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黄瓜RAPD体系的优化与应用 总被引：3，自引：2，他引：3
以黄瓜为实验材料,采用改良CTAB法提取黄瓜基因组DNA进行RAPD分析,优化黄瓜RAPD体系的程序、模板、引物、dNTPs、Mg2+等参数。结果表明:黄瓜的PCR程序为94℃预变性3min;94℃变性30s,37℃复性30s,72℃延伸2min,循环40周,最后72℃延伸7min为佳;反应体系中,模板DNA的适宜浓度为2.5～5ng·μl-1,适宜的引物浓度为0.6μmol·L-1,dNTPs的适宜浓度为0.25mmol·L-1,Mg2+适宜浓度为1.875mmol·L-1。同时应用这一DNA扩增体系,进行黄瓜RAPD分析,筛选出了适用于申绿64的2条引物,最终得到了它的特异性条带。 相似文献
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轮套作对黄瓜土壤微生物多样性及产量的影响 总被引：12，自引：0，他引：12
【目的】研究轮套作对黄瓜各个时期的土壤微生物多样性及黄瓜产量的影响。【方法】采用随机扩增多态性DNA分析（random amplified polymorphism DNA,RAPD）方法。【结果】轮作处理中,小麦和大豆轮作处理可以显著提高黄瓜土壤微生物群落DNA序列多样性各指数（P＜0.05）,其黄瓜产量极显著高于对照（P＜0.01）;与对照相比,毛葱套作处理显著提高黄瓜土壤微生物群落DNA序列多样性各指数,其黄瓜产量极显著高于对照（P＜0.01）。【结论】小麦、大豆轮作和毛葱套作有利于改善土壤微生态环境,提高黄瓜产量。 相似文献
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甜瓜基因组DNA的提取及质量检测 总被引：3，自引：0，他引：3
利用改进的CTAB方法从甜瓜的叶片中提取DNA用于RAPD分析.结果表明,该提取方法简捷、扩增多态性好、谱带清晰,可对其他蔬菜如黄瓜、番茄、白菜等直接利用叶片提取DNA提供借鉴. 相似文献
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以6种葫芦科(Cucurbitaceae)瓜类蔬菜为试验材料,优化基因组DNA提取条件,用RAPD技术分析不同瓜类蔬菜基因组DNA的遗传多样性。结果表明:改良SDS法和改良CTAB法均能成功提取DNA,后者提取的DNA产量高,纯度较好,适合遗传多样性研究。用60条随机引物进行扩增筛选,有8条引物扩增条带清晰,呈现多态性,共扩增出94个条带,大小为200~3 000 bp。RAPD104软件显示:苦瓜与丝瓜、黄瓜、茭瓜、南瓜和佛手瓜的成对遗传距离指数分别为0.4393,0.4583,0.6000,0.5735,0.7306。NTSYS-PC程序的UPGMA聚类分析表明:同属的南瓜和茭瓜亲缘关系最近,其次是苦瓜与丝瓜;苦瓜与黄瓜亲缘关系较近,与南瓜和茭瓜较远,与佛手瓜亲缘关系最远。 相似文献
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黄瓜霜霉菌毒性及分子多态性分析 总被引：2，自引：0，他引：2
采用7个具有不同抗病性、生态型及标记聚类的黄瓜品种(系)对来自哈尔滨、长春、沈阳、北京、青岛、郑州、徐州、西安8个城市的18个黄瓜霜霉菌株进行了毒性及RAPD标记多态性分析。结果表明,供试菌株存在毒力分化,初步划分为12个毒性类型。利用27个RAPD随机引物对18个菌株进行全基因组DNARAPD扩增共得到230个RAPD标记,其中多态性标记212个,占92.2%。当以欧氏距离8.5为标准时可将供试菌株分为4个类群。菌株间相似系数介于0.267～0.754,各菌株之间的相似性系数较低,在DNA水平上存在差异,具有丰富的遗传多样性。 相似文献
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设施黄瓜连作和轮作中土壤微生物群落多样性的变化及其与产量品质的关系 总被引：57，自引：1，他引：57
【目的】研究设施黄瓜连作和轮作中，土壤微生物多样性的变化及其对产量品质的影响。【方法】利用RAPD技术研究了设施黄瓜连作和轮作对土壤微生物群落DNA序列多样性及产量品质的影响。【结果】连作黄瓜2年和7年的土壤微生物群落多样性指数、丰富度及其均匀度指数均随着黄瓜种植年限的增加而降低，黄瓜产量显著下降。而对于15、18和21年3种轮作种植的土壤，尽管其种植年限较长，但其微生物群落DNA序列多样性及均匀度均高于7年黄瓜连作的土壤，而且黄瓜VC含量均高于连作土壤。【结论】设施栽培条件下，轮作有利于土壤微生物群落的多样性和稳定性的提高，有利于土壤生态环境的改善和黄瓜产量品质的形成。 相似文献
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【目的】对栽培黄瓜(Cucumis sativus L.,2n=14)与野生酸黄瓜(Cucumis hystrix Chakr.,2n=24)经远缘杂交和多代回交、自交而来的渐渗系进行分子标记分析和表型鉴定,旨在为黄瓜导入酸黄瓜外源DNA片段提供相应依据。【方法】从分子标记分析、DNA序列比对和农艺性状表现上对各渐渗系和双亲进行研究。【结果】渐渗系与栽培黄瓜存在13.2%的遗传多态性,包括供体特异带、缺失带和产生的新带。利用RAPD引物D-11和SSR引物06632在渐渗系中分别扩增出约310bp和150bp的酸黄瓜特异带,序列分析表明其与酸黄瓜相应DNA片段的相似性分别为92.93%和96.48%,碱基差异分别为41个和9个,包括碱基转换、颠换和缺失。表型鉴定发现其呈现出酸黄瓜的遗传特性。【结论】野生酸黄瓜DNA已渐渗进入栽培黄瓜基因组,同时发生了少量不同类型的变异。 相似文献
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天冬药材基因组DNA提取方法研究 总被引：1，自引：1，他引：0
[目的]从天冬药材中提取可用于RAPD扩增的高质量基因组DNA。[方法]分别采用改良CTAB法、SDS法以及植物基因组DNA提取试剂盒法提取天冬药材基因组DNA;通过电泳、DNA浓度与纯度检测以及RAPD扩增效果确定天冬药材基因组DNA的最佳提取方法。[结果]CTAB法提取的基因组DNA较完整,DNA浓度与纯度均较高,可获得丰富的、清晰的RAPD条带。[结论]CTAB法为天冬药材基因组DNA提取的最佳方法,提取的DNA可用于天冬RAPD分析,该方法可为其他药材基因组DNA提取提供参考。 相似文献
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优化麝香百合RAPD反应体系的研究 总被引：1，自引：1，他引：0
[目的]建立适合百合种质的RAPD优化体系。[方法]从麝香百合中提取基因组DNA,进行RAPD反应。通过正交试验设计,优化麝香百合的RAPD反应条件和反应体系。[结果]优化的RAPD反应条件为:DNA 50 ng,Primer 0.3μmol/L,Taq酶1.0 U,dNTPs 200μmol/L,Mg2+3.0 mmol/L。在麝香百合的RAPD扩增程序中,各因素显著性程度依次为:循环次数>延伸时间>复性温度>复性时间。麝香百合的最佳RAPD反应程序为:37℃复性50 s,延伸60 s,循环35次。[结论]该研究建立了一套稳定的RAPD反应体系,具有较好的扩增效果。 相似文献
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松材线虫RAPD规范化反应体系的构建 总被引：6，自引：0，他引：6
针对随机扩增DNA多态性(RAPD)低重复性的特点,在研究松材线虫遗传多样性的过程中,对可能影响RAPD扩增结果的PCR仪型号,模板DNA,Mg2+,TaqDNA聚合酶引物及dNTP浓度等因素进行了实验探索,以获得最佳反应条件,构建稳定的松材线虫RAPD扩增反应体系,结果发现上述影响因子在相当大的范围内对RAPD扩增结果的影响有限,进而对在不同实验室间的RAPD结果缺乏重复性和可比性的原因进行了讨论,认为模板DNA的污染是造成这一现象的重要原因,并在此基础上提出了相应的规范化操作建议. 相似文献
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南瓜RAPD分析体系的优化* 总被引：5，自引：0，他引：5
为确保南瓜RAPD反应结果的稳定性和重复性，对MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq酶含量、引物浓度、模板DNA浓度、复性温度、PCR循环次数等影响南瓜RAPD结果的重要因素进行了初步研究。最终优化的南瓜 RAPD反应体系为25 μL反应液中：10×反应 buffer（100 mmol/L Tris-HCl,100 mmol/L KCl, 80 mmol/L (NH4)2SO4 ,pH 9.0,NP-40）2.5 μL, 3 mmol/L MgCl2，0.2 mmol/L dNTPs，Taq酶l.0 U,引物15 ng/μL ，DNA模板10 ng/μL 。本研究最终确立的PCR反应程序为: 94 ℃预变性5 min,然后按94 ℃变性30 s,37 ℃退火30 s,72 ℃延伸90 s，进行40个循环,最后72 ℃延伸5 min。在此条件下得到的RAPD图谱可为南瓜遗传多样性、分子标记及辅助育种等研究提供有效的手段。 相似文献
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平胸龟2个地理种群遗传差异的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
利用25个随机引物对平胸龟2个种群共49个个体分别进行PCR扩增,结果显示:平均每个个体扩增出209条DNA带,平均每个引物可产生8条带,扩增谱带分子质量大小在100～2000 bp之间,多态性比例为72.13%.其中12条引物扩增出16个特异于不同种群的DNA片段,可作为鉴别广东或福建种群的分子标记.用RAPD1.04和Genepop3.2软件分析所得谱带,得出广东、福建2个地理种群的平胸龟具有较高的遗传多样性,且广东种群的遗传多样性高于福建种群.2个种群间的平均遗传距离为0.278 6±0.025 9,遗传分化指数Gst为0.285 7.NJTREE聚类分析显示广东和福建2个地区的平胸龟各自聚成2个类群,有较明显的种群分化. 相似文献
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云南茶树DNA提取和RAPD分子标记初探 总被引：8，自引：2，他引：6
以宜良宝洪茶、莽水大叶原头茶、波上金苔、云抗10号4个云南茶树品种为材料,对其DNA提取和RAPD分子标记方法进行了研究。结果表明：所采用的经改进的CTAB DNA微量提取法,可以得到高质量的茶树DNA,分子量大于21 kb,可满足RAPD扩增;用18个不同的随机引物对所提取的4个品种基因组DNA进行了RAPD分子标记分析,其中3个（占16.67%）引物在茶树品种间可扩增出多态性产物。建立了云南茶树DNA微量、快速提取和RAPD标记的分析程序,为RAPD分析应用于云南茶树遗传研究打下了良好的基础。 相似文献
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用聚合酶链式反应技术鉴定杂交稻种子纯度的初步研究 总被引：7，自引：4，他引：3
应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术,对３个杂交稻组合及其相应亲本的核ＤＮＡ进行了分析,筛选出９个随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）随机引物和１对简单重复序列（ＳＳＲ）引物,可对供试材料进行真伪和纯度鉴定,该技术具有快速,简便,准确的特点,每人每天可测定１８０份样品,适用于杂交稻种子的商业化鉴定。 相似文献
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马铃薯晚疫病菌A2交配型与DNA多态性相关关系研究 总被引：6，自引：0，他引：6
利用RAPD方法初步研究了马铃薯疫病菌DNA多态性与A2交配型的关系，共用27个有多态性的引物对22个菌株进行了扩增，共扩增出275条有多态性的DNA谱带用于统计分析。聚类分析结果显示，阈值为8时，将供试的22个菌系划分为4个类群，10个A2交配型菌系中的8个均在第Ⅳ类群中，由此认为该病菌的DNA多态性与A2交配型有一定相关性。同时还发现各地的晚疫病菌系有不同程度的群体分化现象。 相似文献
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DNA分子标记鉴定蔬菜作物种子纯度的原理分析 总被引：7，自引：0，他引：7
对ＤＮＡ分子标记鉴定蔬菜作物种子纯度的原理进行了分析。结果认为,鉴定种子纯度以ＲＡＰＤ技术为宜。ＲＡＰＤ标记鉴定常规品种种子纯度研究中,应选择目标品种Ａ的ＲＡＰＤ图谱中出现而其它常规品种（一般５￣１０个为宜）中不出现的ＤＡＮ谱带作为鉴定纯度用的特异谱带;鉴定杂交Ｆ１品种时,应将母本有,父本无、,Ｆ１有的ＤＮＡ谱带和母本元,父本有,Ｆ１有的ＤＮＡ谱带作为特异谱带,并且在实践鉴定中二者必须联合使用。 相似文献
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家兔RAPD分析反应体系的优化 总被引：3，自引：0，他引：3
《山东农业科学》1999,(5):15-17
以家兔的基因组ＤＮＡ 为模板,研究影响家兔ＲＡＰＤ 扩增的因素。实验结果表明,Ｔａｑ酶、随机引物和Ｍｇ２ ＋ 浓度及模板ＤＮＡ 的纯度对ＲＡＰＤ 扩增影响较大。本实验建立了适于家兔ＲＡＰＤ 分析的反应体系：反应体积为２０μｌ,其中含有１ ×扩增缓冲液,２ ．０ｍ ｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣｌ２ ,０ ．１ｍ ｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ,０－２μｍｏｌ／Ｌ 随机引物,１ ．５ＵＴａｑ 酶,９０ｎｇ 模板ＤＮＡ 相似文献
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油茶DNA提取及RAPD分析最佳反应体系的建立 总被引：1，自引：1，他引：0
[目的]为建立油茶RAPD分析的最佳反应体系。[方法]分别用改良SDS法和CTAB法从12个油茶品种的新鲜幼叶中提取基因组DNA。通过测定OD260和OD280来比较两种方法提取DNA的纯度。建立油茶的RAPD反应程序,通过优化反应条件获得油茶RAPD分析的最佳反应体系。[结果]CTAB法提取的油茶基因组DNA纯度高于SDS法。油茶RAPD分析的最佳反应体系为:1.0 UTaq DNA聚合酶、1.5 mmol/L MgCl22、00μmol/L dNTP1、0 pmol/L随机引物2、0 ng DNA模板2、μl 10×PCR buffer,加重蒸水至20μl。油茶的RAPD反应程序为:95℃预变性3 min;94℃变性1 min,40℃退火1 min,72℃延伸2 min,40循环;72℃延伸7 min。[结论]该研究所用DNA纯度较高,反应条件控制严格,试验中扩增稳定性较好,是适合油茶RAPD分析的最佳反应体系。 相似文献