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1.
为了给小麦主要过敏原CM16蛋白的重组表达和免疫活性鉴定等研究奠定基础,通过生物信息学方法设计并合成简并性引物,利用RT-PCR技术对小麦主要过敏原CM16基因进行克隆,并进行序列分析. 结果表明,克隆获得了小麦主要过敏原CM16基因.基因开放阅读框为432个碱基(包括终止密码子), 编码143个氨基酸.该序列编码的蛋白相对分子质量约为15 782,等电点为5.17.序列同源性分析发现其与国外报道的已知小麦CM16基因具有很高的同源性(同源性为99%),因此认为其系小麦过敏原基因,在GenBank数据库中的登录号为EU883599. 相似文献
2.
大豆主要过敏原Gly m Bd 30K基因的克隆及其原核表达载体的构建 总被引：1，自引：1，他引：0
利用RT-PCR克隆大豆主要过敏原Gly m Bd 30K的全长基因,根据序列设计带有酶切位点的特异性引物,扩增大豆GlY m Bd 30K的完整开放阅读框,与pET一28a载体连接,构建原核表达载体.结果表明:克隆了大豆主要过敏原Gly m Bd 30K基因,且构建了其原核表达载体.该基因含有长度为1 140 bp的开放阅读框,编码379个氨基酸.该蛋白质的相对分子质量为42 758,等电点为5.08.序列同源性分析发现其与数据库中已知的Gly m Bd30K基因同源性很高,因此认为其是大豆的过敏原基因,在GenBank数据库中的登录号为EU883600.克隆的大豆主要过敏原Gly m Bd 30K基因及构建的原核表达载体,为大豆主要过敏原Gly m Bd 30K的重组表达和免疫活性鉴定等奠定基础. 相似文献
3.
为了给转HARDY(HRD)基因小麦研究奠定基础,利用PCR技术从拟南芥中克隆HRD基因,进行生物信息学分析,预测其编码的蛋白质结构与功能,构建原核表达载体pET28a(+)-HRD,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白的表达,同时构建pBin-HRD植物表达载体。测序分析结果表明,克隆的HRD与NCBI发布的拟南芥核苷酸序列的同源性为99%,其开放阅读框长555bp,可编码184个氨基酸,具有许多重要功能位点;成功构建了原核表达载体pET28a(+)-HRD和植物表达载体pBin-HRD,诱导表达出大小约为23.3kD的蛋白,与理论值相近。 相似文献
4.
利用同源克隆和RACE(Rapid amplification of cDNA ends)技术从甘蓝型油菜中克隆到精氨酸脱羧酶(Arginine decarboxylase,ADC)基因cDNA全长序列,命名为BnADC。BnADC全长为2 649bp,包含344bp的5′非翻译区(5′ Untranslated region,5′-UTR)、226bp的3′非翻译区(3′ Untranslated region,3′-UTR)和2 079bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),编码75.1kD的蛋白质。5′-UTR中含有12bp的uORF (Upstream open reading frame),编码MIRE 4个氨基酸。氨基酸同源性比对表明,BnADC蛋白与其他植物ADC蛋白具有很高的相似性,与芥菜的同源性高达93%;系统进化树分析表明,BnADC与芥菜、拟南芥的ADC亲缘关系较近。在获得全长cDNA的基础上,构建融合表达载体pET30a(+)-BnADC,转化大肠杆菌（Escherichia coli）表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE检测到一个约81.1kD的融合蛋白被E. coil表达,且融合蛋白主要存在于菌体沉淀中。 相似文献
5.
大豆rbcL基因克隆、序列分析及原核表达 总被引：1，自引：0，他引：1
利用叶绿体基因组保守性的特征,根据菜豆、豌豆、烟草的rbcL基因序列设计引物,从大豆叶绿体DNA中克隆rbcL基因,全长序列为1488bp,包括1449bp的开放阅读框,编码482个氨基酸。相似性比较显示,此序列与其它10个物种rbcL基因核苷酸的同源性为85.37%～95.31%,氨基酸的同源性为90.87%～96.47%。将该基因与表达载体pET-30a（+）连接,转化大肠杆菌Rosseta感受态细胞,PCR和酶切鉴定筛选阳性克隆,阳性菌液IPTG诱导后经10%SDS-PAGE分析,结果显示：诱导表达出分子量约为60kD的特异融合蛋白。 相似文献
6.
水稻稻曲病菌G蛋白β亚基基因的克隆、表达与序列分析 总被引：2，自引：0，他引：2
水稻稻曲病是由稻绿核真菌[Ustilaginoidea virens(Cooke)Tak]引起的一种常见的水稻后期穂部病害。G蛋白可能参与了稻曲病菌的致病过程。为了研究G蛋白在病菌致病过程中的作用,分离并分析了稻曲菌的G蛋白β亚基编码基因。根据丝状真菌G蛋白β亚基编码基因的同源保守序列设计简并引物,采用同源克隆和热不对称交错PCR的方法,分离得到了稻曲菌的G蛋白β亚基全编码基因序列。该序列的长度为2037bp,包含4个内含子,5个外显子和1个编码359个氨基酸的开放阅读框。根据克隆到的UvGβ1设计引物,通过RT-PCR克隆到包含整个开放阅读框的cDNA序列。该基因的DNA序列和cDNA序列在GenBank中注册的登记号分别为GU014921和GU065745。系统进化分析表明该片段与栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)的G蛋白β亚基基因亲缘关系最近。将该基因的整个开放阅读框连接于pET-30a构建原核表达载体,通过诱导获得了重组蛋白。 相似文献
7.
根据Thanatephorus cucumeris G蛋白β亚基序列（AY884129）设计引物,对水稻立枯丝核菌AG 1IA的 G蛋白β亚基基因进行了克隆。PCR结果得到1条约为1.9 kb的扩增片段,包含1个约1.7 kb的完整开放阅读框,编码366个氨基酸。同源性检索发现该序列与大量Ｇ蛋白β亚基基因明显同源,一致性介于57.34%~88.14%。根据其推导cDNA序列设计引物进行RT PCR分析,发现该基因在对数生长期表达量最高,提示水稻立枯丝核菌AG 1IA G蛋白β亚基基因可能具有时空表达特性。 相似文献
8.
红海榄脱水素基因(RsDHN1)的克隆及表达分析 总被引：2，自引：0，他引：2
采用RT-PCR和RACE技术对已获得的红海榄根部其中一个差异表达基因进行克隆,通过Blast分析和序列比对可知,该基因全长cDNA序列包括146bp的5'端非编码区,43bp的3'端非编码区和一个编码241个氨基酸的开放阅读框,命名为RsDHN1基因。该cDNA编码的蛋白具有植物脱水素蛋白的特征性结构,属于SKn类脱水素蛋白,与其它植物的SKn类脱水素蛋白具有43%～55%的氨基酸序列同源性。半定量RT-PCR分析表明,盐胁迫对RsDHN1基因的表达有明显上调作用。 相似文献
9.
通过PCR方法从苏云金芽孢杆菌010菌株克隆出几丁质酶基因chi36,该基因开放阅读框(ORF)的长度为1 083bp,编码360个氨基酸。氨基酸序列分析表明:Bt 010的Chi36与Bt15A3、Bc28-9、Bc6E1的Chi36相似性分别为99%、99%和96%,其N-端具有27个氨基酸的信号肽序列。该蛋白归类为18家族几丁质酶,属于一种胞外酶。将chi36基因插入到PGEX-KG原核表达载体的表达框中,构建成原核表达载体并转化到大肠杆菌E.coli BL21(DE3)进行蛋白表达,酶活性测定结果表明,表达产物对几丁质有降解作用,在pH值为5.0、温度为55℃时酶活性最高。 相似文献
10.
水稻黑条矮缩病毒基因组S7编码的2个非结构蛋白在病株中的表达检测 总被引：1，自引：1，他引：0
水稻黑条矮缩病毒（RBSDV）基因组片段S7含有2个非重叠的阅读框,所编码的蛋白分别为p7a和p7b。根据RBSDV S7序列（EU111804）设计特异性引物分别扩增编码p7a和p7b蛋白的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pET 32a（+）和pSBET上,再以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS或BL21(DE3)pLysE为宿主菌进行高水平表达,利用纯化的蛋白免疫小鼠,制备了p7a和p7b蛋白的特异性抗血清。蛋白质印迹分析表明p7a和p7b蛋白均在水稻病株中表达,但p7a含量较为丰富,易于在病株中检测到,而p7b在病株中含量则很低;在病毒粒子中,两者均未检测到任何信号,表明两者均为RBSDV的非结构蛋白。 相似文献
11.
《Journal of Cereal Science》2005,41(1):23-29
Rice oil bodies enclosed by unique structural proteins, oleosins, are found in the embryo and the aleurone layer, but not the starchy endosperm where starch and storage proteins are accumulated. To examine oleosin promoter specificity, a sesame storage protein, 2S albumin, was expressed in transgenic rice seeds under the control of a rice oleosin promoter. In all transgenic rice seeds, the sesame 2S albumin was found exclusively in the bran fraction after milling. Immunological staining revealed that the sesame 2S albumin was also located in the embryo and the outermost cells of the starchy endosperm. Furthermore, immunogold labeling showed that the transgenic 2S albumin was deposited in both type-I and type-II protein bodies of the outermost cells of the endosperm as well as in the type-II protein bodies of the embryo. The methionine and cysteine contents in the bran from four homozygous transgenic lines were elevated by 24–38 and 50–62%, respectively, compared with those of wild-type plants. The results suggest that the rice oleosin promoter is bran-specific and could be used to add value to rice bran, an abundant by-product of rice polishing, by genetic engineering. 相似文献
12.
Tiger T.T. Lee Wei-Ming Leu Hsueh-Hui Yang Balance C.M. Chen Jason T.C. Tzen 《Journal of Cereal Science》2006,44(3):333-341
A recombinant polypeptide containing the precursor protein of a sesame storage protein, 2S albumin, fused to the C-terminus of a sesame oleosin was expressed in transgenic rice seeds under the control of a rice glutelin promoter. The recombinant polypeptide of 32 kDa, equivalent to the resultant molecular mass of sesame oleosin (15 kDa) and prepro-2S albumin (17 kDa), was detected in the endoplasmic reticulum fraction of maturing transgenic rice seeds, but not in the purified oil bodies or the soluble extract of transgenic seeds. However, sesame oleosin presumably fused with a 2 kDa C-terminal appendix originating from the signal sequence of prepro-2S albumin, was found in the purified oil bodies, and mature sesame 2S albumin apparently processed into two subunits (9 and 4 kDa) linked by disulfide bonds was detected in extracts of transgenic seeds. Immunogold labeling revealed that the sesame oleosin and 2S albumin were separately located in oil bodies and protein bodies of embryo cells of transgenic rice seeds. While sesame 2S albumin was also detected in protein bodies of endosperm cells of transgenic seeds, the co-expressed sesame oleosin, probably degraded due to the lack of oil bodies in this tissue, and was not detected. The results provide a new technique for introducing two recombinant polypeptides separately into rice oil bodies and protein bodies from one expression construct. 相似文献
13.
《Journal of Cereal Science》2007,45(3):333-341
A recombinant polypeptide containing the precursor protein of a sesame storage protein, 2S albumin, fused to the C-terminus of a sesame oleosin was expressed in transgenic rice seeds under the control of a rice glutelin promoter. The recombinant polypeptide of 32 kDa, equivalent to the resultant molecular mass of sesame oleosin (15 kDa) and prepro-2S albumin (17 kDa), was detected in the endoplasmic reticulum fraction of maturing transgenic rice seeds, but not in the purified oil bodies or the soluble extract of transgenic seeds. However, sesame oleosin presumably fused with a 2 kDa C-terminal appendix originating from the signal sequence of prepro-2S albumin, was found in the purified oil bodies, and mature sesame 2S albumin apparently processed into two subunits (9 and 4 kDa) linked by disulfide bonds was detected in extracts of transgenic seeds. Immunogold labeling revealed that the sesame oleosin and 2S albumin were separately located in oil bodies and protein bodies of embryo cells of transgenic rice seeds. While sesame 2S albumin was also detected in protein bodies of endosperm cells of transgenic seeds, the co-expressed sesame oleosin, probably degraded due to the lack of oil bodies in this tissue, and was not detected. The results provide a new technique for introducing two recombinant polypeptides separately into rice oil bodies and protein bodies from one expression construct. 相似文献
14.
为探讨甲基结合蛋白(MBD)在小麦生长发育过程中的生物学功能,通过RACE技术克隆了小麦TaMBD2基因的cDNA全长,并分析了该基因在小麦叶片、种子发育及萌发过程中的表达特性。RACE克隆及序列分析表明,TaMBD2基因cDNA全长为1 511 bp,其中5 UTR 164 bp,3 UTR 405 bp,ORF 942 bp。对该基因编码氨基酸序列的分析发现,TaMBD2编码蛋白中包含有1个典型的甲基结合域和1个CW型锌指结构域;通过RT-PCR分析发现,TaMBD2基因在叶片中的表达随着小麦的生长发育而逐渐增强;在种子发育过程中,该基因在花后20和30 d时的表达量最高;在种子萌发过程的胚和胚乳中,该基因的表达水平变化不大。 相似文献
15.
类花生致敏原3(iso-ARah3)是花生致敏原3的同系物,其表达活性与干旱及黄曲霉侵染相关。本研究通过RT-PCR技术从花生种子cDNA文库中克隆获得iso-ARah3的开放阅读框(ORF),全长1533bp,编码510个氨基酸,N端预测有20个氨基酸的信号肽序列。通过序列比对发现,该克隆序列有1处缺失突变,其N端210个氨基酸序列与胰蛋白酶抑制因子的同源性较高,达83.60%。通过构建原核表达载体pET28a-isoARah3,转化进大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE检测表明,融合蛋白His-isoARah3获得高效表达,分子量约54kD。His-isoARah3经纯化和富集,对新西兰兔进行4次免疫,纯化获得的iso-ARah3多克隆抗血清,通过间接ELISA检测,表明获得了效价比(1∶512000)很好的抗体。通过对融合蛋白的诱导前和纯化后样品进行Western Blot分析,结果显示仅在纯化样品相应位置(54kD)有明显信号,表明所制备的抗体具有很高灵敏度和特异性。本研究结果为深入研究花生iso-ARah3基因的功能奠定了基础。 相似文献
16.
人工老化处理对芝麻种子生理生化特性的影响 总被引：4，自引：0，他引：4
以郑芝4号黑芝麻种子为材料,研究了人工加速老化处理对种子发芽指标﹑丙二醛(MDA)含量﹑过氧化物酶(POD)活性和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。试验结果表明：随着种子老化加深,发芽势、发芽率、发芽指数﹑活力指数逐渐降低, 丙二醛含量逐渐升高。另外,老化种子内POD活性和SOD活性变化的总趋势是随老化时间延长而降低。由此认为芝麻种子人工老化及劣变的主要机制与抗氧化酶活性降低与和膜脂过氧化作用加剧有关。人工老化种子生活力出现快速下降的发芽势拐点是80%,其下降的趋势又与POD活性下降非常一致,POD可作为一个检测指标显示种子活力高低及丧失的特征。 相似文献
17.
芝麻坏死花叶病毒(SNMV)部分cDNA合成及序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
提取芝麻坏死花叶病毒RNA ,反转录合成cDNA ,对滞后重组质粒进行点杂交 ,得到阳性克隆并且测定序列。经计算机分析 ,获得 336 8个核苷酸 (nt)的序列。该序列含有一个完整的开放阅读框架 (ORF) ,该ORF由1134nt组成 ,推测编码 377个氨基酸 ,分子量为 4 0 .0 4 7× 10 3 道尔顿 (Da)。经比较它与Tombusviride科中Avreusvirus属石柑子潜隐病毒 (Pothoslatentvirus,PoLV)、Tombusvirus属病毒Cymbidiumringspotvirus(CRSV)外壳蛋白 (CP)氨基酸序列同源性分别为 4 0 .7%、4 0 .1% ,其起始氨基酸与Tombusvirus、Aureusvirus属另外的病毒CP起始氨基酸具有很高的保守性。根据这个完整ORF所编码蛋白的大小 ,与CRSV、PoLV病毒CP具一定的同源性 ,CP 5′端氨基酸的保守性 ,推测这个完整的ORF可能包含该病毒的外壳蛋白基因 ,并且这个病毒可能类似PoLV病毒 ,是Tombusviride科Aureusvirus属的一种新病毒 相似文献
18.
赤霉素的生物合成是多种酶促反应的过程,与植物植株发育、逆境响应密切相关。为分析芝麻基因组中赤霉素合成相关基因的分布、结构和活性特征,本研究以芝麻基因组序列和不同组织转录组为对象,通过生物信息学方法,从中共鉴定出32个赤霉素合成相关基因,分属7个不同的基因家族,分布在除5号染色体外芝麻所有的染色体上。不同基因家族蛋白质肽链长度存在较大差异,其中CPS家族的蛋白质序列最长,平均包含776个氨基酸残基;KAO家族蛋白序列长度的变异最大,在401-834个氨基酸之间。所有芝麻赤霉素合成相关基因编码的蛋白质预测为亲水性蛋白。与拟南芥、水稻、大豆、葡萄、高粱、番茄等物种相比,芝麻中赤霉素合成相关基因数目处于中等水平,但CPS家族中芝麻的基因数目明显多于其他物种,进化分析表明,在分析的7个物种中,芝麻与番茄具有较近的进化关系。在不同组织中,7个相关基因家族表达模式不同。KS家族基因在种子、茎尖和叶片中表达相对较高;CPS家族基因在心皮和种子中活性较强,但在茎尖和叶片中几乎没有表达;KAO和KO家族基因在不同组织中整体上具有相对较高的活性,而KS、GA3ox家族的基因在不同组织中整体表达量较低。就不同组织而言,种子中的GA合成相关基因活性整体较高;而在根尖、茎尖、叶片等与芝麻植株形态建成密切相关的3个组织中,这些基因表达以根尖较突出、其次为茎尖,在叶片中的活性整体较低。本研究为解析芝麻赤霉素合成相关基因的结构特征及其在不同组织中的作用特点提供了基因信息和理论参考。 相似文献
19.
Gabriel I. Okeibuno Badifu Elizabeth M. Akpagher 《Plant foods for human nutrition (Dordrecht, Netherlands)》1996,49(2):119-126
Sesame seeds were boiled and allowed to sprout under ambient condition (30±2 °C) with an objective to reduce or eliminate the bitter taste associated with them. The untreated seeds were used as a control. The proximate composition, functional and organoleptic properties of defatted sesame flour were assessed at room temperature. There was a slight increase (about 10%) in protein content of sprouted seeds. The foaming capacity of flours from untreated, sprouted and boiled seeds were 34.6, 38.5 and 11.5%, respectively. The flour from the boiled seeds had the highest foam stability. Flours from untreated or sprouted seeds, gelation started at the least concentration of 6% whereas that from boiled seed was 11%. The emulsion capacity of flours from the untreated or sprouted seeds was the same (27.6 g oil/g sample) while that from boiled seeds was 12.9 g oil/g sample. Emulsion stability with prolonged storage appeared to be more with flours from the sprouted or boiled seeds than that from the untreated ones. The water absorption properties of flours from the untreated, sprouted and boiled seeds were 8.0, 5.9 and 6.5 g H2O/g sample, respectively whereas the oil absorption capacity same (5.9 g oil/g sample). The bitter taste in flours from the untreated or sprouted was high. The bitter taste was not detected in flour from boiled seeds and the functional properties of the flour were not deleteriously affected except foaming and emulsion capacity. Therefore, this boiling method of debittering sesame seed could be practised. The quality of sesame flour obtained with this boiling method could still serve its role in traditional dishes and in the formulation of some other conventional food products. 相似文献
20.
从GenBank中搜索到1条来自橡胶树的MYC(Myelocytomatosis)家族基因EST序列,以该序列为保守区,通过RACE技术获得了该基因全长cDNA序列,共1817bp。通过BLAST工具搜索GenBank数据库,结果表明,该cDNA序列同其他植物的MYC家族基因高度同源,认为该cDNA序列为橡胶树MYC家族成员。利用GenScan和Clastal X对该序列进行分析,推测其编码区长度为1428bp,编码476个氨基酸。生物信息学分析结果表明,巴西橡胶树的MYC基因编码的氨基酸序列与其他物种的相似性很高,同时推导的蛋白质序列中还存在着1个螺旋-环-螺旋的DNA结合区域和1个核定位信号,表明克隆到的基因是1个MYC家族成员的转录因子。 相似文献