酚／氯仿抽提法提取绵羊凝血块中基因组DNA   总被引：2，自引：0，他引：2  

曹果清  莫清珊  陈凤仙 《农业科学与技术》2009,10(5):76-78

[目的]对组织DNA提取方法进行改进,建立一种从绵羊凝血块中提取基因组DNA的方法。[方法]将绵羊凝血块用眼科剪剪碎,用组织DNA抽提液裂解细胞,用蛋白酶K消化后,经过酚／氯仿抽提,无水乙醇沉淀获得基因组DNA。用NanoDropND-1000微型分光光度计检测DNA浓度和纯度。用0．8％琼脂糖凝胶电泳检验基因组DNA的完整性。以绵羊微卫星位点BM203为扩增位点,分别以F：5’-GG（汀G11：AcAmGTTCCC-3’,R：5’-CTGCTCCCCACTACTCCTTC-3’为上下游引物,进行PCR扩增试验。PCR产物用1．5％琼脂糖凝胶电泳检测．[结果]提取的DNA浓度为（159．90±0．70）ng／μl,A260／A280比值为1．80±0．01,分子完整,结果理想。以从凝血块中提取的DNA为模板,对绵羊BM203微卫星位点进行了PCR扩增,扩增产物条带整齐、明亮、特导性强,扩增效果好。[结论]该方法简单、实用,提取的DNA可满足后续相关研究对DNA质量的要求,值得推广借鉴。  相似文献   

保存温度与时间对动物组织DNA提取质量的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

王敏强  王斌  刘晓玲 《安徽农业科学》2009,37(33):16407-16409

［目的］研究不同保存温度、不同保存时间对蟹肉总DNA提取质量的影响，为同类研究提供借鉴。［方法］将样品在4、-20和-40℃下分别保存4、8和15 d，提取螯足内肌肉总DNA，测定总DNA的紫外吸收值，并设计引物扩增其mtDNA ND6基因，采用琼脂糖凝胶电泳分别对提取的总DNA及PCR结果进行检测。［结果］由鲜活蟹组织提取的DNA A260与A280的比值因蛋白污染而较低；15 d内4 ℃与-40 ℃条件下保存的DNA提取率和条带检出率均无明显差异，而-20 ℃下的保存效果受时间影响明显。各处理组合总DNA的 A260与A280比值在1.79～2.00；利用上述DNA作模板，扩增其特定基因mtDNA ND6均可获得预期长度的PCR条带。［结论］短期保存组织宜选择4 ℃，若需较长时间保存时则宜选择-40 ℃以下的低温。  相似文献   

3种农药对草履虫的毒性研究     

张燕萍  朱慧芳  卢祥云 《安徽农业科学》2009,37(34):16880-16881

［目的］检测草履虫对农药的耐受性,为安全使用农药甲维盐、多菌灵和扑草净提供参考依据。［方法］通过单一急性毒性试验,研究甲维盐、多菌灵和扑草净3种农药对草履虫的急性毒性。［结果］甲维盐的1h半致死浓度（LC50）为430.177mg/L、95%置信区间为414.789~440.723mg/L;多菌灵的1hLC50为135.391mg/L,95%置信区间为102.475~177.581mg/L;扑草净的1hLC50为117.739mg/L,95%置信区间为73.492~175.622mg/L。［结论］3种农药对草履虫毒性大小依次为扑草净〉多菌灵〉甲维盐。  相似文献   

黄瓜基因组DNA提取及AFLP体系优化研究   总被引：2，自引：1，他引：1  

宋晓飞  李晓丽  冯志红  闫立英 《安徽农业科学》2009,37(29):14035-14037

［目的］提取黄瓜基因组DNA,并对AFLP体系进行优化。［方法］以黄瓜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法提取高质量的黄瓜叶片总DNA,通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件建立适合黄瓜的AFLP银染体系,得到清晰的黄瓜AFLP指纹图谱。［结果］DNA 模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应,改良的CTAB 提取法可用于黄瓜AFLP 分析,形成清晰的AFLP 指纹。优化的酶切连接体系为：以37 ℃酶切连接12 h为宜,酶切连接的基因组DNA用量为200 ng,预扩增时Taq酶用量为0.5 U/20 μl体系,预扩增产物稀释40倍作为选择性扩增的模板。在此优化的体系下引物E41M47扩增出清晰的条带。［结论］为黄瓜品种的分子标记和黄瓜品种间亲缘关系等研究奠定了基础。  相似文献   

"顽拗"植物春石斛基因组DNA的提取研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

郑泉  郭维明  郑勇平  王广东  范文峰 《安徽农业科学》2010,38(3):1156-1159,1166

提取“顽拗”植物春石斛的基因组DNA,并对其进行质量检测。［方法］采用普通CTAB法、试剂盒法和改良CTAB法提取10个春石斛品种的基因组DNA,然后分别用紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳法和荧光AFLP法对3种方法所提取的基因组DNA质量进行检验。［结果］改良CTAB法所提取春石斛基因组DNA得率较高,基本排除了春石斛体内多糖等次生代谢物质对基因组DNA质量的干扰,完全能满足AFLP等分子生物学试验对DNA质量的要求;其他2种方法所提取的基因组DNA则不能满足试验要求。［结论］改良CTAB法为较好的适合春石斛基因组DNA提取的方法。  相似文献   

PCR检测转基因大豆   总被引：2，自引：0，他引：2  

钱翔宇  柳毅  顾守进  苏旭东  马晓燕  张伟 《安徽农业科学》2009,37(29):14032-14034

［目的］定性检测转基因大豆。［方法］以非转基因大豆和CP4-EPSPS转基因大豆为材料,以大豆内源基因Lectin和外源基因5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因（CP4-EPSPS）为检测的目的片段,建立PCR反应体系。采用改进CTAB法提取大豆基因组DNA,并对所提DNA进行PCR扩增和电泳检测,确定转基因大豆的PCR检测限。［结果］改进CTAB法提取的大豆基因组DNA电泳条带清晰完整,转基因大豆和非转基因大豆基因组DNA均可扩增出约409 bp的条带即Lectin基因,而只在转基因大豆中检测出CP4-EPSPS特异性片段;当转基因大豆的含量为100%～0.2%时,均可扩增出特异性条带。［结论］该研究建立了转基因大豆的PCR检测方法。  相似文献   

从植物种子中快速获取高质量DNA的方法(英文)   总被引：1，自引：0，他引：1  

张富丽  刘勇  宋君  尹全  代晓航  雷绍荣  游米沙 《农业科学与技术》2012,(3):485-488

[目的]该研究旨在寻求一种从植物干种子中简单快速提取高质量基因组DNA的有效方法。[方法]将种子打磨成粉,取100mg粉末加入高盐提取液抽提基因组DNA。采用超微量分光光度计检测、PCR及酶切的方法检验DNA的得率和质量。[结果]从100mg7种常见作物种子粉末中可以得到619.67~1811.21ng基因组DNA,A260/A280比值在1.87~2.07之间,其纯度和质量适合进行PCR及酶切分析。通过普通PCR方法分别对7种作物的特异性内源基因片段进行扩增,结果均能扩增到明显的目的条带。用EcoRV和HindIII两种核酸内切酶能对所得的DNA充分酶切。[结论]该方法能快速地从干种子中提取到高质量的DNA。  相似文献   

一种改良的水稻细胞质基因组制备方法     

万雯婷  董扬  于洋  李丽娟  张静  李琼  王荔  胡凤益 《云南农业大学学报(自然科学版)》2011,26(4):437-444

 水稻叶绿体和线粒体基因组较小,且均被测序清楚,可以作为研究细胞质遗传的良好材料,而如何快速有效地分离纯化获得高产量和高质量的细胞质基因组是从DNA水平上研究细胞质遗传变异的前提条件。本研究结合了蔗糖密度梯度离心法-全基因组DNA扩增法(whole genome amplification,WGA),对细胞质基因组的制备进行了改良。改良后的方法仅使用20g的水稻叶片,即可在2d时间内得到浓度达300ng/μL以上,总量达40μg以上的高纯度(OD260/280值为18~20)、完整的叶绿体DNA (chloroplast DNA,cpDNA)和线粒体DNA (mitochondrial DNA,mtDNA)。该法制备的细胞质基因组可以满足多种细胞质基因组实验的要求,包括Solexa全基因组测序技术的要求。  相似文献   

乌金猪基因组文库的构建     

张永云  李卫真  赵素梅  黄英  高士争 《云南农业大学学报(自然科学版)》2011,26(6):776-781

 为探究与我国优良地方猪种乌金猪特性相关的基因机制,拟构建其基因组文库。取乌金猪肝脏组织,提取大小50kb以上的基因组DNA,利用限制性内切酶Bcl I对基因组DNA进行随机酶切和低熔点琼脂糖电泳方法回收10~23kb的DNA片段。以EMBL3作为载体,经BamH I酶切和去磷酸化处理后,与上述纯化的目的DNA片段连接,在体外包装成重组噬菌体,重组噬菌体转染宿主菌KW251,构建成乌金猪基因组文库。文库的效价为24×109pfu/mL。乌金猪基因组文库的成功构建,为进行其相关功能基因和基因组区域的识别,基因组DNA和调控元件的克隆与功能分析等后续研究奠定了良好的基础。  相似文献   

中国草原红牛CAPN I基因的遗传多样性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

李赵志  张立春  张国梁  严昌国  金海国  曹阳  周国利  王晓阳  朴庆林  于永生  刘晓辉 《安徽农业科学》2010,38(3):1171-1172

［目的］利用PCR SSCP技术研究中国草原红牛CAPN I基因的多态性。［方法］以90头草原红牛的全血为试材,用酚/氯仿/异戊醇法提取基因组DNA,采用PCR SSCP技术分析了钙蛋白酶 I 基因（CAPN I）在草原红牛群体中的多态性。［结果］试验所设计的18对引物用于PCR扩增均获得良好的结果。经PCR SSCP 分析,E7 1引物扩增的群体出现了AA、BB、AB和AC 4种基因型;E14 1引物扩增的群体出现了 AA和BB 2种基因型,E14 5、E14 6和 E20 2引物扩增的群体出现了 AA、BB和AB 3种基因型。对不同基因型的测序表明,在第14内含子4 685 bp处发生了CT的碱基突变,在第17内含子6 545 bp处发生了CT的碱基突变,在第21内含子上8 462 bp处发生了G A、8 561 bp处A G、8 696 bp处A T的碱基突变。［结论］该研究为改善牛肉质性状的分子育种提供新的分子生物学基础数据。  相似文献   

4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法比较(英文)   总被引：2，自引：0，他引：2  

胡祎晨  孙正海  王锦  李世峰  辛培尧  范萱 《（《农业科学与技术》）编辑部》2011,(10)

[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适的DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取的DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法Ⅰ提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。  相似文献   

4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法比较     

胡祎晨  孙正海  王锦  李世峰  辛培尧  范萱 《安徽农业科学》2011,39(36):22215-22216,22363

[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法I、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法I提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。  相似文献   

家禽血液基因组DNA的快速提取     

孙朕  孙英民  郑素月  樊宝良 《安徽农业科学》2010,38(16):8449-8452

[目的]建立一种应用硅胶膜提取禽血DNA的新方法。[方法]应用硅胶膜法和传统的酚/氯仿法提取抗凝禽血基因组DNA,设计合成了一对2.7 kb的鸡卵清蛋白基因的引物,检测这2种方法提取的基因组DNA模板对聚合酶链式反应（PCR）扩增效率的影响。[结果]用硅胶膜法提取的基因组DNA产量和质量均比传统的酚/氯仿法高,将该法提取的基因组DNA作为模板能够消除抗凝剂对后续PCR反应的影响。[结论]硅胶膜法为快速提取高质量的禽血基因组DNA奠定了基础。  相似文献   

青蒿组织中快速有效DNA提取方法的研究(英文)     

《（《农业科学与技术》）编辑部》2008,(2)

[Objective] The objective of this study is to explore a rapid and efficient method of extracting genomic DNA from Artemisia abrotanum. [Method] Three methods of Cutting [Method],Liquid Nitrogen [Method] and Quartz Sand [Method] based on SDS method were employed to extract Artemisia abrotanum genomic DNA from tender leaf at seedling stage,tender spike and old leaf at heading stage. The obtained DNAs were detected by absorbance detection,agarose gel and PCR amplification. [Result] Cutting [Method] performed better than the other two methods compared in purity,extracting cycle and cost,accordingly more suitable for PCR amplification. The results also show that young spike is the best material for extracting genomic DNA from Artemisia Annua.  相似文献   

青蒿组织中快速有效DNA提取方法的研究     

石开明  周毅峰 《安徽农业科学》2008,36(20)

[目的]探索适合于快速有效的提取青蒿DNA的方法。[方法]以青蒿苗期幼叶、抽穗期幼穗及抽穗期老叶为材料,采用剪碎法、石英法及液氮法等3种方法提取DNA,并进行吸光度检测、琼脂糖电泳及PCR扩增以检测DNA提取效果。[结果]剪碎法提取的DNA纯度较高,适合于PCR扩增,同时节省了时间和成本。试验结果还表明,青蒿的抽穗期幼穗更适合于提取DNA。[结论]剪碎法是一种适合于提取青蒿DNA的快速有效的方法。  相似文献   

羌活基因组DNA提取方法     

周鹤峰  张桂彬  邵敏  唐历波  李官成 《安徽农业科学》2008,36(10):3993-3994

[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。  相似文献   

An Improved Method of Extracting Artemisia abrotanum Genomic DNA   总被引：8，自引：0，他引：8  

SHI Kai-ming      ZHOU Yi-feng    . College of Biology Science  Technology  Hubei Institute for Nationalities  Enshi  . Key Laboratory of Biological Resource Protection  Utilization in Hubei Province  Enshi  . Key Laboratory of Biotechnology in Traditional Chinese Medicine of Hubei Province  Hubei University  Wuhan 《（《农业科学与技术》）编辑部》2008,(2)

[Objective] The objective of this study is to explore a rapid and efficient method of extracting genomic DNA from Artemisia abrotanum. [Method] Three methods of Cutting [Method],Liquid Nitrogen [Method] and Quartz Sand [Method] based on SDS method were employed to extract Artemisia abrotanum genomic DNA from tender leaf at seedling stage,tender spike and old leaf at heading stage. The obtained DNAs were detected by absorbance detection,agarose gel and PCR amplification. [Result] Cutting [Method] performed better than the other two methods compared in purity,extracting cycle and cost,accordingly more suitable for PCR amplification. The results also show that young spike is the best material for extracting genomic DNA from Artemisia Annua.  相似文献   

贺兰山紫蘑菇基因组DNA提取方法研究     

杨振华  张靠稳  马爱瑛 《安徽农业科学》2010,38(20):10557-10559

[目的]研究适合于贺兰山紫蘑菇（Corinarius rufo-olivaceus）基因组DNA的提取方法。[方法]通过采用改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、SDS法、Doyle-Doyle法和KI法5种基因组DNA提取方法,分别提取贺兰山紫蘑菇的基因组DNA,用DU800核酸蛋白检测仪测定其DNA含量、浓度和纯度,并通过琼脂糖凝胶电泳进行提取结果比较。[结果]5种不同的提取方法均能提取该紫蘑菇的基因组DNA,其中KI法提取的DNA纯度、浓度和得率为最好。[结论]KI法是贺兰山紫蘑菇（C.rufo-olivaceus）DNA提取的适宜方法,该法具有简单、便捷、省时、适合基因组DNA大量提取的特点。  相似文献   

快速小量提取小麦叶片DNA的一种简易方法   总被引：6，自引：3，他引：3  

王敏  那冬晨  姬虎太  张定一 《农业科学与技术》2009,10(5):34-35,75

[目的]寻求少量、快速提取小麦幼叶DNA的方法。[方法]以小麦幼叶（只要是健康的绿叶,老叶也可）为试验材料,用改良的CTAB法小量快速提取转基因小麦总DNA。具体步骤为：①直接用已灭菌的1．5ml离心管夹取小麦叶片（无需称量）,然后在液氮中快速冷冻后用玻璃棒研磨成细粉（研磨直接在离心管中进行,不必先在研钵中研磨然后再转移到离心管里,能够有效减少材料损失）,加入600山预热（65℃）的2％CTAB提取缓冲液,快速振荡摇匀。置于65℃的水浴锅中温育30min,期间温和混匀几次。②取出离心管,冷却至室温,加入600m氯仿：异戊醇（24：1）充分混匀,于4℃下12000r／min离心8min（只抽提1次）。③取上清,加入等体积预冷的异丙醇,缓慢混匀,至有絮状DNA析出,-20℃放置30min以上。④4℃下12000r／min离心8min。弃上清液,将沉淀用700μl70％乙醇清洗2次,离心,弃乙醇,室温下挥发乙醇,加入适量ddH：O或0．1×TE溶解沉淀（DNA）,-20℃保存。所提取的DNA以0．8％琼脂糖凝胶电泳检测。[结果]改良的CTAB法提取小麦基因组DNA所提取的DNA纯度高、无降解现象,适用于进行常规PCR扩增,并且需要材料量少、成本低,还可缩短操作周期、节省时间。[结论]该研究为小麦DNA的提取提供了一种所需材料量少、简便、快速的方法。  相似文献