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1.
大麦黄矮病毒引起的小麦黄矮病是我国小麦生产上重要的病毒病。BYDV GAV株系是我国小麦黄矮病的主要病原,目前有关BYDV GAV编码蛋白质P1、P2和CP的功能研究鲜有报道,因此,研究P1、P2和CP的功能,可为深入研究BYDV GAV的致病机制奠定基础。通过Mega 7.0构建系统进化树,对BYDV GAV株系编码蛋白质P1、P2和CP的核苷酸序列进行同源进化分析;通过构建P1、P2和CP的YFP表达载体,转化GV3101农杆菌后浸润本氏烟,激光共聚焦显微镜观察确定3个蛋白质的亚细胞定位;构建BYDV GAV 5个编码蛋白质的双分子荧光互补载体,转化GV3101农杆菌后分别与P1、P2和CP共浸润本氏烟叶片,通过激光共聚焦显微镜观察确定这3个蛋白质与其他病毒蛋白质的体内互作情况;通过构建P1、P2和CP的马铃薯X病毒(PVX)异源表达载体,转化GV3101农杆菌后接种本氏烟,接种后5 d观察症状形成,并采集系统叶进行病毒积累量检测,研究3个蛋白质对该病毒致病性的影响。结果表明,BYDVs的4种分离物中,PAV与GAV在核苷酸水平上的亲缘关系最近。BYDV GAV编码的P1、P2和C... 相似文献
2.
小麦抗病基因类似序列BRG1的分离与功能分析 总被引：1，自引：0，他引：1
利用cDNA-AFLP技术筛选到1个在抗黄矮病的小麦-中间偃麦草易位系YW642中特异表达的小麦抗病基因类似序列(BYDV resistance-related gene1, BRG1)的基因片段。利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)和RT-PCR技术,从YW642中分离出BRG1基因全长cDNA序列,获得了一个通读的抗病同源基因cDNA序列,编码由645个氨基酸组成的蛋白质,包含1个NB-ARC保守结构域和3个LRR结构域,该蛋白属于nucleotide-site binding, leucine-rich repeats (NBS-LRR)家族。荧光定量或半定量RT-PCR表达分析表明,BRG1在抗病小麦易位系YW642叶片中优势表达,受BYDV的诱导,BYDV接种后48 h表达量最高,BRG1在感病小麦亲本中8601中表达量始终较低,随BYDV接种时间延长呈轻微的下调趋势;而且外源激素水杨酸(SA)与茉莉酸(JA)处理可上调该基因在YW642中的表达。利用病毒介导的基因沉默技术分析了BRG1基因的功能,结果表明该基因沉默的抗病小麦易位系YW642中BYDV相对含量增加,但未造成抗病性表型显著改变,说明该基因参与抗黄矮病反应,但不是小麦抗黄矮病重要基因。 相似文献
3.
TaSC (Triticum asetivum L. salt-tolerance related gene, GenBank 登录号为AY956330)是从小麦耐盐突变体RH8706-49 中克隆的高盐诱导表达的耐盐相关基因。以该基因编码的蛋白质TaSC 为诱饵, 运用分裂泛素酵母双杂交技术从小麦cDNA 表达文库中钓取互作蛋白质, 筛选到一个编码小麦未知功能蛋白质的基因(GenBank 登录号为AK336035), 命名为TaSCIP1 (TaSC interaction protein 1)。双分子荧光互补(BiFC)实验证实TaSCIP1 与TaSC 存在互作。该互作蛋白的分离有利于进一步研究TaSC 基因的耐盐机制。 相似文献
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利用BSMV-VIGS技术快速分析小麦TNBL1基因的抗黄矮病功能 总被引：1，自引：0，他引：1
小麦黄矮病是由蚜虫介导的大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarf virus, BYDV)侵染引起的小麦重要病害之一。利用cDNA-AFLP分析,筛选出在抗黄矮病小麦易位系YW642中特异表达的长度为292 bp的 cDNA片段,以此片段为启始序列,利用RACE和RT-PCR技术克隆出该基因的全长cDNA序列,推导该基因编码1个NBS-LRR蛋白,将其命名为TNBL1。本研究利用大麦条纹花叶病毒(BSMV)诱导的基因沉默(virus-inducing gene silencing, VIGS)技术,快速分析TNBL1是否参与小麦抗黄矮病反应。通过PCR添加酶切位点、定向酶切与连接,将TNBL1特异的292bp片段反向整合到BSMV-γ链的多克隆位点上,获得重组载体BSMV-γ: TNBL1as,体外转录BSMV-VIGS载体的3个组分(BSMV-TNBL1as、BSMV-α和BSMV-β),等量混合、摩擦接种到抗黄矮病的小麦易位系YW642幼苗叶片上,使YW642中TNBL1基因沉默,然后接种BYDV病原进行黄矮病抗性鉴定。结果表明,TNBL1基因沉默后的YW642对BYDV敏感、显现感病症状,其体内BYDV含量较未发生基因沉默的YW642中的明显增加,证明TNBL1基因是正向调控小麦抗BYDV反应的1个重要基因。 相似文献
5.
木薯MeAGPS1a基因编码的小亚基是淀粉合成关键酶AGPase的催化中心,前期研究发现MeSAUR1转录因子可结合MeAGPS1a基因启动子并调控该基因表达。采用酵母双杂交技术筛选MeSAUR1转录因子的互作蛋白,可进一步解析MeAGPS1a基因表达的分子调控网络。本研究构建了MeSAUR1的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-MeSAUR1,采用酵母双杂交技术从木薯cDNA文库中筛选MeSAUR1的候选互作蛋白,结果共筛选出31个阳性克隆。通过酵母双杂交点对点实验验证了候选互作蛋白MePP2C与MeSAUR1的互作关系,本研究结果有助于揭示Me SAUR1蛋白调控木薯淀粉合成的互作网络。 相似文献
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抗黄矮病小麦生物技术育种研究进展 总被引：3，自引：0，他引：3
由蚜虫介导的大麦黄矮病毒引起的小麦黄矮病,难以预测,一旦发病尚无药可治,有“小麦癌症”之称,近年有扩展和危害加重的趋势。综述了国内外在小麦近缘抗病基因发掘与利用、基于BYDV自身基因和蚜虫传毒蛋白基因进行生物技术、基因工程育种方面的进展,介绍了利用生物技术培育抗黄矮病小麦新种质与品种的情况,植物抗黄矮病基因遗传与定位的研究进展,提出了今后研究与发展方向。 ; 相似文献
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8.
为进一步探究CsKNAT3蛋白的功能与作用,本研究采用亚细胞定位,确定CsKNAT3能够定位于细胞核中作为转录因子发挥调节作用,同时采用原生质体瞬时转染确定CsKNAT3能够下调下游基因的表达,为转录抑制因子。研究通过酵母双杂交初步证实了CsKNAT3与CsATH1存在蛋白互作关系,双分子荧光互补进一步印证了这个蛋白互作,由于CsATH1是一个多效的植物发育调节因子,暗示CsKNAT3可能在植株发育过程中发挥重要调控作用。本研究对揭示KNOX家族蛋白调控植物形态建成分子机理具有重要意义。 相似文献
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携带抗黄矮病基因染色体的分离 总被引：10，自引：0，他引：10
抗黄矮病小麦一中间堰麦草异附加系Z2 (2n=44)携带一对完整的中间僵麦草染色体,用Z2作母本与普通小麦品种中8601杂交,获得杂种F1(2n=43=21Ⅱ+1I)。利用激光显微切割技术将F1花粉母细胞减数分裂中期I及后期I的呈单价体的中间僵麦草染色体分离出来,经去蛋白、Sau3AI酶切后,进行PCR体外扩增。结果表明利用激光显微切割可分离 相似文献
12.
抗黄矮病小麦种质的分子标记 总被引：10，自引：0，他引：10
应用基因组原位杂交技术分析了抗小麦黄矮病种质的遗传组成,研究表明小麦一中间但麦草部分双二倍体无芒中4(2n=56)具有40条小麦染色体、5对中间僵麦草染色体、3对小麦/中间僵麦草易位染色体,其中1对是罗伯逊氏易位染色体。结果表明无芒中4与远中5的遗传组成有明显差异,是两种不同类型的材料。抗黄矮病小麦种质F940418, T10 相似文献
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应用GISH与STS标记鉴定小麦-中间偃麦草抗黄矮病端体系 总被引：3，自引：3，他引：0
由大麦黄矮病毒引起的小麦黄矮病毒病是一个严重病害,至今在小麦属内还没有发现抗源。中间偃麦草2Ai-2染色体携带一个高抗黄矮病基因,对该基因的染色体臂定位将为制定抗病基因向小麦转移策略,筛选、开发特定的、与抗性连锁的分子标记的研究提供重要信息。本文对由小麦-中间偃麦草二体附加系Z6衍生的3个抗黄矮病端体系进行鉴定,通过分析端体的遗传构成、筛选与端体共分离的STS标记以确定端体在遗传上的染色体臂归属,从而明确BYDV抗病基因的染色体位置。以拟鹅冠草基因组[Pseudoroegneria strigosa (M. Bieb.) Löve,St]DNA为探针,中国春基因组(Triticum aestivum L., ABD) DNA作封阻分别对抗病亲本Z6及抗病端体系N530的根尖体细胞染色体进行原位杂交,结果表明,N530体细胞中有2个端体显示出与Z6中外源染色体2Ai-2短臂相似, 而与长臂不同的杂交信号。以小麦第2同源群的5个RFLP探针的DNA序列为基础,设计了6对PCR引物,对小麦-中间偃麦草二体异附加系、二体代换系和端体系进行扩增,结果表明,基于短臂探针psr126,psr131序列设计的2对引物,可在含有2Ai-2染色体及端体的抗黄矮病材料中特异扩增,而基于长臂探针psr112序列设计的1对引物,可在含有2Ai-2染色体的抗黄矮病材料中特异扩增,但不能在端体系进行特异扩增,证明外源端体为2Ai-2染色体的短臂。本研究不仅将黄矮病抗性基因定位于2Ai-2染色体的短臂上, 而且由RFLP探针psr126、psr131和psr112序列转化的标记STS126 (sequence tagged site) STS131和STS112还可分别作为追踪2Ai-2染色体短臂和长臂的分子标记,用于抗病易位系辅助选择。 相似文献
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The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to determine the concentration of barley yellow dwarf virus (BYDV) in leaves of spring wheat Triticum aestivum L. cv. ‘Fukuhokomugi’, Leymus angustus (Trin.) Pilger (Altai wild rye) and their F1 hybrids inoculated at the 2- to 3-leaf stage. The BYDV isolate “Cloutier” (serotype PAV) was used. The results showed that L. angustus confers immunity or strong resistance to the virus. Significant multiplication of the virus occurred in ‘Fukuhokomugi’ which expressed an intermediate level of tolerance to the disease under field conditions. The F1 haploid hybrids of ‘Fukuhokomugi’×L. angustus expressed a level of resistance almost equal to that of their wild parent, with a low concentration of virus appearing 16 days after inoculation and no more afterwards. The discovery of BYDV resistance in L. angustus and the expression of this character in the F1 hybrids provide new opportunities for the enlargement of the gene pool for BYDV resistance in wheat. 相似文献
15.
研究分子标记鉴定大麦抗黄矮病基因Yd2的有效性,可为Yd2基因在大麦抗病育种中的广泛应用提供快速有效的分子辅助选择工具。利用与Yd2基因紧密连锁的YLM、CAPS-Ylp和ASPCR-Ylp标记同时检测52份国内外大麦品种(系)与4份大麦F1杂种的Yd2基因型,同时结合生物学抗性检测的表型分析其有效性。通过对Yd2基因型已知的20份大麦品种(系)及4个F1杂种的Yd2基因型分析,表明YLM、CAPS-Ylp与ASPCR-Ylp标记可以有效判断大麦Yd2基因型。进一步用这3个标记检测32份Yd2基因型未知的大麦的基因型,鉴定出基因型为Yd2-/Yd2-的品种(系) 27份,基因型为Yd2+/Yd2+的品种(系) 5份。在回交育种的分子辅助选择实例中,从BC2F2世代中选出了16个基因型为Yd2+/Yd2+的单株。3个分子标记结合应用能够快速有效地鉴定大麦Yd2基因型,可用于Yd2基因回交育种中的大规模分子标记辅助选择。 相似文献
16.
J. Ovesná J. Vacke L. Kucera J. Chrpová I. Nováková A. Jahoor V. &#;ip 《Plant Breeding》2000,119(6):481-486
The inheritance of resistance to barley yellow dwarf virus (BYDV) was studied in the selected 24 spring and winter barley cultivars that showed a high or intermediate resistance level in 1994‐97 field infection tests. The polymerase chain reaction diagnostic markers YLM and Ylp were used to identify the resistance gene Yd2. The presence of the Yd2 gene was detected with both markers in all the resistant spring barley cultivars and lines from the CIMMYT/ICARDA BYDV nurseries. The results of field tests and genetic analyses in winter barley corresponded with marker analyses only when the Ylp marker was used. Genes non‐allelic with Yd2 were detected by genetic analyses and the Ylp marker in moderately resistant spring barley cultivars ‘Malvaz’, ‘Atribut’ and ‘Madras’, and in the winter barley cultivars ‘Perry’ and ‘Sigra’. Significant levels of resistance to BYDV were obtained by combining the resistance gene Yd2 with genes detected in moderately resistant cultivars. The utilization of analysed resistance sources in barley breeding is discussed. 相似文献
17.
A breeding programme was developed to obtain barley yellow dwarf virus (BYDV)-resistant winter genotypes using the Yd2 gene. The aim was to incorporate the Yd2 allele into the new high-yielding genotypes to release cultivars that allow barley cultivation in areas where BYDV is endemic. The resistant lines were developed using pedigree selection. An ICARDA resistant line (83RCBB130) carrying the Yd2 gene was crossed with three susceptible, high-yielding winter varieties and their F1 lines were either selfed or backcrossed to the matching susceptible parent. The best lines selected from subsequent selfing generations were evaluated in replicated trials in the presence or absence of BYDV, starting from F6 and BC1F5 to F8 and BC1F7 generations. Four genotypes with superior agronomic traits and BYDV resistance were selected. 相似文献
18.
D. Barloy C. Etienne J. Lemoine Y. Saint Ouen J. Jahier P.M. Banks M. Trottet 《Euphytica》2003,129(3):361-369
Barley yellow dwarf virus (BYDV) is one of the most important plant viruses in the world. Two sources of resistance to BYDV
derived from Thinopyrum intermedium were compared in wheat backgrounds. A source of resistance was confirmed in the partial amphiploid TAF46, the group 7 addition
line L1, and translocation TC14. The other source of resistance derives from the partial amphiploid Zhong 5 and is present
in the group 2 addition line Z6. Six ditelosomic addition lines have been derived from Z6. The resistance of genotypes derived
from Zhong 5 is more effective at reducing virus multiplication throughout plant growth than that of genotypes derived from
TAF46. The translocation line TC14, derived from TAF46 showed 30% plants escaping virus infection whereas all plants derived
from Zhong 5 were infected. This suggests that the two sources of resistance are associated with differing mechanisms of resistance.
Methods to better understand the genetic control and the
mechanisms of these two resistances are suggested. The pyramiding of different sources of resistance to construct durable
resistance is discussed.
This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date. 相似文献