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1.
利用多重反转录聚合酶链式反应同时检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒.在GenBank中搜索H5、H7和H9亚型禽流感病毒(AIV)的血凝素基因序列,并利用DNAStar软件分析其相似性,利用Primer Premier 5.0软件设计3对分别针对AIV H5、H7和H9亚型的特异性引物.这3对引物所扩增的cDNA片段大小分别为427、228和830 bp.结果表明,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了同时检测H5、H7和H9亚型AIV的多重RT-PCR技术.该多重RT-PCR对H5、H7和H9亚型AIV能同时扩增出3条大小分别为427、228和830 bp的cDNA片段,与其他常见禽病病原的核酸不存在交叉反应.该多重RT-PCR对H5、H7和H9哑型AIV cDNA的最低检出量分别为10 Pg、1 ng和10 Pg. 相似文献
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依据GenBank中亚洲流行株禽流感病毒(AIV)H5,H7,H9亚型血凝素基因及M基因序列保守区域设计特异性引物,利用多重反转录聚合酶链式反应技术建立了AIV及H5,H7,H9亚型的检测方法.该方法能一次性检测出AIV保守区域M基因的同时,直接区分H5,H7,H9亚型.对新城疲病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒等特异性检测均为阴性.样品经100倍稀释后仍能检出. 相似文献
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根据GenBank中H5、H7、H9亚型禽流感病毒血凝素蛋白(HA)编码基因,使用DNAStar软件比较分析筛选出特异的保守片段,设计3对引物H5-P1/H5-P2、H7-P3/P4和H9-P5/P6。在此基础上,建立了H5、H7、H9亚型禽流感的三重RT-PCR检测方法,本方法可同时检测出样品中的H5、H7、H9亚型禽流感病毒。敏感性试验结果表明,该方法检测H5、H7、H9亚型禽流感RNA的敏感性分别达2.80、10.50、5.73 pg/μL,该方法检测其他相关病毒时均为阴性,具有很高的特异性,此外,该方法具有良好的重复性。利用所建立方法对240份禽流感临床样品进行检测,结果与血凝试验和血凝抑制试验结果的符合率为100%。此诊断方法检出时间早,且特异、敏感、经济、快速,可普遍推广,在禽流感诊断和防制中具有重要意义和应用价值。 相似文献
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根据H7亚型禽流感病毒的血凝素基因中的保守区域设计特异的LAMP引物。10倍倍比稀释试验表明了此方法的高灵敏性,最低可检测到100 fg的RNA。对H1、H3、H4、H5、H6、H9亚型A型流感病毒和NDV进行H7-RT-LAMP检测,并无交叉反应,说明了此方法的高特异性。利用80份临床样品对所建立的H7-RT-LAMP方法进行评价,鉴定结果和病毒分离方法一致,说明此方法的可行性。建立的H7-RT-LAMP方法简单、快速、灵敏、特异,是H7亚型禽流感病毒的一种高效检测方法,适合在基层进行H7亚型禽流感病毒的早期筛检。 相似文献
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什么是甲型H1N1流感甲型H1N1流感（Swine In-fluenza）是甲型（A型）流感病毒引起的猪或人的一种急性呼吸道传染性疾病。墨西哥和美国等先后发生甲型H1N1流感,其病毒为A型流感病毒,H1N1亚型猪流感病毒毒株,该毒株包含有锗流感、禽流感和人流感三种流感病毒的基因片断,是一种新型猪流感病毒,可以人传染人。 相似文献
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【目的】建立H5和H9亚型禽流感病毒的反向斑点杂交鉴别诊断方法。【方法】在H5和H9亚型禽流感病毒血凝素基因的保守区段内,选择设计2对引物,RT-PCR扩增后将目的片段克隆到pGEM-T载体中,得到重组质粒pGEM-T-H5与pGEM-T-H9。以重组质粒为模版,选择合成寡核苷酸探针与生物素标记引物。将探针通过紫外交联方法固定在带正电荷的尼龙膜上,用生物素标记引物扩增特异性片段,扩增产物经热变性后与探针进行杂交,杂交后显色,出现明显蓝紫色斑点的判定为阳性,无斑点判定为阴性。【结果】利用建立的反向斑点杂交方法检测,H5、H9亚型禽流感病毒的血凝效价分别可达到2-9.6和2-11.9,杂交特异性好,且2亚型间无交叉反应。【结论】建立了H5和H9亚型禽流感病毒的反向斑点杂交检测方法,该方法灵敏度高、特异性好,可以实现H5与H9亚型禽流感病毒的鉴别诊断。 相似文献
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为了解H9N2亚型流感毒株的变异及跨种间传播机制,通过基因序列测定和固相酶联试验对2016—2017年吉林地区的8株H9N2亚型流感病毒野鸟分离株的HA氨基酸序列及HA的受体结合特性进行了分析。结果表明:8株病毒均具有与人型受体和禽型受体结合特性,其中3株病毒HA的226位氨基酸为L,病毒则偏嗜结合6'SL即人型受体,其余5株病毒HA的226位氨基酸为Q,病毒偏嗜结合3'SL即禽型受体,这暗示着H9N2亚型病毒存在着感染人的潜能,因此应密切监测野鸟H9N2亚型流感病毒的流行特征,为动物及人间流感的防控提供参考。 相似文献
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根据猪流感病毒(swine influenza virus,SIV) H1 N1、H3N2、H5N1和H9N2亚型的血凝素(HA)基因序列,分别设计各亚型的特异引物,并根据A型流感病毒的M基因序列设计引物,作为4种病毒亚型的通用引物.应用RT-PCR分别扩增各病毒亚型HA基因的特异片段和M基因片段,并克隆到pMD19-T Simple Vector构建重组质粒,经测序后,用于各病毒亚型探针的制备.将各探针按一定的阵列点加到硝酸纤维素膜上,制备成低密度基因芯片.在多重PCR过程中,用生物素标记的dUTP( Bio-11 -dUTP)对待检样品进行标记,扩增产物与制备的基因芯片进行杂交,最后用扫描仪进行读片和分析.结果表明,该方法可以同时检测4种SIV病毒亚型,与PCR方法相比,显示了较高的灵敏度.该方法的建立,为SIV分型和猪流感疫情的监测提供了一种快速、灵敏和高通量的手段. 相似文献
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An improved quantum Monte Carlo method has been used to calculate the classical barrier height for the hydrogen exchange reaction H + H(2) --> H(2) + H with accuracies greater than previously attained. The method is exact in that, except for the easily estimated Monte Carlo statistical or sampling error, it requires no mathematical approximations or physical approximations beyond those of the Schr?dinger equation. The minimum in the barrier, occurring for the collinear nuclear configuration with the protons separated by 1.757 bohrs, was found to be 9.61 +/- 0.01 kilocalories per mole above H + H(2). 相似文献
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为了解养殖场家禽中H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平,通过血清学调查,应用血凝抑制试验(HI)的方法,对四川内江、山东济南、河南鹤壁、江苏扬州4个定点实验观测站负责的养殖场的鸡血液样本进行禽流感病毒抗体分析,其中包含2个肉鸡场和3个蛋鸡场。研究发现蛋鸡场通常免疫了H5、H7、H9(或H5与H9)亚型禽流感疫苗,而肉鸡场只免疫了H9亚型禽流感疫苗;蛋鸡场和肉鸡场都存在免疫禽流感疫苗后抗体水平低和无抗体产生的情况,从而导致免疫不合格或免疫失败。以上结果表明,应加强家禽养殖场对不同亚型禽流感疫苗的免疫以及免疫后的禽流感病毒抗体水平监测,以防免疫失败,从而预防禽流感的发生和流行。 相似文献
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BARUK H 《Science (New York, N.Y.)》1956,124(3220):478
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Protective efficacy of an H5/H7 trivalent inactivated vaccine (H5-Re13, H5-Re14, and H7-Re4 strains) in chickens,ducks, and geese against newly detected H5N1, H5N6, H5N8, and H7N9 viruses 
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下载免费PDF全文 ZENG Xian-ying HE Xin-wen MENG Fei MA Qi WANG Yan BAO Hong-mei LIU Yan-jing DENG Guo-hua SHI Jian-zhong LI Yan-bing TIAN Guo-bin CHEN Hua-lan 《农业科学学报》2022,21(7):2086-2094
Some H5 viruses isolated in poultry or wild birds between 2020 and 2021 were found to be antigenically different from the vaccine strains (H5-Re11 and H5-Re12) used in China. In this study, we generated three new recombinant vaccine seed viruses by using reverse genetics and used them for vaccine production. The vaccine strain H5-Re13 contains the hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) genes of an H5N6 virus that bears the clade 2.3.4.4h HA gene, H5-Re14 contains the HA and NA genes of an H5N8 virus that bears the clade 2.3.4.4b HA gene, and H7-Re4 contains the HA and NA genes of H7N9 virus detected in 2021. We evaluated the protective efficacy of the novel H5/H7 trivalent inactivated vaccine in chickens, ducks, and geese. The inactivated vaccine was immunogenic and induced substantial antibody responses in the birds tested. Three weeks after vaccination, chickens were challenged with five different viruses detected in 2020 and 2021: three viruses (an H5N1 virus, an H5N6 virus, and an H5N8 virus) bearing the clade 2.3.4.4b HA gene, an H5N6 virus bearing the clade 2.3.4.4h HA gene, and an H7N9 virus. All of the control birds shed high titers of virus and died within 4 days post-challenge, whereas the vaccinated chickens were completely protected from these viruses. Similar protective efficacy against H5 viruses bearing the clade 2.3.4.4h or 2.3.4.4b HA gene was observed in ducks and geese. Our study indicates that the newly updated H5/H7 vaccine can provide solid protection against the H5 and H7N9 viruses that are currently circulating in nature. 相似文献
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颠茄PMT·TR-I和H6H基因植物高效表达载体的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]构建1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶（Putrescine N-methyltransferase,PMT）基因、托品酮还原酶-I（Tropinone reductase-I,TR-I）基因和莨菪碱6-β-羟化酶（Hyoscyamine 6β-Hydroxylase,H6H）基因的植物高效表达载体。[方法]采用RT-PCR方法从颠茄中克隆到PMT、TR-I和H6H基因编码区序列,并连接到植物表达载体pCAMBIA1304^＋（p1304^＋）中。[结果]成功构建了植物高效表达载体p1304^＋-PMT、p1304^＋-TR-I、p1304^＋-H6H、p1304^＋-PMT-H6H、p1304^＋-TR-I-PMT和p1304^＋-TR-I-H6H,并转化农杆菌,获得可直接用于遗传改良颠茄的工程菌。[结论]该研究为利用植物基因工程技术提高东莨菪碱的产量奠定了基础。 相似文献
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采用自行设计的引物,通过PCR的方法,分别从pMD-HA5和pMD-HA9中成功扩增出AIV 0025(HSN1)株和KMⅢ(H9N2)株的血凝素(hemagglutinin,HA)基因,然后分别亚克隆到pET-32a( )、pET-28a( )表达载体中,构建并筛选出阳性重组子,分别标记为pET32-HA5、pET28-HA9.将阳性重组质粒转化进B121(DE3)宿主菌中,通过改变IPTG浓度和诱导时间,使重组蛋白获得表达,并确定了最佳诱导条件为IPTG终浓度1.0 mmol/L、诱导时间4～5 h.经SDS-PAGE和 Western-blotting 分析表明,重组蛋白相对分子质量约为85 000和63 000,主要存在于包涵体中,具有良好的免疫学活性. 相似文献
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通过形态特征、培养条件及生理生化指标,结合16SrDNA分子序列测定,对黄瓜白粉病生防菌H1、H2进行了鉴定.结果表明:生防菌H1、H2的形态特征及22项生理生化指标与枯草芽孢杆菌相符;生防菌H1、H216SrDNA序列与Genbank数据库中枯草芽孢杆菌的相似性高于99.5%,因此,H1、H2均为枯草芽孢杆菌亚种(Bacillus subtilis subsp.ubtilis).综合上述结果,最终确定生防菌H1、H2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis). 相似文献