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1.
家蚕核多角体病毒Lef—1和DA26基因的克隆及部分序列分析 总被引：2，自引：1，他引：2
ｌｅｆ－１和ＤＡ２６基因分别位于ｅｇｔ基因的上游和下游．从ｐＵＡｃ－ｅｇｔ中分离出ＥｃｏＲＩ－ＸｂａＩ１．１ｋｂ的ｅｇｔ基因片段，进行缺口平移标记，获得探针。与ＢｍＮＰＶＤＮＡ经ＨｉｎｄⅢ酶切、电泳、转移至ＮＣ膜的ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交，发现ＢｍＮＰＶＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢＤ片段呈阳性。从ＢｍＮＰＶ基因组中分离出１０．４ｋｂ的ＨｉｎｄⅢＤ片段，用ＥｃｏＲＩ酶切得到ＨｉｎｄⅢ－ＥｃｏＲＩ２．２ｋｂ、ＥｃｏＲＩ１．４ｋｂ和ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ６．８ｋｂ３个片段，分别克隆于ｐＵＣ１９中，命名为ｐＵＨＥ２．２、ｐＵＥ１．４和ｐＵＥＨ６．８。经双链测序并与ＡｃＮＰＶ相关基因序列进行比较，发现ｌｅｆ－１基因被克隆于ｐＵＨＥ２．２中，ＤＡ２６基因克隆于ｐＵＥＨ６．８中。从所测定的ｌｅｆ－１和ＤＡ２６基因的启动子及５＇端部分序列来看，它们在ＡｃＮＰＶ和ＢｍＮＰＶ之间有极高的同源性。 相似文献
2.
从家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)中分别克隆出其P10基因。从BmNPV P10中亚克隆得到其5′端上游片段,经PCR定位突变使之ATG区突变成一个BglⅡ酶切位点。从AcMNPVP 10中亚克隆得到基因3′端下游片段,克隆入经突变的BmNPV P10基因启动子的下游,构建成一个新的转移表达载体pBmAcPV-1,由于BmNPV和AcMNPV P10基因及两端的同源性高达90％以上,该载体可以分别与野生型BmNPV和AcMN-PV DNA进行同源重组。 相似文献
3.
应用昆虫杆状病毒载体在昆虫细胞中表达乙肝表面抗原 总被引：1，自引：0，他引：1
人乙型肝炎病毒（ａｄｒ亚型）表面抗原Ｓ基因克隆到ＰｕＡＣ－５苜蓿尺蠖核型多角体病毒转移载体上，所构建的重组转移载体质粒与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染Ｓｆ－２１细胞，经空斑法筛选和纯化，得到了含ＨＢＶＳ基因的重组病毒ＡｃＮＰＶＳ．用放射免疫法测定了ＡｃＮＰＶＳ感染的Ｓｆ－２１细胞及其培养液中的ＨＢｓＡｇ，总表达量为１．２２μｇ／１０＾６细胞。 相似文献
4.
人乙型肝炎病毒（ａｄｒ亚型）表面抗原Ｓ基因克隆到ＰｕＡＣ－５苜蓿尺蠖核型多角体病毒转移载体上，所构建的重组转移载体质粒与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染Ｓｆ－２１细胞，经空斑法筛选和纯化，得到了含ＨＢＶＳ基因的重组病毒ＡｃＮＰＶＳ．用放射免疫法测定了ＡｃＮＰＶＳ感染的Ｓｆ－２１细胞及其培养液中的ＨＢｓＡｇ，总表达量为１．２２μｇ／１０￣６细胞． 相似文献
5.
AcNPV对甜菜夜蛾二龄幼虫的生物测定 总被引：4，自引：0，他引：4
以甜菜夜蛾二龄幼虫对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）两种毒株采用生物测定方法进行比较。对ＡｃＮＰＶ两毒株杀虫毒力及杀虫速率的分析表明：以甜菜夜蛾活体增值的ＡｃＮＰＶ Ａ株（ＬＤ５０＝１３１．８ＰＩＢ／头）比用草地贫夜蛾细胞株（Ｓｆ９）增殖的ＡｃＮＰＶ Ｂ株（ＬＤ５０＝１６９６．８ＰＩＢ／头）毒力要高１０倍，而毒杀速率，也以ＡｃＮＰＶ Ａ株（ＬＴ５０＝４．４６ｄ）比ＡｃＮＰＶ Ｂ株（ＬＴ５０ 相似文献
6.
在以５种限制性内切酶对ＳＩＮＰＶ基因组作酶解分析的基础上，以ＡｃＮＰＶ多角体基因的部分编码序列作探针，对其进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，发现ＸｂａⅠ酶切的２．９ｋｂ片段含有全部或部分ＳＩＮＰＶ多角体基因，并将该片段克隆至ｐｕｃ１８载体上。 相似文献
7.
马立克氏病病毒gB基因的重组痘苗质粒构建 总被引：1，自引：0，他引：1
根据马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ｇＢ基因序列设计ＰＣＲ引物,以ｇＢ质粒为模板,扩增出ＭＤＶｇＢ基因５’端到３’端３８８ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ双酶消化ＰＣＲ产物,将其克隆入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ质粒,构建中间质粒Ⅰ;用ＸｂａⅠ消化ｇＢ质粒,切出ＭＤＶｇＢ基因ＸｂａⅠ片段,并正向克隆入中间质粒Ⅰ的ＸｂａⅠ位点,将ＭＤＶｇＢ基因１３７ｂｐ的ＰＣＲ产物与其ＸｂａⅠ片段正向连接,构建中间质粒Ⅱ用ＥｃｏＲⅠ调出中间质粒Ⅱ中的ＭＤＶｇＢ基因,正向克隆入痘苗病毒表达载体ｐ１６启动子下游,构建ＭＤＶｇＢ基因表达质粒ｐ１６－ＭＤＶｇＢＭＤＶｇＢ基因重组痘苗表达质粒的成功构建,为下一步进行重组病毒的构建及ＣＴＬ应答的深入研究奠定了基础 相似文献
8.
对四种替代宿主传代后的芹菜夜蛾核型多角体病毒（ＳｆａＭＮＰＶ，Ｓｙｎｇｒａｐｈａｆａｌｃｉｆｅｒａｍｕｌｔｉｐｌｅｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ）进行毒力测定，表明其对棉铃虫和小菜蛾仍具较高毒性，ＬＣ＿(５０)值分别为３．８０７×ｌ０￣４ＰＩＢ／ｍＬ和２．３６４×１０￣６ＰＩＢ／ｍＬ。超薄切片电镜观察，经过替代宿主传代后，ＳｆａＭＮＰＶ的包理类型发生了变化，表现在以多粒包埋为主向以单拉包埋为主的转变。 相似文献
9.
杆状病毒包涵体蛋白基因的进化 总被引：6，自引：0，他引：6
在分析了ＨａＳＮＰＶ和ＥｏＳＮＰＶ多角体蛋白基因核苷酸序列的基础上,通过ＭＡＬＩＧＮ程序,比较了目前已发表的２６种杆状病毒包涵体蛋白序列,ＨａＳＮＰＶ与ＨｚＳＮＰＶ亲缘关系十分接近,两ａａ序列同源性达９７．６％,ＥｏＳＮＰＶ与黄极毒蛾核型多角体病毒的同源性为最高,ｎｔ序列的同不原性为８３．０％,ａａ序列达９４．７％与其它２０种鳞翅目ＮＰＶ的同源性也很高,ｎｔ序列同源性为７２．６％－８１．９％,ａ 相似文献
10.
以ＡｃＭＮＰＶ ｅｇｔ基因为探针,通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和原位杂交,克隆了含ＥｏＳＮＰＶ ｅｇｔ基因的４．９５ｋｂ ＥｃｏＲ Ｉ－Ｋ片段,并进一步亚克隆了含完整ｅｇｔ基因编码区的１．８ｋｂ ＨｉｎｄⅢ－ＥｃｏＲＶ片段。应用双脱氧链终止法,测定了基因编码区中的Ｘｈｏ Ｉ－ＨｉｎｃⅡ片段４７１ｂｐ的核苷酸全序列,计算机分析表明,该片段编码的１５７个氨基酸序列与其它杆状病毒ｅｇｔ基因保守区的Ⅳ（部分） 相似文献
11.
茶毛虫核型多角体病毒基因组酶切分析及质粒文库的构建 总被引：3，自引：0，他引：3
应用限制性内切酶图谱分析法,估算茶毛虫核型多角体病毒基因组大小为１３１．０９ｋｂ;通过随机克隆,将ＥｐＮＰＶ基因组８条ＢａｍＨ Ｉ酶切片段中的６条,１３条Ｐｓｔ Ｉ酶切片段中的７条,２６条ＥｃｏＲ Ｉ酶切片段中的７条,２１条ＨｉｎｄⅢ酶切片段中的７条,１４条Ｘｂａ Ｉ酶切片段中的９条分别克隆至载体ＰＴＺ１９Ｒ,构建了ＥｐＮＰＶ基因组的部分质粒文库。 相似文献
12.
１９８９年，从山西省太谷县采集到的折带黄毒蛾核型多角体病毒（ＮＰＶ）材料经电镜观察，其多角体为三角形，四边形或不规则形。包涵体内的病毒粒子为双粒包埋类型。 相似文献
13.
番鸭细小病毒M91G27株VP3基因的克隆与序列测定 总被引：1，自引：0，他引：1
利用ＰＣＲ技术,从纯化番鸭细小病毒Ｍ９１Ｇ２７毒株鹅胚尿囊液中扩增出病毒结构多肽ＶＰ３基因。将该ＰＣＲ扩增片段克隆入ｐＵＣ１８质粒载体的ＨｉｎｃⅡ和ＳａｃⅠ位点之间,酶切分析筛选到含１．６ｋｂ基因片段的重组质粒ＭＰ１３。结果表明：该片段与国外已报道毒株核苷酸序列有９８．８％的同源性,氨基酸序列有９８．１％的同源性,证明该重组质粒是ＶＰ２基因的克隆。 相似文献
14.
在分析了ＨａＳＮＰＶ和ＥｏＳＮＰＶ多角体蛋白基因核苷酸序列的基础上,通过ＭＡＬＩＧＮ程序,比较了目前已发表的２６种杆状病毒包涵体蛋白的序列,ＨａＳＮＰＶ与ＨｚＳＮＰＶ亲缘关系十分接近,两者ａａ序列同源性达９７．６％,ｎｔ序列同源性达９７．４％;ＥｏＳＮＰＶ与黄杉毒蛾核型多角体病毒（Ｏｐ－ＳＮＰＶ）的同源性为最高,ｎｔ序列的同源性为８３．０％,ａａ序列达９４．７％,与其它２０种鳞翅目ＮＰＶ的同源性也很高,ｎｔ序列同源性为７２．６％～８１．９％,ａａ序列为８３．７％～９３．９％;与ＧＶ的同源性较低,为４８．４％～５４．９％;而与锯叶蜂核型多角体病毒（ＮｓＳＮＰＶ）的同源性为最低,仅４４．９％。应用Ｃｌｕｓｔａｌ程序建立了一个包括了２６种包涵体蛋白的系统树,确定了新测定的ＥｏＳＮＰＶ和ＨａＳＮＰＶＰｈ在包涵体蛋白基因系统树中都属于ＮＰＶ中的ＧｒｏｕｐⅡ分枝。 相似文献
15.
IBDV超强毒HZ株VP2基因的克隆和真核表达质粒的构建 总被引：3，自引：0，他引：3
利用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,扩增克隆传染性法低囊病病毒超强毒（ｖｖＩＢＤＶ）ＨＺ株ＶＰ２基因,并ＶＰ２基因进行全序列测定、序列分析和聚类分析,同时将ＶＰ２基因与真核表达载体ｐｃＮＤＡ３相连接。结果克隆到ＶＰ２基因全序列长１３５６ｂｐ,分析表明ＨＺ株与欧洲超强毒株ＵＫ６６１高度相似,同时将ＶＰ２基因正向插入ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游,得到了ＶＰ２基因的真核表达质粒。为ＩＢＤＶ分子流行病学和基因工程疫苗的研究奠定了物质基础。 相似文献
16.
根据烟草花叶病毒Ｕ１株系ＴＭＶ－Ｕ１序列，人工合成引物，通过ＰＣＲ扩增并克隆了烟草花叶病毒蚕豆株系（ＴＭＶ－Ｂ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因和３′端非编码区．ＤＮＡ全序列测定结果表明，外壳蛋白基因全长４５９个碱基，编码１５１个氨基酸，３′端非编码区全长２２４个碱基．与ＴＭＶ－Ｕ１株系相比，ＴＭＶ－Ｂ仅在ＣＰ基因上有一个碱基缺失，并导致ＣＰ基因提前终止，使其编码的氨基酸少７个．将ＣＰ基因及３′端非编码区插入ｐＧＥＭＥＸ－１的Ｔ７基因１０中，转入Ｅ．ｃｏｌｉ后诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析呈现一特异的蛋白带．Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫检测证明，该特异带与ＴＭＶ抗血清呈阳性反应．将ＣＰ基因正向插入植物表达载体ＰＢⅠ１２１中，置于花椰菜花叶病毒３５Ｓ启动子控制之下，获得了植物表达载体ｐＺＬ５ 相似文献
17.
落叶松绶尺蠖核型多角体病毒的生物测定 总被引：1，自引：0，他引：1
落叶松绶尺蠖核型多角体病毒是一株毒力较强的病毒，用１．２１６×１０＾８ＰＩＢ／ｍＬ的浓度感染１～４龄幼虫，其死亡率在９１．５５％～９６．８１％之间。本文主要介绍落叶松绶尺蠖核型多角体病毒的生物测定，分别确定了ＺｒＮＰＶ浓度和幼虫死亡率，ＺｒＮＰＶ浓度和幼虫死亡时间的回归方程式。 相似文献
18.
本文报道采用反转录酶—聚合酶链式反应，体外扩增芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）外壳蛋白基因及其克隆，并在大肠杆菌中获得表达的结果；从抗州市郊区感病的油菜上分离到一株致病力极强的芜菁花叶病毒分离物，提纯后，经５０ｎｇ／ｍＬ蛋白酶Ｋ和０．５％ＳＤＳ处理，苯酚／氯仿和氯仿抽提两次，酒精沉淀，获得了纯化的病毒ＲＮＡ，该ＲＮＡ与ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）＿（１５）退火后，在ＡＭＶ反转录酶的作用下合成了单链ｃＤＮＡ，然后加入用以扩增ＴｕＭＶ－ＣＰ基因的上下游引物，３５个循环后，得到了一条长约０．８５ｋｂ的片段，将该片段克隆到ｐＵＣ１８质粒的ＳａｌⅠ限制性酶切位点，分析了限制性酶切图谱，分析表明该片段含有ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ以及引物设计时带人的ＭｃｏⅠ三个酶切位点，该片段克隆到大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）原核表达载体ｐＫＫ２３３－２质粒的ＮｃｏⅠ和ＨｉｎｄⅡ位点后，经ＩＰＴＧ诱导，以该病毒的抗血清为第一抗体，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测该基因的表达产物，结果表明该基因的表达产物为ＴｕＭＶ－ＣＰ蛋白，因而认为所获得的扩增片段确为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因。 相似文献
19.
对甘蓝夜蛾核型多角体病毒（ＭｂＮＰＶ）在同源寄坟细胞系ＮＥＡＵ－Ｍｂ－９３１１０４（Ｍｂ９３１１０４）中的生长特性进行了研究。结果表明,无包涵体游离病毒（ＭｂＮＰＶ－ＮＯＶ）在接种后１４ｈ达到吸收高峰,病毒滴度降到最低值５．７９＊１０＾３２ＴＣＩＤ５０／ｍＬ,接种病毒９６ｈ,病毒滴度达到最高值２．１３＊１０＾５ＴＣＩＤ５０／ｍＬ在ＮＯＶ（ｎｏｖｏｃ－ｃｌｕｄｅｄｖｉｒｕｓ）连续传递２０代的过程中, 相似文献
20.
通过对山楂粉蝶核型多角体病毒（ＡｐｏｒｉａｃｒａｔａｅｇｉＮＰＶ简称ＡｃｒＮＰＶ）对其４龄虫食量影响的试验结果表明，当气温在２０℃以上，相对湿度为５０％左右，病毒浓度为３．３２５×１０＾７ＰＩＢ／ｍｌ时，ＡｃｒＮＰＶ毒力强，杀虫效果好，第９ｄ，２０ｈ感染幼虫的死亡率达１００％，感病幼虫与健虫食量相比，１～３ｄ下降１６％，４～６ｄ下降４６％，７～９ｄ下降８２．４％，因此在山楂粉蝶幼虫３龄末，４龄初施 相似文献