (P < 0.05) higher titer in the E. coli-inoculated group when compared with the control group that received NDV alone. In chicken embryos, virus titer was significantly (P < 0.05) higher when NDV was given 24 hr before E. coli inoculation for all three NDV strains used (Ulster and V4 strains). Adherence of E. coli to chicken embryo kidney (CEK) cells was significantly higher (P < 0.05) when the CEK cells were infected first with NDV and then by E. coli. The mean bacterial count per microscopic field in NDV-uninfected monolayers was eight compared with 112 for the NDV-infected monolayers. In approximately 10% of the fields in NDV-infected monolayers, the bacteria were too numerous to count. 相似文献
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Infectious bronchitis was diagnosed in 3-to-4-week-old pullets from an outbreak in a commercial flock in California. The disease was characterized by head swelling, watery discharge from the eyes and nostrils, and urates in kidneys. Mortality ranged from 1.8% to 12.5% per week. The isolation of a coronavirus from a suspension of pooled kidneys from clinically ill chickens at the fifth passage in 10-day-old chicken embryos, gross and histologic renal lesions, and seroconversion by enzyme-linked immunosorbent assay in inoculated birds suggested that the virus isolated was a nephrotrophic strain of infectious bronchitis virus (IBV). The virus isolate was found to be a previously unrecognized serotype, based on virus neutralization tests performed in embryonated chicken eggs. Nephropathogenicity of the IBV isolate was confirmed by inoculation of the viral isolate into specific-pathogen-free chicks and demonstration of renal lesions. The isolation of nephrotropic strains of IBV has not been reported previously from poultry in California. 相似文献
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The interference phenomenon of infectious bronchitis virus (IBV) with growth of Newcastle disease virus (NDV) in embryonating chicken eggs (ECE) was used as a diagnostic method. Fifteen field isolates obtained from presumptively infectious-bronchitis-affected chickens were analyzed by the IBV-NDV interference test. Eight isolates were capable of interfering with the growth of the La Sota strain of NDV, as measured by hemagglutination (HA) activity when IBV was inoculated 10 hr before NDV into ECE. The interference was considered specific for IBV, because it could be eliminated by adding homologous anti-IBV serum. The sensibility of this method could be demonstrated, because in some cases low-passage levels of IBV isolates showing HA interference ability were not capable of producing lesions in ECE. Furthermore, serologically negative IBV samples did not interfere with NDV growth. From these results, the IBV-NDV interference test appears to be a potential diagnostic alternative for identifying IBV field isolates. 相似文献