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1.
以巨竹叶片提取的基因组DNA为材料,用引物UBC810（序列为GAGAGAGAGAGAGAGAT）研究了PCR反应体系的主要成分、退火温度及循环次数对该种植物ISSR扩增结果的影响。结果表明,20μL的反应体系含40ng模板DNA、0．6μmol·L^-1引物,1．0UTaqDNA聚合酶,2．5mmol·L^-1 Mg^2＋,0．25mmol·L^-1dNTPs,1×Buffer。PCR扩增程序为：94℃预变性5min;94℃变性45s,54．5℃复性30S,70℃延伸90S,循环40次;72℃延伸10min,置4c℃保存。 相似文献
2.
甜菜ISSR-PCR反应体系的优化 总被引：3，自引：0，他引：3
以甜菜基因组DNA为模板,研究了ISSR的主要影响因素,建立一套适宜于甜菜的ISSR优化反应体系及程序,并对该优化体系进行了验证.实验结果表明:①优化的ISSR扩增的反应体系为:20μL的反应体积中包括2.5mmol/L MgCl2,0.25mmol/L dNTPs,1.5U Taq DNA聚合酶,0.5μmol/L引物,10×PCR Buffer 2μL,100ng DNA模板.②优化的PCR扩增条件为:94℃预变性3min,然后94℃变性30s,45℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环后,72℃延伸5min.③利用优化的反应体系仅用1条引物就能将10份甜菜材料区分开. 相似文献
3.
通过单因子、双因子实验研究了胡椒ISSR-PCR反应体系中热参数和5个主要成分,即退火温度、循环数、变性时间、退火时间、延伸时间以及Mg2+、dNTPS、引物、模板DNA、Taq DNA聚合酶对扩增结果的影响,建立了适合胡椒ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在25 μL反应体系中,内含2 mmol/L Mg2+、200 μmol/L dNTPS、1×PCR Buffer、2 μmol/L引物、100 ng模板、1 U Taq DNA聚合酶。扩增程序为94℃预变性3 min, 94℃变性120 s,复性60 s,72℃延伸 3 min,循环35个,结束后72℃延伸7 min。这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术进行胡椒种质鉴定、遗传多样性分析奠定了基础。 相似文献
4.
为了建立显性多子房小麦RAPD反应的最佳体系,保证反应结果的稳定性和可靠性,降低反应成本,在相同PCR扩增程序(94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min,45个循环,72℃延伸10min,4℃保存)下,对多子房小麦基因组DNA的RAPD扩增体系各参数进行比较筛选,创建其最佳反应体系为:25μl反应体系中,模板DNA50ng,10×PCR缓冲液2.5μl,dNTPs0.2mmol/L,Taq酶1u,Mg2+浓度为2.0mmol/L,ddH2O12.17μl,随机引物10ng。 相似文献
5.
芒果ISSR反应体系的建立与优化 总被引：2，自引：0，他引：2
运用L16(45)正交设计对芒果ISSR反应的5个因素,即DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度在4个水平上进行优化试验,通过不同反应体系扩增效果比较,建立优化的芒果ISSR反应体系,即25μL的PCR体系中含有DNA模板25 ng、Mg2+浓度为1.5 mmol/L、dNTPs 0.3 mmol/L、引物0.32μmol/L、Taq DNA聚合酶1.25 U。这为进一步运用ISSR标记在DNA分子水平上对芒果种质资源进行分析奠定基础。 相似文献
6.
大豆SSR检测体系的优化研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以大豆为试材,研究了大豆SSR检测体系中PCR扩增的各主要成分对检测结果的影响,确立了适宜的退火温度和反应体积,改进了PCR扩增程序和银染方法,进一步优化了适用于大豆的SSR检测体系.优化后的SSR反应体系为:10×Buffer 1.00μL、2.00 ng/μL模板DNA、0.15μmol/L SSR引物、150.00μmol/L dNTPs、0.50 U Taq酶、2.00mmol/L Mg2 ,加ddH20至终体积10.00μL.优化的PCR扩增程序为:94℃预变性3 min;94℃变性25s,47℃退火25s,72℃延伸30s,共35个循环;72℃延伸5min,4℃保存.优化后的检测体系更为经济有效. 相似文献
7.
利用正交设计试验,对影响ISSR-PCR的Mg~(2+)、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶和模板DNA 5个因素进行优化试验.结果表明:25μL ISSR-PCR反应体系中各因素的最佳条件为Mg~(2+)2.5 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.2μmol/L、Taq DNA聚合酶1.0 U,模板DNA 40 ng.通过对狗牙根ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火试验,得到引物UBC881的最佳退火温度为50.5℃.该体系在24个狗牙根种质中获得较好的扩增结果,该优化体系为今后利用ISSR技术进行狗牙根属种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础. 相似文献
8.
以假臭草叶片为材料，对影响其随机扩增多态DNA(RAPD)反应的各因素进行优化，建立了假臭草RAPD的优化反应体系和程序，即在10 μL反应体系中，5 ng(/10 μL)模板DNA，1.0 μmol/L随机引物F15，150 μmol/L dNTPs，2.0 mmol/L Mg2+，1.0 U Taq DNA聚合酶；扩增程序为95℃预变性4 min，95℃变性40 s，36℃退火40 s，72℃延伸1 min，10个循环，后94℃变性30 s，35℃退火30 s，72℃延伸1 min，35个循环，72℃ 相似文献
9.
针对小麦黄花叶病毒(WYMV)和中国小麦花叶病毒(CWMV)在症状、传播途径、发生规律等方面高度相似、难以用常规手段鉴定的问题,根据两种病毒基因序列的异同点设计了三条引物CWWY-R2、CW1-F2和WY1-F2,以植物总RNA为模板、CWWY-R2为引物反转录合成cDNA.通过优化建立了一种同步检测两种病毒的反应体系:cDNA1.6 μL,引物(10 μmol·L-1)各0.4 μL,10×PCR Buffer(不合Mg2+)2μL,dNTPs(10 mmol·L-1 each)0.4 μL,Taq DNA聚合酶(5U·μL-1)0.8μL,MgCl2(25 mmol·L-1)0.8μL,ddH2O 13.2 μL,合计20 μL; PCR反应条件:94 ℃预变性5 min,94℃ 50 s,50℃50 s,72℃90 s,共30个循环,72℃延伸10 min.WYMV和CWMV的PCR扩增预期目的片段分别为508和918 bp.利用该方法对江苏高邮、扬州和大丰的样本进行检测,它们分别为WYMV、WYMV、CWMV单一侵染,证明该方法准确性较高,可用于两种病害同步检测. 相似文献
10.
大豆ISSR-PCR反应体系的优化 总被引：3，自引：0，他引：3
以黑龙江省大豆为材料,利用正交试验设计,对大豆ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素(Mg2+、引物、dNTPs、模板DNA量、Taq酶量)在4个水平上进行体系优化.结果确定了大豆ISSR-PCR反应的最佳体系(25 μL)为:Mg2+浓度1.85 mmol·L-1、dNTPs浓度1.2 mmol·L-1、引物浓度1.2 μmol·L-1、模板DNA60 ng、Taq酶量0.7 U.利用该最佳体系,选取引物855对25份材料进行扩增,以验证该体系的稳定性.建立了适于大豆的ISSR-PCR反应体系,为利用ISSR标记技术开展黑龙江省大豆遗传多样性分析提供了依据. 相似文献
11.
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马铃薯SSR-PCR体系的优化与建立 总被引：3，自引：0，他引：3
以马铃薯叶片DNA为模板,采用单因素试验的方法,对影响马铃薯SSR-PCR反应体系的主要成分模板DNA、dNTP浓度、引物浓度、Mg2+浓度、Taq酶浓度及退火温度进行了优化,并建立最优化的马铃薯SSR扩增反应体系。结果表明:在20μL反应体系中,模板DNA用量为60 ng,dNTP为0.3125 mmol/L,引物浓度为2.4pmol,Mg2+为1.5 mmol/L,Taq酶为0.5 U,筛选各引物最适宜的退火温度,经2.0%琼脂糖凝胶电泳检测,扩增条带清晰,优化后的SSR反应体系稳定性好,可用于马铃薯遗传多样性分析。 相似文献
13.
茶树ISSR-PCR反应体系的建立 总被引：32，自引：3，他引：29
通过优化影响茶树 ISSR-PCR 的主要参数,确立了适用于茶树的 ISSR 反应体系和扩增条件。结果表明在 20 μl 反应体系中,模板 DNA、引物、Mg++、dNTP 和 Taq DNA 聚合酶五种主要成分的最适浓度分别为 10ng、150 nmol/L、1.5 mmol/L、150 μmol/L、0.5 U。在扩增过程中,引物的适宜退火温度比其 Tm 值平均高 4.5℃,扩增出足量产物至少需要 30 个热循环。利用该优化反应体系和扩增条件,对 13 份不同茶树种质资源进行ISSR-PCR 扩增,扩增产物的多态性为 77.6%。引物 TRI18 构建的 ISSR 指纹图谱,可以区分 13 份茶树资源中的 12 份,分辨率达 92.3%。 相似文献
14.
以中粒种咖啡部分种质为试材,采用U25（55）均匀设计表,对影响ISSR和RAPD标记的模板DNA、Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶和引物浓度5个因素进行优化,分别建立适合于中粒种咖啡ISSR-PCR和RAPD-PCR标记的反应体系。结果表明：2种标记的反应体系相似,20 μL的反应体系中含DNA模板20 ng,Mg2+ 1.5 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L,Taq酶1.25 U,引物0.6 μmol/L。利用所确立的体系对13份中粒种咖啡种质进行扩增,结果条带清晰明亮,多态性好 相似文献
15.
茶树RAPD反应系统和扩增程序优化 总被引：23，自引：3，他引：20
以龙井43为材料，使用国产PCR仪，对茶树RAPD分析中影响PCR扩增结果的因素进行了研究，确定了茶树RAPD的最适反应系统和扩增程序，即在25μl反应体系中，含25～50ng模板DNA、2mmol／LMgCl2、各0．2mmo／LdNTPs、0．2μmol／L引物和0．5～1．0UTanDNA聚合酶；扩增程序为：94℃预变性180s，94℃变性60s，38℃退火90s，72℃延伸120s，共进行40～45个循环，最后72℃延伸300～600s，这样可以取得较好的扩增结果。 相似文献
16.
为了建立适合黎药胆木的PsbA-trnH-PCR体系来研究不同地理居群胆木遗传多样性,本研究以植物基因组试剂盒法提取胆木基因组DNA为模板,采用单因素实验和正交试验对PsbA-trnH-PCR过程中的关键影响因素进行优化,并对PsbA-trnH-PCR产物进行测序鉴定。结果表明,最佳PsbA-trnH-PCR反应体系(25μL)为:Taq酶1.0 U,dNTPs 0.4 mmol/L,Mg~(2+)0.75 mmol/L,引物0.15μmol/L,模板20 ng,10×PCR Buffer(不含Mg~(2+))2.5μL;采用该最佳体系对胆木基因组DNA进行PCR扩增,获得扩增产物,经单向测序获得了胆木PsbA-trnH部分序列;并建立了稳定的PsbA-trnH-PCR体系,为胆木的药材鉴别及其遗传多样性研究奠定了基础。 相似文献
17.
为探索甘薯最佳TD-SSR-PCR体系,利用L16(43)正交设计研究2×PCR Mix、引物、模板DNA等主要影响因素的适宜浓度,并在此基础上对扩增程序和聚丙烯酰胺凝胶电泳上样量进行优化。结果表明,优化后的TD-SSR-PCR反应体系包括:10μL 2×PCR Mix、100 ng模板DNA、0.4μmol/L引物,1μL甘油,总体积20μL;优化后的扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性45 s、Tm+5℃~Tm-5℃(每循环退火温度下降0.5℃,Tm选用一对引物中的较小Tm值)退火30 s(退火时间因扩增片段大小而异)、72℃延伸1 min共20个循环,94℃变性45 s、Tm-5℃退火30 s、72℃延伸1 min共15个循环,最后72℃延伸7 min,4℃保存;聚丙烯酰胺电泳上样量以1.5~2μL为宜。在此条件下,利用引物Z37对10份甘薯材料进行PCR扩增,得到的条带清晰、多态性高,表明此条件适用于甘薯的TD-SSR-PCR反应体系。 相似文献
18.
以蝴蝶兰嫩叶提取的DNA为材料,蝴蝶兰SRAP反应体系中的重要参数Mg2+、Taq酶、模板DNA及随机引物,建立了一套适合蝴蝶兰基因扩增的SRAP反应体系：25 μL的反应体系中Mg2+浓度为2.0 mmol/L,Taq酶1.0 U,DNA模板40 ng,上下游引物0.8 mmol/L。该体系扩增条带清晰,重复性好,有望在蝴蝶兰属植物的遗传育种研究中运用。 相似文献