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1.
采用RT-PCR方法扩增实验动物剑尾鱼（Xiphopohorus helleri）纯系RR-B的HSP70家族两个成员的eDNA片段，并将其克隆到PMD18-T载体中测序，将测序结果与GenBank中的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行同源性比较。同时利用RT-PCR半定量方法研究热应激时两个成员在剑尾鱼组织中的表达。通过克隆获得了剑尾鱼的HSP70家族两个新成员的cDNA片段，两序列均包含HSP70家族的特征性签名序列和热休克蛋白的定位序列；通过对克隆片段与已发表的青锵（Oryzias latipes）等鱼类HSP70的核苷酸序列和其编码的氨基酸序列同源性比较，发现核苷酸序列同源性较高，成员一和成员二分别为85％-89％和82％-99％；氨基酸序列同源性更高，成员一和成员二分别为97％-99％和93％-99％。一般条件下，两成员在剑尾鱼肝脏、脾脏、肾脏和心脏中不表达，但热应激能刺激成员一在剑尾鱼脾脏中表达，成员二在肝脏、脾脏、肾脏和心脏中强烈表达，并可能在参与热应激保护方面起更大作用。 相似文献
2.
中华鳖腐皮病的免疫预防研究 总被引：4，自引：0，他引：4
选择对中华鳖毒力最强的Ｐ－１菌株,经扩大培养制成灭活福尔马林菌苗（Ｆ－ＡＨ）及Ｓｐａｎ白油佐剂菌苗（Ｚ－ＡＨ）,对中华鳖进行了Ｆ－ＡＨ菌苗的１次注射、２次注射及Ｚ－ＡＨ菌苗的注射免疫试验。结果表明,受免疫组鳖血液白细胞吞噬活性、凝集抗体效价及脾脏吞噬活性均显著高于对照组鳖,免疫保护力均达到８８％以上。 相似文献
3.
将柱状黄杆菌胞外多糖（EPS）溶液经腹腔注射免疫草鱼，以注射灭菌生理盐水作对照。免疫一周后，分别提取受免鱼与对照鱼肝脏、脾脏、体肾和头肾4种组织中的总RNA，并通过RTPCR半定量的方法检测不同组织中C反应蛋白（CRP）、白介素1（IL-1）、主要组织
相容性复合体I（MHC-I）、免疫球蛋白M（IgM）、干扰素（IFN）等5种免疫基因的表达情况。结果显示，CRP在受免鱼肝脏中的表达显著上升；MHC I在受免鱼脾脏、体肾中的表达显著下降；IgM在受免鱼4种组织中的表达皆显著上升；IL-1在受免鱼4种组织中的表达与对照组没有显著差异；无论受免组还是对照组都只能检测到微弱的IFN表达，且两组之间没有显著差异。结果表明，柱状黄杆菌EPS对草鱼的先天免疫能力以及特异性体液免疫能力具有促进作用。 相似文献
4.
根据鲤科鱼类同源序列设计并合成了长鳍吻(Rhinogobio ventralis)应激因子HSP70、抗体IgM、抑炎性因子IL-10和促炎性因子IL-1b基因特异引物,以长鳍吻皮肤组织总RNA为模板,RT-PCR扩增获得长度分别为412、463、520和217 bp的上述4种免疫因子基因cDNA部分序列。同时通过RT-PCR比较患小瓜虫病长鳍吻和对照组长鳍吻皮肤和肠道组织中各免疫因子的表达差异,结果显示:在皮肤组织中,IgM和IL-10在感染组鱼体中表达量显著高于对照鱼(P<0.05),HSP 70和IL-1b的表达则没有差异;在肠道组织中,IgM、IL-10和IL-1b在感染组鱼体中表达量显著增高,HSP 70的表达量没有差异。本研究首次对长鳍吻的免疫因子进行了分析,指出免疫因子IgM和IL-10在鱼体中免疫应答反应中较为灵敏,为养殖过程中长鳍吻应激监测方面奠定了理论基础。 相似文献
5.
研究全氟辛烷磺酸类物质(PFOS)暴露对剑尾鱼肝脏Cu/Zn-SOD及相关应激基因表达的影响,探讨筛选导致体内氧化应激反应的敏感生物标志物,并首次克隆和分析剑尾鱼Cu/Zn-SOD的cDNA全序列。实验将剑尾鱼随机分为5组,包括对照组和3.5、7.0、14.0和28.0mg/L等4个PFOS实验暴露组,同时设置平行组。定量测定了24 h、48 h、96 h和14 d肝脏组织中的Cu/Zn-SOD、HSP70-1、HSP70-2和GST mRNA表达水平的变化,成功克隆包含794 bp核苷酸和编码154个氨基酸的剑尾鱼Cu/Zn-SOD的cDNA全序列。通过与其他相关鱼类Cu/Zn-SOD的核苷酸序列和氨基酸序列相似性比较发现,核苷酸和氨基酸序列相似性分别达到77%~83%和79%~88%。高浓度PFOS暴露后,剑尾鱼肝脏中与应激相关的各种基因发生不同程度的变化。通过RT-PCR技术检测Cu/Zn-SOD mRNA表达在剂量效应上不显著,Cu/Zn-SOD mRNA表达和SOD活性之间并没有相关性,推断是其他类型的SOD基因在PFOS暴露下发挥更为重要的作用。随着暴露时间的持续延长,Cu/Zn-SOD基因的转录水平变化趋势与SOD活性变化及HSP70-1 mRNA表达相一致,表明HSP70通过提高剑尾鱼体内SOD水平以保护机体免受氧化损伤。HSP70-2 mRNA水平比HSP70-1 mRNA表达更加敏感。HSP70-2变化趋势与Cu/Zn-SOD mRNA表达相关性不强,其相关机制有待进一步研究。G ST mRNA表达呈不断上升趋势,这与Nrf2信号传导途径有关,也可能是机体在应对PFOS进入鱼体后的一种防御措施。剑尾鱼在体实验表明,PFOS能够诱导肝脏氧化应激反应,GST mRNA和HSP70-2 mRNA表达可以作为PFOS暴露的敏感生物标志物。 相似文献
6.
为探讨锦鲤的抗逆机理,在实验室条件下研究了持续热应激对大正三色锦鲤非特异性免疫指标及HSP70基因相对表达量的影响。分别于应激前、应激后2、6、10、14、18、22、26 h进行取样测定呼吸爆发、补体蛋白3(C3)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及热休克蛋白70(HSP70)基因的相对表达量。结果发现,热应激后呼吸爆发降低,在应激后2、10、18～26h降低显著(P<0.05);热应激2 h后血清中C3含量略有上升,应激6～26 h过程中与应激前相比均下降,应激14～22 h显著地下降(P<0.05);热应激下血清中SOD有上升的趋势,但差异不显著(P>0.05);热应激下,血清中MDA浓度升高,应激10～18 h上升显著(P<0.05);应激后2、26 h HSP70基因的相对表达量与应激前相比显著性地上升了5.93倍、2倍(P<0.05),应激后6～22 h HSP70基因的相对表达量与应激前水平无显著性差异(P>0.05)。结果表明,热应激影响锦鲤非特性免疫指标,降低锦鲤非特异性免疫力;HSP70的表达受热应激调节,热应激下诱导合成的HSP70对锦鲤起到一定的应激保护作用。 相似文献
7.
为探讨血根碱是否具有缓解黄鳝(Monopterus albus)由脂多糖(LPS)诱导后引起的免疫应激及炎症反应作用,本实验设置对照组(基础饲料)和实验组(基础饲料+750μg/kg血根碱),每组3个重复,养殖实验持续8周,结束后每个重复随机取30尾规格一致的黄鳝经腹腔注射大肠杆菌脂多糖(LPS),在注射前0 h和注射后3 h、6 h、12 h、24 h和48 h进行采样。结果显示,在0 h时,实验组肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活力显著高于对照组(P0.05),其余指标均无显著性差异(P0.05);血清中葡萄糖(GLU)、皮质醇(COR)、IgM、C4、碱性磷酸酶(AKP)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)和肝脏中SOD在腹腔注射LPS后均呈先上升后下降的趋势,并在3 h或6 h达到峰值,肝脏中丙二醛(MDA)的变化趋势与其相反;与对照组相比,实验组血清中AKP、IgM、C4的含量和肝脏中SOD活力在注射LPS后上升幅度更大,GLU和COR的含量上升幅度慢,并且GLU、COR、AKP、IgM、C4、GOT和GPT恢复至正常水平速度更快。肠道中炎症相关基因IL-1β、IL-10、IL-12β、IL-15、TGF-β1和TGF-β2表达量在腹腔注射LPS后呈先上升后下降的趋势,并在6 h或12 h达到峰值;与对照组相比,实验组下调了IL-1β和IL-12β基因表达量,上调了IL-10、IL-15、TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3基因表达量。综上所述,在本研究条件下,腹腔注射LPS诱导黄鳝产生了免疫应激及炎症反应,在3～6 h时出现高峰,而饲料中添加750μg/kg血根碱能够有效改善黄鳝由LPS诱导产生的免疫应激及炎症反应。 相似文献
8.
《水产科学》2021,(4)
将25℃(对照组)下暂养的体质量(9.87±1.20) g大口黑鲈"优鲈3号"幼鱼直接放入28、31、34、37℃水环境中,0、6、48 h时取肝脏和鳃组织,探究不同温度应激后对大口黑鲈"优鲈3号"幼鱼肝脏、鳃组织结构损伤及HSPs基因在这些组织中表达的影响。试验结果显示,28℃和31℃组肝脏和鳃组织均与对照组无差异,34℃肝脏和鳃组织出现轻微的细胞水肿,37℃则出现肝细胞空泡化、细胞间界限杂乱模糊、细胞核溶解,鳃小片末端出现膨大且弯曲,部分鳃小片因红细胞过多而涨破。在不同水温下,HSPs基因的表达量变化不同。6 h时,肝脏和鳃组织中HSP70和HSC70 mRNA表达量均随着胁迫温度的升高而升高,在37℃时表达量最高;48 h时,肝脏和鳃组织中HSP70和HSC70 mRNA表达量相较于6 h均出现不同程度的下降(除31℃组鳃组织HSP70);且随着胁迫温度的升高呈先升后降的趋势,37℃组的表达量最低。结果表明,高温胁迫会使大口黑鲈"优鲈3号"幼鱼产生一定应激损伤,因此在实际养殖生产中,应密切关注温度的变化,降低温度胁迫对鱼体免疫机能的影响。 相似文献
9.
根据鲤科鱼类同源序列设计并合成了长鳍吻(鳍)(Rhinogobio ventralis)应激因子HSP70、抗体IgM、抑炎性因子IL-10和促炎性因子IL-1b基因特异引物,以长鳍吻(鳍)皮肤组织总RNA为模板,RT-PCR 扩增获得长度分别为412、463、520和217 bp的上述4种免疫因子基因cDNA部分序列.同时通过RT-PCR比较患小瓜虫病长鳍吻1715和对照组长鳍吻(鳍)皮肤和肠道组织中各免疫因子的表达差异,结果显示:在皮肤组织中,IgM和IL-10在感染组鱼体中表达量显著高于对照鱼(P<0.05), HSP 70和 IL-1b的表达则没有差异;在肠道组织中,IgM、IL-10和 IL-1b在感染组鱼体中表达量显著增高,HSP 70的表达量没有差异.本研究首次对长鳍吻(鳍)的免疫因子进行了分析,指出免疫因子IgM和IL-10在鱼体中免疫应答反应中较为灵敏,为养殖过程中长鳍吻(鳍)应激监测方面奠定了理论基础. 相似文献
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为探讨锦鲤的抗逆机理,在实验室条件下研究了持续热应激对大正三色锦鲤非特异性免疫指标及HSP70基因相对表达量的影响.分别于应激前、应激后2、6、10、14、18、22、26 h进行取样测定呼吸爆发、补体蛋白3(C3)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及热休克蛋白70 (HSP70)基因的相对表达量.结果发现,热应激后呼吸爆发降低,在应激后2、10、18～26 h降低显著(P＜0.05);热应激2h后血清中C3含量略有上升,应激6～26 h过程中与应激前相比均下降,应激14 ～ 22 h显著地下降(P＜0.05);热应激下血清中SOD有上升的趋势,但差异不显著(P＞0.05);热应激下,血清中MDA浓度升高,应激10～18 h上升显著(P＜0.05);应激后2、26 hHSP70基因的相对表达量与应激前相比显著性地上升了5.93倍、2倍(P＜0.05),应激后6～22 hHSP70基因的相对表达量与应激前水平无显著性差异(P＞0.05).结果表明,热应激影响锦鲤非特性免疫指标,降低锦鲤非特异性免疫力;HSP70的表达受热应激调节,热应激下诱导合成的HSP70对锦鲤起到一定的应激保护作用. 相似文献
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Vanessa Benítez-Dorta María J. Caballero Marisol Izquierdo Manuel Manchado Carlos Infante María J. Zamorano Daniel Montero 《Fish physiology and biochemistry》2013,39(2):335-349
To study the substitution of fish oil by vegetable oils in fish diets, juveniles Senegalese sole (Solea senegalensis) were fed diets (56 % crude protein, 12 % crude lipid) containing either linseed (100LO) or soybean (100SO) oils in comparison with a 100 % fish oil-based diet (100FO) for 90 days. Samples of muscle, liver, and intestine were collected for biochemical analysis and for glucocorticoid receptor-related genes, including GR1 and GR2, and the associated heat shock proteins HSP70, HSP90AA, and HSP90AB. Besides, basal levels of plasma cortisol were also determined. After the feeding period, a stress test, consisting on 5 min of net chasing, was applied to a selected population of each dietary group. Total replacement of fish oil by vegetable oils did not induced changes in fish growth and performance, but affected fatty acid profile of muscle, liver, and intestine, reflecting those tissues the characteristic fatty acids of each type of dietary oil. A tendency to conserve the ARA/EPA ratio could be observed in the different tissues, despite of the level of these fatty acids in diet. Chasing stress induced an increase of muscle GR1 and a reduction in intestinal GR2 relative expressions at any of the experimental diets assayed. In liver, chasing stress induced an increase in both GR1 and GR2 gene expression in fish fed fish oil diets. Similarly, chasing stress induced an increase of muscle HSP70 and decrease of HSP90AB in liver at any of the experimental diet assayed. Besides, vegetable oils decreased the expression of HSP70 in intestine, being the relative expression of liver HSP90AA increased by the inclusion of linseed oil in the diet, at any of the experimental conditions assayed. 相似文献
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对5种类型养殖池塘90400只中华鳖在生态养殖期前100d的死亡率进行研究。结果说明,中华鳖温室转外塘生态养殖期的日死亡率呈对数方程分布,且可分成3个养殖阶段,分别为日死亡率快速下降期,日死亡率稳步下降期和日死亡率无显著变化期。中华鳖的日死亡率在不同池塘环境下有显著性的差异,表现为土质池塘的死亡率明显低于水泥池塘,在养殖池塘中种植一定面积的水生植物亦能减低中华鳖的死亡率。总体来说,在其他条件相同的情况下,中华鳖最佳的生存环境为土质池塘种植30％～50％的沉水型水生植物,并且保持池塘生态环境处于相对稳定。 相似文献
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Effects of dietary α‐ketoglutarate supplementation on the antioxidant defense system and HSP 70 and HSP 90 gene expression of hybrid sturgeon Acipenser schrenckii ♀ × A. baerii ♂ exposed to ammonia‐N stress 
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下载免费PDF全文 Liansheng Wang Qiyou Xu Chang'an Wang Jinnan Li Di Chen Zhigang Zhao Liang Luo Xue Du 《Aquaculture Research》2017,48(5):2266-2277
This study was conducted to determine the effects of dietary α‐ketoglutarate (AKG) supplementation on the antioxidant defense system and gene expression of heat shock protein (HSP) 70 and HSP 90 in hybrid sturgeons Acipenser schrenckii ♀ × A. baerii ♂ exposed to ammonia‐N stress. A 2 × 3 factorial experiment was arranged, in which each diet (0%, 1% AKG) was randomly assigned to 0.25 (control) 5 and 10 mg L?1 ammonia‐N groups with three replicate aquaria for each 72 h. The 10 mg L?1 ammonia‐N significantly increased serum ammonia concentrations and intestinal Gln concentrations and GS activity compared with the 0.25 or 5 mg L?1 ammonia‐N groups. The intestinal Gln concentration and GS activity increased, and the serum ammonia concentration decreased, in fish given dietary supplementation of 1.0% AKG compared with fish given diets without AKG. Superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx) activity in serum, gills and intestines decreased when fish were exposed to 5 or 10 mg L?1 ammonia‐N, and their activity increased in fish given diets with 1% AKG. Catalase in the serum and gills decreased when fish were exposed to 5 or 10 mg L?1 ammonia‐N and increased in fish given diets with 1% AKG. The 10 mg L?1 ammonia‐N or 1% AKG supplementation increased HSP 70 and HSP 90 gene expression in the liver. The increased activity of antioxidant enzymes, and increased HSP 70 and HSP 90 gene expression in fish fed diets containing 1% AKG suggested higher tolerance to ammonia‐N stress. 相似文献
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Every organism responds to heat stress by synthesizing a group of evolutionarily conserved proteins called the heat-shock proteins (HSPs) that, by acting as molecular chaperones, protect the cell against the aggregation of denatured proteins and play a significant role in adaptation to temperature. The present study aimed to investigate the critical thermal maxima (CTMax) and the expression of HSP70 in different tissues (gill, brain, muscle and liver) of an endemic catfish Horabagrus brachysoma acclimated at either 20 or 30°C for 30?days. To understand the HSP70 response, fish acclimated to the two temperatures were exposed to preset temperatures (26, 30, 34, 36 and 38°C for 20°C acclimated fish and 32, 34, 36, 38 and 40°C for 30°C acclimated fish) for 2?h, followed by 1?h recovery at their respective acclimation temperatures. The HSP70 levels in the gill, brain, muscle and liver tissues were determined by Western blotting of one-dimensional sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis. A significant (P?相似文献
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Yanting Cui Bo Liu Jun Xie Pao Xu Yuanyuan Zhang Jianhua Ming 《Aquaculture International》2014,22(3):1067-1077
The aim of the present study was to compare the expression pattern of heat-shock protein 60 (HSP60), 70 (HSP70), and 90 (HSP90) mRNA in hepatic cells of grass carp exposed to enrofloxacin and emodin concentrations. The expression pattern of different genes encoding heat-shock proteins in hepatic cells of grass carp was exposed to graded levels of enrofloxacin (12.5, 25, 50, 100, and 200 μg/ml) or emodin (0.04, 0.2, 1, 5, and 25 μg/ml) for 24 h and were investigated by real-time quantitative PCR. When cells were exposed to up 50 μg/ml enrofloxacin, both HSP60 and HSP70 mRNA levels firstly were increased and thereafter significantly dropped at high concentrations (P < 0.05), while HSP90 decreased with increasing enrofloxacin concentration. Besides, HSP60 and HSP70 expressions were significantly inhibited in the high-concentration groups. In addition, the HSP90 mRNA levels in the treatment exposed to 100 and 200 μg/ml enrofloxacin were significantly lower than those of the control group (P < 0.05). Furthermore, when cells were exposed to graded levels of emodin, HSPs (HSP60, 70, and 90) mRNA levels significantly increased in the groups exposed to 5 and 25 μg/ml of emodin. The different expression pattern of HSPs implied that enrofloxacin could inhibit the expression levels of HSPs, while optimal level of emodin could trigger higher expression levels of HSPs in hepatic cell of grass carp to protect against further damage. 相似文献
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为研究血根碱对中华鳖(Trionyx sinensis)肠道菌群多样性及丰度的影响,选取480只初始体重为(31.75±7.20) g的中华鳖,设置添加0的对照组(RS1)和添加50 (RS2)、100 (RS3)和150 mg/kg (RS4)的3个实验组。实验结束后,提取中华鳖中肠组织的总DNA,进行16S rRNA V3-4区基因组测序。结果显示,实验组的总操作分类单元(Operational taxonomic units, OTUs)数量显著高于对照组,肠道菌群复杂度及丰富度较对照组有明显增加。肠道菌群结构组成分析发现,RS1与RS2结构较为接近,而RS1与RS3、RS4较远。在门分类水平上,变形菌门(Proteobacteria)和衣原体门(Chlamydiae)是优势菌群;在属分类水平上,螺杆菌属(Helicobacter)占绝对优势。通过比较发现,实验组中螺杆菌属丰度较对照组显著下降,而不动杆菌属(Acinetobacter)、乳杆菌属(Lactobacillus)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)丰度均有明显上升。研究表明,在饲料中添加适量的血根碱(100~150 mg/kg)能有效提高中华鳖肠道菌群多样性及丰富度,并能改善肠道菌群结构。 相似文献
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对患病中华鳖(Trionyn sinensis)进行病原分离、鉴定及药敏实验。从患病中华鳖肝、肾、脾及腹水分离纯化病原菌,经理化特性测定及16S rRNA序列分析对其进行鉴定,开展人工感染试验,并利用K-B进行药敏特性分析。结果显示分离菌株HD01为本次引发中华鳖病害的病原菌,其对中华鳖的LD50为4.48×106CFU/g。HD01株理化特性与粘质沙雷氏菌一致,16S rRNA序列与粘质沙雷氏菌同源性为99%,综合判定分离菌株为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)。HD01株对氟苯尼考、多西环素、庆大霉素及苯唑西林等14种抗生素高度敏感;对青霉素、头孢拉定、新霉素等7种抗生素耐药。分离菌株HD01是中华鳖病原菌,养殖时可选用氟苯尼考、庆大霉素及多西环素等药物进行防控。 相似文献
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中华鳖不同生态养殖模式对池塘水环境及养殖效果的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
利用条件相近的两组池塘,对中华鳖(Trionyx sinensis)的两种生态模式(Ⅰ组:中华鳖-吃食性鱼类鲤和草鱼模式;Ⅱ组:中华鳖-杂食性水生动物鲫和螺模式)对池塘水环境以及养殖效果的影响进行对比试验。结果表明,Ⅱ组CODMn在7、8、和9月显著低于Ⅰ组(P<0.05),NH3在6、7、8和9月显著低于Ⅰ组(P<0.05),TP在7月和8月显著低于Ⅰ组(P<0.05),TN在6、7和8月显著低于Ⅰ组(P<0.05),NO2--N在6月和7月显著低于Ⅰ组(P<0.05),Ⅱ组水环境质量较Ⅰ组好。Ⅱ组检出藻类47种,Ⅰ组34种,Ⅱ组种类显著增多(P<0.05);Ⅰ组蓝藻重量占83.18%,硅藻2.98%,隐藻2.65%,甲藻0%,Ⅱ组蓝藻58.59%,硅藻13.44%,隐藻14.00%,甲藻7.07%,Ⅱ组蓝藻明显下降,而硅藻、隐藻、甲藻明显上升(P<0.05)。6月Ⅰ组平均生物量4.18mg/L,Ⅱ组2.57mg/L,8月Ⅰ组29.04mg/L,Ⅱ组5.41mg/L,6月和8月Ⅰ组生物量均显著高于Ⅱ组(P<0.05)。Ⅰ组Shannon-Wiener指数H’在6月和8月均值分别为2.117和0.7467,Ⅱ组均值分别为2.5427和1.0178,Ⅱ组6月和8月H’均明显增加(P<0.05);在6月,Ⅱ组Margalef丰富度指数d为1.8516,Ⅰ组为1.2499,Ⅱ组较Ⅰ组上升明显(P<0.05);两组的Pielou匀度均指数J差别不大。Ⅱ组中华鳖平均产量11782.5kg/hm2,显著高于Ⅰ组11482.5kg/hm2(P<0.05)。 相似文献