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1.
转sMTPGH基因小鼠胚胎的体外培养 总被引：1，自引：0，他引：1
采用纯化的羊金属硫蛋白 (s MT)启动子指导的猪生长激素 (PGH )基因 (s MTPGH)为显微注射片段 ,将其导入小鼠受精卵原核 ,比较了几种不同培养液对导入外源基因的小鼠胚胎体外发育的影响。结果表明 ,改进的 M16培养液(用 m M16表示 )能有效克服 2 -细胞阻断现象 ,并使转基因胚胎发育到桑椹胚或囊胚阶段。在 m M16培养液的基础上 ,再加入表皮生长因子 (EGF) ,可使 1-细胞胚胎发育到囊胚的比率进一步提高。在 3种培养液 (M16、m M16、m M16 EGF)中 ,转基因胚胎突破 2 -细胞阻断期的比率分别为 12 %、6 8%、90 % ,发育到囊胚期的比率分别是 0 %、2 0 %、4 3%。采用 PCR方法检测 5 7枚经体外培养发育至囊胚的显微注射胚胎 ,4枚扩增出阳性条带 ,外源基因在囊胚期胚胎的滞留率为 7%。 相似文献
2.
为了完善小鼠体外受精和胚胎的体外培养系统，以M16为基础培养液，探讨了葡萄糖、磷酸盐、EDTA、谷氨酰胺及β－疏基乙醇等对小鼠体外受精和胚胎体外培养的影响。结果表明，在M16液中添加EDTA和L－谷氨酰胺（mM16液），小鼠的体外受精率由26％提高到51％；当在mM16液中去掉磷酸盐，或添加Hepes，或添加β－疏基乙醇，体外受精率由51％增至62％－74％；mM16液中添加Hepes，或去掉磷酸盐，可阻碍胚胎的体外发育，囊胚的抗张率由80％降至49％和58％，而在无糖mM16液中添加β－疏基乙醇，可显著地提高扩张囊胚率（91％）。以上结果表明、M16液中添加EDTA、谷氨酰胺和β－疏基乙醇后，适用于小鼠体外受精；同时去掉葡萄糖后，则适用于2细胞胚的体外培养。 相似文献
3.
影响小鼠早期胚胎发育的几个重要因素 总被引：2，自引：0，他引：2
以Ｗｈｉｔｅｎ氏液为基本培养液,研究了卵丘细胞、谷氨酰胺及不同浓度的葡萄糖对ＨＣＧ注射后１７～１８ｈ、２５～２７ｈ和３６～３８ｈ昆明小鼠胚胎体外发育的影响。结果表明,不论葡萄糖或谷氨酰胺存在与否,卵丘细胞与受精卵的共同培养对胚胎克服体外发育阻断无明显效果。葡萄糖能抑制１－细胞胚胎发育,促进４－细胞以后的胚胎发育。谷氨酰胺是小鼠早期胚胎发育的良好能源物质,可使９６％（３０８／３２１）的体外发育到２－细胞的胚胎克服阻断而继续发育到４－细胞。谷氨酰胺与葡萄糖联合使用,则可使小鼠受精卵的囊胚发育率达５７．５％（２２９／３９８）。ＨＣＧ注射后３６～３８ｈ的小鼠胚胎能利用葡萄糖。 相似文献
4.
牛体外受精早期胚胎与小鼠胎仔成纤维细胞共培养的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
探讨了人工合成培养液ＣＲ１ａａ和小鼠胎仔成纤维细胞对牛体外受精早期胚胎体外发育的影响。结果表明，牛体外受精卵在ＣＲ１ａａ液中的卵裂率达７６．２％，８细胞胚的比率达４４．８％。小鼠胎仔成纤维细胞能够显著促进牛体外受精的早期囊胚以上胚胎的发育。牛体外受精后第５、６天的早期胚胎分别与小鼠胎仔成纤维细胞共培养，在受精后第７天发育至囊胚以上的比率分别达１９．８％和２４．６％；受精后第８天，孵化的囊胚比例分别达５．２％和７．５％。实验表明，受精后第５、６天的牛体外受精早期胚胎与小鼠胎仔成纤维细胞共培养，可显著提高扩张囊胚和孵化囊胚数量。小鼠成纤维细胞对胚胎发育的支持作用取决于胚胎发育阶段 相似文献
5.
卵母细胞胞质中存在着大量的母源性信息，正常受精卵的发育启动和早期卵裂主要由这些母源性信息所控制。为了评估卵胞质含量对早期胚胎发育的影响，以假显微注射兔原核胚为对照，采用显微注射技术将兔原核期胚胎去除或增加一定量的细胞质：试验一，增加5％和20％的细胞质；试验二，移入5％小鼠MⅡ期卵母细胞胞质。胚胎经显微操作后进行R1／R2序贯培养。结果显示，（1）增量5％组胚胎的2细胞胚（72．00％）、8细胞胚（60．00％）、桑椹胚（58．00％）和囊胚（54．00％）的发育率均显著（P〈0．05）高于增量20％组胚胎（分别为47．62％、35．71％、33．33％和30．95％），但与对照组之间无显著差异（P〉0．05）；囊胚细胞数在2个增量组和对照组3者之间也无显著差异（P〉0．05）。（2）将5％小鼠MⅡ期卵胞质移入兔原核胚后，各阶段胚胎发育率和囊胚细胞数与增量5％组、对照组相比均无显著差异；早期胚胎经PCR检测，在2细胞胚（5／5）、8细胞胚（5／5）和桑椹胚（5／5）均全部检测到了供体小鼠mtDNA的D—loop区3’端片段，而在囊胚却仅有1枚（1／5）能够检测到。结果表明，增加少量细胞质不会对兔原核胚的体外发育造成显著影响，但胚胎发育率随着细胞质体积的增加有下降趋势，而异种卵胞质对兔原核胚的发育没有明显影响，在囊胚期虽仍能检测到异种卵胞质中mtDNA的存在，但异种mtDNA会随胚胎发育而逐渐减少。 相似文献
6.
试验旨在研究培养液中添加虾青素（AX）对小鼠胚胎体外发育和相关基因表达的影响。试验选用23~25 g的ICR系雌性小鼠,利用超数排卵,取卵母细胞进行体外受精,受精1 h后将受精卵随机分组、分别移入浓度为0、5、10、25、50 μmol/L的虾青素培养液中进行体外发育培养,在培养24和96 h后分别观察并统计各组的卵裂率和囊胚率;体外培养至96 h后,对囊胚进行细胞计数,统计囊胚细胞数差异;提取各组囊胚总RNA,利用实时荧光定量PCR技术对各组胚胎的TGF-β和Bcl-2基因的相对表达量进行检测。结果显示,添加10 μmol/L虾青素能够改善小鼠胚胎体外发育环境且显著提高胚胎卵裂率和囊胚率（P<0.05）;显著提高囊胚的细胞数（P<0.05）;极显著提高TGF-β基因表达量（P<0.01）。结果表明,添加10 μmol/L虾青素有利于小鼠胚胎体外发育,可用于改善小鼠胚胎体外发育环境;TGF-β和Bcl-2基因很可能参与了胚胎发育过程中的相关调控。 相似文献
7.
《中国畜牧兽医》2020,(1)
试验旨在研究培养液中添加虾青素(AX)对小鼠胚胎体外发育和相关基因表达的影响。试验选用23～25 g的ICR系雌性小鼠,利用超数排卵,取卵母细胞进行体外受精,受精1 h后将受精卵随机分组、分别移入浓度为0、5、10、25、50μmol/L的虾青素培养液中进行体外发育培养,在培养24和96 h后分别观察并统计各组的卵裂率和囊胚率;体外培养至96 h后,对囊胚进行细胞计数,统计囊胚细胞数差异;提取各组囊胚总RNA,利用实时荧光定量PCR技术对各组胚胎的TGF-β和Bcl-2基因的相对表达量进行检测。结果显示,添加10μmol/L虾青素能够改善小鼠胚胎体外发育环境且显著提高胚胎卵裂率和囊胚率(P0.05);显著提高囊胚的细胞数(P0.05);极显著提高TGF-β基因表达量(P0.01)。结果表明,添加10μmol/L虾青素有利于小鼠胚胎体外发育,可用于改善小鼠胚胎体外发育环境;TGF-β和Bcl-2基因很可能参与了胚胎发育过程中的相关调控。 相似文献
8.
《畜牧兽医学报》2015,(10)
旨在为小鼠和猪多能性干细胞嵌合体制作提供参考,探讨胚胎干细胞(Embryonic stem cells或Embryonic germ cells,ES/EG)显微注射及受体胚胎发育时期等对胚胎发育的影响。对小鼠ES细胞和猪EG细胞分别进行研究:(1)将小鼠ES细胞分别注入小鼠桑椹胚和囊胚,比较不同发育时期受体胚胎体外培养的发育率和孵化率,以及注射胚胎和未注射胚胎体外培养的发育率和孵化率。结果表明,显微注射后的桑椹胚体外培养发育率和孵化率分别为94.7%和70.2%,囊胚率分别为84.6%和80.8%,注射后桑椹胚体外培养发育率极显著高于囊胚(P0.01),但注射后囊胚体外培养孵化率极显著高于桑椹胚(P0.01);未注射胚胎(注射胚胎)的体外培养发育率和孵化率分别为96.6%(89.9%)和67.8%(75.2%),未注射胚胎发育率极显著高于注射胚胎(P0.01),但注射胚胎孵化率极显著高于未注射胚胎(P0.01)。(2)将猪EG细胞分别注入猪桑椹胚、早囊、囊胚及孵化囊胚,比较不同发育时期受体胚胎移植后妊娠率以及注射胚胎和未注射胚胎体外培养的孵化率,并对猪EG细胞显微注射针和固定针的规格进行了探讨。结果表明,显微注射的桑椹胚、早囊及囊胚移植后妊娠率为67%,而显微注射的孵化囊胚移植妊娠率为0,桑椹胚、早囊及囊胚移植后受体母猪妊娠率极显著高于孵化囊胚(P0.01),由桑椹胚、早囊及囊胚注射后移植获得了两头嵌合体仔猪;显微注射和未显微注射的猪胚胎其孵化率分别为47.54%和72.97%,未注射胚胎孵化率极显著高于注射胚胎(P0.01)。确定猪EG嵌合体制作过程中,注射针外径约为30μm,内径约为25μm;固定针外直径约为130~150μm,内径约为40μm。嵌合体制作时,胚龄宜早不宜迟,桑椹胚显微注射更易操作,而且导入的时期较早,ES/EG细胞在嵌合体组织中可以有很高的贡献率,故选择桑椹胚进行注射。在本试验条件下,显微注射对小鼠胚胎发育影响不大,对猪胚胎影响较大,说明猪胚胎显微注射条件需要进一步优化。 相似文献
9.
试验采用脂质体转染法与电穿孔法,以携带绿色荧光蛋白（GFP）-新霉抗性（neo-）双标记基因的pMSCV质粒转染胎牛耳成纤维细胞为供体与体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚。研究了体外成熟培养液中添加EGF（表皮生长因子）对转基因胚的影响,不同转染方法构建供体细胞对重构胚发育的影响和在不同体外培养系统中的发育效果。结果显示,体外成熟培养液中添加EGF 30 ng/mL组的卵母细胞成熟率最高,但对后期转基因重构胚的囊胚发育率的影响,以添加EGF 20 ng/mL组的最高;以胎牛耳成纤维细胞为供体细胞,不同转染方法转染供体细胞构建重构胚,其囊胚发育率差异不显著（P>〖JP2〗0.05）;mSOFaa+颗粒细胞单层细胞共培养体系中的转基因囊胚发育率最好,该体系更适合体细胞核移植法生产转基因牛胚胎。 相似文献