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【目的】建立一种简便、快速、精确的乳过氧化物酶（LP）检测方法。【方法】以ABTS为底物，利用动力学方法，建立了检测LP含量的ABTS法，并以优化后的体系检验ABTS法的精确度。【结果】以ABTS法检测LP含量的最佳反应条件为：吸收波长416nm，作用时间100s，pH5．5，ABTS浓度2mmol／L，H2O2浓度5mmol／L，工作温度25℃（室温）。经检验，该法的批内变异系数为2．39％，批间变异系数为3．42％，相关系数（R2）为0．9953，准确误差均未超过5．00％。【结论】以ABTS法检测LP精密度和准确度均较好，且操作步骤比较简便、快速，实现了对LP的简便、快速、精确检测。 相似文献
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【目的】探讨葡萄糖对鹅肝细胞增殖能力的影响。【方法】以四川白鹅为供试动物,采用半原位二步胶原酶灌注法采集鹅的肝细胞,之后用含不同浓度(0(对照组,CK),5,20,35mmol/L)葡萄糖的培养基培养鹅原代肝细胞,培养48h后用BrdU免疫荧光染色检测BrdU阳性细胞率,BrdU-ELISA法检测肝细胞DNA含量,ELISA法检测Cyclin D1蛋白质量浓度。反转录聚合酶链式反应检测细胞增殖相关基因(Cyclin D1、Cyclin D2和Cyclin D3)的mRNA表达水平。【结果】与对照组比较,20和35mmol/L葡萄糖可以显著增加BrdU阳性细胞率,并可以明显提高原代肝细胞的DNA含量;5和20mmol/L葡萄糖对Cyclin D1蛋白质量浓度影响不显著,而35mmol/L葡萄糖对Cyclin D1蛋白质量浓度有显著促进作用。Cyclin D1、Cyclin D2和Cyclin D3的mRNA表达水平随着葡萄糖浓度的增加而升高,其中35mmol/L葡萄糖的促进作用明显大于其他处理。【结论】葡萄糖能够促进鹅原代肝细胞的增殖。 相似文献
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恩诺沙星单克隆抗体的制备及ciELISA试剂盒的研制 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】研制快速、灵敏、特异的恩诺沙星残留检测ciELISA试剂盒(ENR-Kit),为动物源性食品中恩诺沙星(ENR)残留的快速免疫学检测奠定基础。【方法】通过细胞融合技术制备恩诺沙星单克隆抗体(ENR mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法生产ENR单抗,应用ENR mAb研制ENR残留间接竞争ELISA(ciELISA)快速检测试剂盒,并对其灵敏度、半数抑制浓度(IC50)、特异性、准确度和基质效应性进行检测。【结果】筛选出2株杂交瘤细胞,其单抗亚类均为IgG1亚型。4G1-B3杂交瘤细胞株的ENR mAb间接ELISA效价为1∶1.024×106,亲和常数(Ka)为9×1010L/moL。ENR-Kit的线性检测范围为0.05~48.75μg/L,灵敏度0.05μg/L,半数抑制浓度(IC50)为1.31μg/L,与环丙沙星的交叉反应率(CR)为0.02%,与其他化合物的交叉反应率(CR)均<0.01%。ENR-Kit对牛奶样、鱼肉样和鸡肉样中ENR的平均添加回收率分别为96.49%,86.95%和84.13%,平均变异系数均<10%,不同基质对ENR-Kit检测结果影响小。【结论】研制的ENR-Kit具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合ENR残留快速检测的推广应用。 相似文献
4.
NaCl胁迫对沙葱苗期根系特征及无机离子含量的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】研究NaCl胁迫对沙葱苗期根系形态特征及无机离子含量的影响,分析沙葱的耐盐强度,以提高沙葱在盐碱地上的生产能力,为盐碱地的开发利用提供参考。【方法】以沙葱幼苗为材料,采用盆栽法,经不同浓度(0(对照,CK),25,50,75,100,150 mmol/L) NaCl胁迫15 d后,研究沙葱根系干质量、鲜质量、长度、表面积、体积、活力和无机离子(K~+、Na~+、Ca~(2+)、Mg~(2+))含量的变化。【结果】随着NaCl浓度的增加,沙葱根系干、鲜质量和根系活力均呈降低趋势;而根系长度、表面积、体积均呈先增加后下降的趋势,当NaCl浓度为50 mmol/L时均达最大值。在不同浓度NaCl胁迫处理下,沙葱幼苗根系中Na~+、K~+含量均较对照增加,且当NaCl浓度为150 mmol/L时Na~+、K~+含量较高;但幼苗根系中Ca~(2+)、Mg~(2+)含量均较对照下降。【结论】适宜沙葱幼苗根系生长的NaCl浓度为25～50 mmol/L,此时根系生长良好,Ca~(2+)、Mg~(2+)含量无明显降低。 相似文献
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【目的】研究中度干旱(60%田间持水量)下,缓解辣椒幼苗干旱胁迫的适宜的CoCl2溶液浓度.【方法】以‘陇椒5号’辣椒为试材,采用不同浓度CoCl2(0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12mmol/L)溶液浇灌处理,并测定处理期间辣椒幼苗相关生长生理指标.【结果】随着CoCl2浓度的增加,辣椒幼苗株高、茎粗、地上部干质量、根冠比呈先增大后减小的趋势,均在0.06~0.08mmol/L处理时出现峰值;CoCl2浓度在0.06mmol/L以上时可显著促进叶片中叶绿素含量的增加;0.06~0.10mmol/L CoCl2处理辣椒幼苗叶片丙二醛和脯氨酸含量显著低于单一干旱胁迫处理;高浓度的CoCl2(0.10~0.12 mmol/L)处理,对地下部干物质的积累和根系的伸长有显著的抑制作用.【结论】综合各项生长及生理指标,外源施用0.06~0.08mmol/L CoCl2可缓解辣椒幼苗干旱胁迫. 相似文献
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【目的】建立一种检测猪瘟疫苗病毒(HCLV)含量的荧光定量PCR方法。【方法】用RT-PCR方法扩增HCLV基因200bp片段,构建含有该基因片段的重组质粒,对此重组质粒进行系列稀释后作为SYBR GreenⅠ荧光定量PCR模板,绘制定量检测HCLV的标准曲线。【结果】在(6.4×107~6.4×102)copies/μL模板浓度范围内,荧光定量PCR的扩增效率为92.2%,标准曲线的决定系数为0.9997。该方法的精确灵敏度为640copies/μL,重复性试验的变异系数小于2%,对牛病毒性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测结果均为阴性。临床检测结果显示,不同商品猪瘟疫苗之间的病毒载量存在明显差异。【结论】建立了1种具有良好特异性与敏感性的HCLV荧光定量PCR检测方法。 相似文献
8.
【目的】探明不同氮钾条件下水芹的生长及品质差异,为提高蔬菜产品器官营养成分含量和抗氧化活性的优质栽培技术提供理论基础。【方法】以湿栽水芹G0601为试验材料,通过基础营养液栽培进行氮钾营养调控,比较不同氮钾水平[(营养液N浓度4.5mmol/L(N_(4.5))、9mmol/L(CK_1,N_9)和18mmol/L(N_(18)),K浓度3mmol/L(K_3)、6mmol/L(CK_2,K_6)和12mmol/L(K_(12))]湿栽水芹产品器官营养成分含量及抗氧化活性差异。【结果】水芹产量随营养液N浓度增加而提高,随K浓度增加而降低;水芹光合速率和叶绿素含量随N浓度增加而增加,随K浓度变化无明显差异;可溶性蛋白含量随N浓度增加而提高,随K浓度增加而降低;可溶性糖、甘露醇含量均以对照(N_9与K_6处理)最高;总酚与DPPH自由基清除率随N浓度增加而提高,随K浓度增加而降低。【结论】综合考虑产量及抗氧化活性因素,保持基础营养液中其他成分浓度不变,N、K浓度分别设置为18mmol/L和6mmol/L,可作为湿栽水芹的最优营养液配方。 相似文献
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【目的】建立黄颡鱼仔鱼(Pelteboagrus fulvidraco)卵黄蛋白的ELISA检测方法,探讨黄颡鱼仔鱼体内卵黄蛋白含量的发生规律及仔鱼投喂生物饵料的最佳时间,为研究黄颡鱼仔鱼早期营养和开口饵料提供依据。【方法】以黄颡鱼仔鱼为试验材料,卵黄蛋白抗血清为抗体,纯化的卵黄蛋白为抗原,建立间接竞争酶联免疫吸附反应(ELISA)检测方法,测定黄颡鱼仔鱼卵黄蛋白在不同发育时期(破膜43,48,57,65,72,81,89,96,105,113,120和129h)的变化情况。【结果】黄颡鱼仔鱼卵黄蛋白ELISA检测中,抗血清的最佳稀释倍数为1∶20 000倍,包被抗原的最佳质量浓度为125ng/mL,最适检测质量浓度为20～2 000ng/mL,批内变异系数为6.529%,批间变异系数为6.873%。利用建立的ELISA方法检测发现,黄颡鱼卵黄蛋白含量随发育时间的延长而逐渐递减,至96h时缓慢下降直至消失。【结论】利用ELISA方法能相对准确地检测黄颡鱼仔鱼卵黄蛋白含量的变化,破膜96h是黄颡鱼仔鱼由内源营养阶段转向外源营养阶段的转折点,此时开始投喂适口的生物饵料更有利于黄颡鱼仔鱼开口摄食及生长发育。 相似文献
10.
检测鸡蛋中12种喹诺酮类药物残留的HPLC方法 总被引：3，自引：0，他引：3
【目的】建立并验证同时检测诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、噁喹酸、萘啶酸和氟甲喹等12种喹诺酮类药物在鸡蛋中残留的高效液相色谱-荧光检测分析方法。【方法】鸡蛋样品以乙腈-三氯乙酸溶液匀浆和超声提取,经反相聚合物SPE净化和浓缩;样品以乙腈-柠檬酸/乙酸铵缓冲液为流动相、经C18柱HPLC梯度洗脱分离,用荧光检测器程序波长检测。【结果】线性范围除达氟沙星为5.0～160.0 μg•kg-1外,其余11种药物为12.5～400.0 μg•kg-1。添加6个浓度测得的校正曲线的相关系数除氟甲喹为0.982以外,其它11种药物均大于0.995。添加1/2 MRL、MRL、2 MRL共3个浓度水平3批样品的回收率除萘啶酸为52%外,其它11种药物为68%～85%。批内变异系数＜8%,批间变异系数除氟甲喹1/2 MRL为18.0%和恩诺沙星1/2 MRL为18.8%外,其它药物均≤13.0%。12种药物的检测限为0.2～4.1 μg•kg-1,定量限为0.9～13.5 μg•kg-1。【结论】建立的检测鸡蛋中12种喹诺酮类药物残留的HPLC方法简便、快速、使用有机溶剂少,适用范围广,适合大量样品的筛选和定量检测。 相似文献
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鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用 总被引：1，自引：1，他引：0
【目的】制备抗氟苯尼考（FFC）的高亲和力特异性抗体,建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HSA）经混合酸酐法偶联,得到免疫抗原和包被抗原,其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫原FFC-HS-BSA免疫新西兰大白兔获得了效价较高的特异性抗体。建立并优化了间接竞争ELISA检测方法。【结果】抗血清效价为1﹕102 400。最佳包被抗原浓度为0.5 μg?ml-1,最佳抗体工作浓度为1﹕6 400,酶标二抗的工作浓度为1﹕20 000。回归方程Y = -0.1516X + 0.788（R2 = 0.9859）,检测范围为0.18～500 ng?ml-1,检出限为0.18 ng?ml-1,批内和批间平均变异系数分别为4.86%和7.77%。交叉反应试验中,抗血清与FFC结构相似的氯霉素和甲砜霉素交叉反应率分别为0.094%和0.098%,与其它药物交叉反应率均小于0.01%,表明该方法具有很强的特异性。FFC以浓度0.18～500 ng?g-1在鸡肉中添加,回收率为84.14%～106.1%,变异系数为2.1%～5.6%。【结论】成功获得了高效价、高特异性的抗FFC抗体,建立了鸡肉中氟苯尼考残留检测的ELISA方法。结果表明,所建立的检测方法具有灵敏、准确、简便、快速的特点。 相似文献
12.
【目的】分析盐胁迫下黄花菜体内矿质离子含量的变化,为在盐碱地推广种植黄花菜以及利用黄花菜改良盐碱地提供参考。【方法】以山西大同黄花菜为材料,采用营养液水培法,以正常营养液培养为对照,研究不同浓度Ca(NO_3)_2(50,100,150,200,250 mmol/L)胁迫对黄花菜生物量及植株体内矿质离子含量的影响,探讨黄花菜可能的耐盐机制。【结果】随Ca(NO_3)_2胁迫浓度的提高,黄花菜植株生物量显著降低,根系和叶片Ca~(2+)、Na~+、Fe~(2+)、Zn~(2+)及Cl~-含量均呈"升高-降低"的变化规律,Mg~(2+)含量逐渐降低,Cu~(2+)含量无明显变化规律,NO~-_3含量逐渐增加。除Mg~(2+)含量叶片高于根系、Cl~-含量随Ca(NO_3)_2胁迫浓度的提高出现"根叶相当-根低于叶-根高于叶"的变化外,各处理其他矿质离子含量均表现为根系高于叶片。【结论】可在中度(70～150 mmol/L单价盐)以下盐碱地种植黄花菜,扩大其生产规模;通过每年割除地上部逐渐改良盐碱地,使其成为宜耕良田。 相似文献
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钙对低温胁迫下玉米种子萌发及幼苗生长的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】研究外源钙对低温胁迫下玉米幼苗根系保护酶活性、玉米种子萌发及幼苗生长的影响,以期为提高玉米苗期抗寒性及玉米抗寒育种提供理论依据.【方法】以‘郑单958’玉米种子为试验材料,用不同浓度(0、5、10、15、20mmol/L)的CaCl2溶液处理低温胁迫下的玉米种子,研究低温胁迫下CaCl2对玉米种子萌发和幼苗生长的影响.【结果】低温明显抑制了玉米种子的萌发,影响了玉米苗高和根长的增加,抑制了脯氨酸和可溶性糖含量的累积,提高了丙二醛(MDA)含量.一定浓度的外源钙(5~15mmol/L)可提高低温胁迫下玉米种子的发芽率,提高玉米幼苗根系脯氨酸含量的积累,抑制丙二醛含量的增加.【结论】不同浓度钙对低温胁迫的缓解程度不同,适宜浓度的外源钙(5~15mmol/L)能明显改善低温胁迫对玉米幼苗生长的抑制作用,提高玉米幼苗对低温胁迫的适应性,增加玉米种子萌发和幼苗正常生长的能力.浓度为10mmol/L的CaCl2溶液处理对玉米低温胁迫的缓解效果最佳. 相似文献
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【目的】花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)严重威胁花鲈养殖业安全,无特效防控药物,早期诊断在LMIV防控中发挥极其重要的作用。建立一种简便、快捷、准确的现场快速诊断方法,可为LMIV的基层诊断提供技术支撑。【方法】利用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA),针对LMIV ATPase基因高保守区设计1套单交叉引物。以构建的ATPase重组质粒作为阳性模板,对反应体系中的引物浓度比,Bst DNA聚合酶、Betaine、MgSO4、dNTP浓度,以及反应温度和反应时间进行优化;结合一次性核酸试纸条,建立可视化检测LMIV-CPA的方法。【结果】最优引物浓度比组合为交叉引物CPF1.0μmol/L,引物F3和B3均为0.4μmol/L,探针引物B1(FAM)和B2(Biotin)均为0.8μmol/L;MgSO4浓度为6 mmol/L、Betaine浓度为0.4 mol/L、dNTP浓度为0.6 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为0.256 U/μL;最佳反应... 相似文献
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【目的】大麦坚黑粉菌(Ustilago hordei)和裸黑粉菌(Ustilago nuda)是引起青藏高原青稞黑穗病的主要病原菌,建立快速、简便、特异性强的大麦坚黑粉菌和裸黑粉菌环介导等温扩增技术(LAMP)检测体系,检测青稞种子的带菌量,再依据带菌程度进行播前种子处理,是控制青稞黑穗病的重要技术手段。【方法】根据大麦坚黑粉菌(Ustilago hordei)和裸黑粉菌(Ustilago nuda)的ITS基因序列与其他对照菌株同源性低的区段设计并获得有效引物1组,建立LAMP检测体系,并选取影响LAMP反应体系的5个主要因素dNTPs、甜菜碱、镁离子、Bst DNA聚合酶及温度进行单因素试验对其进行优化,最后对优化后的LAMP检测体系进行灵敏度和特异性检测。【结果】建立了青稞黑穗病菌的LAMP检测体系,其优化后dNTPs浓度为1.8 mmol/L、甜菜碱浓度为0.8 mmol/L、镁离子浓度为10 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为320 U/mL,反应温度为65℃。应用该体系在45 min内能检测出2×10~(-4)ng/μL的裸黑粉菌,在60 min内能检测出2×10~(-4) ng/μL的大麦坚黑粉菌,即在60 min内可检测出2×10~(-4)ng/μL的大麦坚黑粉菌和裸黑粉菌。建立的青稞黑穗病菌LAMP检测体系对大麦坚黑粉菌和祼黑粉菌具有特异性。【结论】建立了青稞黑穗病菌的LAMP检测体系,该体系能在1 h内检测出2×10~(-4)ng/μL的裸黑粉菌和大麦坚黑粉菌。 相似文献
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【目的】探究外源海藻糖对盐胁迫下番茄幼苗生长和抗氧化机制的影响。【方法】以番茄(Solanum Lycopersicum L. ‘Ailsa-Craig’)幼苗为材料，叶面喷施不同浓度的海藻糖溶液预处理2 d后进行盐胁迫，胁迫7 d后测定株高、茎粗等形态指标及相对电导率、丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)含量等生理指标。【结果】不同浓度的海藻糖预处理有利于盐胁迫下番茄幼苗的生长，以10 mmol/L预处理效果最佳。与盐胁迫相比，10 mmol/L海藻糖处理下番茄株高和茎粗分别增长了28.8%和15.3%；鲜质量和干质量分别增加了15.4%和20.5%；叶面积和总根长增加了23.6%和23.1%。与盐胁迫相比，经过10 mmol/L预处理的番茄叶片相对电导率显著降低了11.4%；超氧阴离子(O2-·)、H2O2和MDA含量分别降低了17.8%、40.4%和26.6%。盐胁迫下，10 mmol/L海藻糖预处理过的番茄幼苗的抗氧化酶(SOD,POD,CAT和... 相似文献
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【目的】建立检测胞内劳森菌的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,为猪增生性肠炎的准确诊断奠定基础。【方法】针对胞内劳森菌16SrDNA序列设计引物,扩增16SrDNA,构建pT-LI-16S重组质粒。以pT-LI-16S为模板建立检测胞内劳森菌的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,检测其特异性、敏感性和重复性,并用该方法对51份疑似增生性肠炎病例进行检测。【结果】建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强,与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和副猪嗜血杆菌等无交叉反应;在标准质粒含量为1.0×102~1.0×108拷贝/μL时,质粒含量与循环阈值(Ct)之间具有良好的线性关系(R2=0.992),最小可检测到10拷贝/μL的重组质粒;重复性检测显示其批内变异系数小于2%。该方法对粪便及小肠组织中胞内劳森菌的检出率分别为46.9%和84.2%,高于普通PCR的检出率(分别为40.7%和78.9%)。【结论】建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,能对胞内劳森菌进行快速检测及定量分析,可用于猪增生性肠炎的诊断。 相似文献
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外源褪黑素对猕猴桃幼苗盐胁迫的缓解作用 总被引：1，自引：0，他引：1
《四川农业大学学报》2017,(4):535-539
【目的】探讨外源褪黑素(MT)对盐胁迫下猕猴桃幼苗生理特性的影响,为提高猕猴桃抗盐性提供理论依据。【方法】以当年生美味猕猴桃(Actinidia deliciosa)实生苗为试验材料,通过分别根灌0、0.1、0.5和1μmol/L MT溶液进行预处理5d后,再全部根灌100 mmol/L NaCl溶液进行胁迫处理12 d,以处理过程全部根灌清水的植株为空白对照,在胁迫处理结束后测定盆栽猕猴桃幼苗的相关生理指标。【结果】与空白对照相比,100 mmol/L NaCl胁迫显著增加猕猴桃叶片相对电导率、过氧化氢(H_2O_2)含量、丙二醛(MDA)含量、可溶性糖含量、脯氨酸含量、抗氧化保护酶(超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT))活性,减少可溶性蛋白含量;与仅根灌NaCl溶液的植株(S)相比,根灌不同浓度的MT溶液预处理可使盐胁迫下猕猴桃叶片相对电导率降低11.01%~35.33%,活性氧H_2O_2含量降低10.64%~34.04%,MDA含量减少9.99%~24.61%,同时缓解可溶性蛋白的降解,增加脯氨酸和可溶性糖含量,使SOD、POD和CAT活性分别提高2.01%~2.71%、49.78%~58.82%和7.19%~26.14%。【结论】MT可有效缓解盐胁迫对猕猴桃幼苗的伤害,以0.1μmol/L的MT溶液预处理效果最好。 相似文献
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【目的】研制磺胺间甲氧嘧啶(Sulfamonomethoxine,SMM)残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SMM-Kit),为有效治理磺胺间甲氧嘧啶的滥用,保障动物源性食品安全提供技术支撑。【方法】在成功研制SMM单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)的基础上,应用阻断ELISA试验原理研制SMM-Kit,并对其特性进行了系统测定。【结果】SMM-Kit标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.992 8,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为1.33~389.9μg/L,灵敏度为3.57μg/L,半数抑制浓度(IC50)为17.07μg/L。牛奶样和猪尿样的平均添加回收率分别为91.5%和92.0%,平均批内和批间变异系数均低于15%;基质对SMM-Kit检测结果的影响不大;SMM-Kit与其他磺胺类药物的交叉反应性<1.7%,表明其与其他药物几乎无交叉反应性;试剂盒在4℃可保存6个月。【结论】成功地研制出了SMM-Kit,在牛奶和猪尿液样品中的初步应用证明,该试剂盒灵敏度、准确度高,特异性强,可低温保存6个月。 相似文献