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1.
[目的]探究奶牛子宫内膜上皮细胞来源外泌体及其miR-218在减轻大肠杆菌脂多糖诱发免疫反应中的作用.[方法]用不同质量浓度大肠杆菌脂多糖作用于奶牛子宫内膜上皮细胞系24 h后采用细胞计数试剂盒检测细胞活性;酶联免疫吸附测定检测免疫因子IL-1β和TNF-α释放;采用透射电子显微镜和蛋白印记法验证提取外泌体的粒径和标识蛋白CD63表达,荧光定量聚合酶链式反应法检测外泌体中miR-218表达变化;采用激光共聚焦显微镜观察外泌体与奶牛子宫内膜上皮细胞融合;细胞转染mimics 218检测其对大肠杆菌脂多糖诱发奶牛子宫内膜上皮细胞免疫因子释放的影响.[结果]100μg/mL大肠杆菌脂多糖处理奶牛子宫内膜上皮细胞后,IL-1β、TNF-α含量均显著高于对照组(P＜0.05);大肠杆菌脂多糖刺激奶牛子宫内膜上皮细胞来源外泌体中miR-218的表达量极显著低于奶牛子宫内膜上皮细胞来源外泌体中miR-218的表达量(P＜0.01);正常培养奶牛子宫内膜上皮细胞来源外泌体能够与大肠杆菌脂多糖处理的奶牛子宫内膜上皮细胞融合并与NF-KB (p65)蛋白共定位于细胞质中.将奶牛子宫内膜上皮细胞来源外泌体加入到100 μg/mL大肠杆菌脂多糖处理奶牛子宫内膜上皮细胞24 h后,显著抑制了大肠杆菌脂多糖引起的奶牛子宫内膜上皮细胞培养上清中的IL-1β和TNF-a释放(P＜0.05).同样的,转染进奶牛子宫内膜上皮细胞内mimics 218与磷酸化的NF-KB (p65)核外部分共定位并显著抑制了大肠杆菌脂多糖诱发的奶牛子宫内膜上皮细胞中TNF-α释放(P＜0.05),而对IL-1β释放无显著差异.[结论]miR-218能够随着健康子宫内膜上皮细胞分泌外泌体进入到受到大肠杆菌脂多糖刺激奶牛子宫内膜上皮细胞内,并与磷酸化p65核外部分共定位并抑制大肠杆菌脂多糖引起的TNFα的释放. 相似文献
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复方益母生化散对奶牛子宫内膜细胞CYP450表达和免疫功能的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】探讨复方益母生化散对奶牛子宫内膜炎的作用机理。【方法】体外实验:分离奶牛子宫内膜细胞,细菌脂多糖(LPS)诱导子宫内膜细胞炎症模型,复方益母生化散处理子宫内膜炎症细胞48h、72h,Western blotting法检测CYP450的表达;体内实验:复方益母生化散栓剂治疗患有子宫内膜炎的奶牛,检测血清中IgG、IgA含量的变化。【结果】复方益母生化散处理后,子宫内膜炎症细胞CYP450的表达随复方益母生化散剂量的增加而呈升高的趋势,血清中IgG、IgA的含量与对照组相比明显升高。【结论】2000μg·mL-1的复方益母生化散作用奶牛子宫内膜炎症细胞48h,CYP450的表达最明显。 相似文献
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【目的】鸡胚蛋可用于改善机体免疫功能,研究不同提取方法对鸡胚组织中外泌体的分离效果,有利于深入解析鸡胚蛋生理功能。【方法】收集13胚龄惠阳胡须鸡胚蛋12枚(3组,4枚/组),通过酶消化、差速离心及过滤等前处理后将所获样品分为4份,通过超速离心法(UC)、蔗糖垫超速离心法(SDUC)、膜亲和法(exoEasy)以及聚乙二醇沉淀法(ExoQuick)4种方法分离提取外泌体,分别标记A～D。比较BCA蛋白浓度测定、透射电镜、纳米流式和标志蛋白流式检测等4种方法获得的外泌体蛋白浓度、形态、大小及其标志性蛋白表达情况。【结果】4种方法均能获得符合外泌体直径分布(40～200 nm)、具有外泌体典型微囊结构特征的囊泡物质,外泌体蛋白浓度和颗粒浓度由高到低依次为DCAB,但D样品中含有其他聚团杂质蛋白;表面标志蛋白CD63、CD81阳性率变化趋势为BDCA。【结论】综合考量外泌体的纯度、形态、大小及其标志性蛋白表达情况,根据供试组织样品来源、试验条件和目的可优选蔗糖垫超速离心法或膜亲和法,如需高纯度外泌体可首选蔗糖垫超速离心法,样品稀有或不具备超速离心设备则选用膜亲和法。 相似文献
4.
【目的】旨在探明槲皮素对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞(bEECs)炎症反应的作用。【方法】用组织块和差时消化法分离纯化bEECs, 1μg/mL脂多糖(LPS)作用12 h后,添加不同浓度槲皮素(10, 20, 40μM)孵育12 h,采用Western blot法检测TLR4和MyD88蛋白的表达,同时通过qRT-PCR法检测炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的相对表达量。【结果】经CK18免疫荧光染色证实获得的bEECs纯度较高。LPS作用后,细胞炎症因子的表达显著高于对照组(P<0.01)。相比于LPS组,槲皮素孵育后,可降低炎症因子和TLR4/MyD88的表达(P<0.01)。【结论】槲皮素可通过抑制TLR4/MyD88的表达,改善LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞的炎症反应,该结果将为奶牛子宫内膜炎的治疗提供了新的研究思路和理论依据。 相似文献
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为探讨人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞生长的影响,利用差速超速离心法提取人脐带间充质干细胞源外泌体,并用透射电子显微镜、Western blot方法鉴定外泌体形态、粒径和蛋白质;利用CCK-8法、细胞划痕试验、Transwell试验检测不同浓度人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响.结果表明:人脐带间充质干细胞源外泌体呈杯托状,平均粒径70 nm左右,表达标志性蛋白CD63和CD9.不同浓度人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力有促进作用,且呈时间、剂量依赖性,并在人脐带间充质干细胞源外泌体浓度为300μg·mL-1时达到最高,而在浓度为400 pg·mL-1时促进率开始明显下降. 相似文献
6.
【目的】建立大鼠子宫内膜炎模型,为子宫内膜炎的发病机理及其预防治疗研究提供合适的动物病理模型。【方法】将30只清洁级雌性大鼠随机分为感染组(22只)和对照组(8只),采用手术法给大鼠子宫腔内感染致病性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌(菌液体积比为2∶1∶1)的混合菌液,对照组大鼠未感染致病菌的混合菌液。分别于感染后第3,6,9,12天剖杀大鼠,检测其大体剖检病变和组织病理学变化,计算子宫指数,并对子宫内容物病原菌进行分离鉴定。【结果】感染后3~12 d,感染组大鼠子宫指数均较对照组大鼠极显著增加(P0.01),感染大鼠子宫出现急性卡他性炎症(感染后第3天和第6天)、化脓性炎症(感染后第9天)和慢性增生性炎症(感染后第12天);感染前期可见子宫内膜上皮细胞脱落,黏膜层水肿、充血、出血,炎症细胞浸润;感染后期可见肌层增厚等病变。【结论】采用手术法成功建立了大鼠子宫内膜炎模型,且感染后第3天为造模成功的最佳时间。 相似文献
7.
【目的】对中国6个区域奶牛子宫内膜炎病原菌的种类和区域分布特征进行研究,为筛选出最佳治疗药物以减少子宫内膜炎对畜牧业造成经济损失提供数据支持。【方法】分别从赤峰区域、张家口区域、潍坊区域、重庆区域、宝鸡区域和北京区域选择不同规模的奶牛养殖场中患子宫内膜炎的奶牛,用采样器每个区域采集60份(6个区域共计360份)患病牛的子宫内容物,通过革兰氏染色和生化鉴定的方法鉴定分离纯化的奶牛子宫内膜炎病原菌,并分析病原菌的分布特征。【结果】潍坊、赤峰、北京区域引起奶牛子宫内膜炎以单一感染为主。宝鸡、张家口、重庆区域引起奶牛子宫内膜炎以混合感染为主。赤峰、重庆、张家口、潍坊、宝鸡、北京区域引起奶牛子宫内膜炎的病原菌以革兰氏阳性菌为主。赤峰奶牛子宫内膜炎的主要致病菌是葡萄球菌。重庆奶牛子宫内膜炎的主要致病菌是链球菌。张家口奶牛子宫内膜炎的主要致病菌是大肠杆菌。潍坊奶牛子宫内膜炎的主要致病菌是链球菌。宝鸡奶牛子宫内膜炎的主要致病菌是葡萄球菌。北京奶牛子宫内膜炎的主要致病菌是蜡样芽孢杆菌。 相似文献
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【目的】探讨健康奶牛与患子宫内膜炎奶牛生殖道需氧及兼性厌氧细菌的差异。【方法】选择20头健康奶牛和20头患子宫内膜炎奶牛,采用常规生理生化方法对其生殖道样品进行细菌的分离鉴定,比较其菌群差异。【结果】健康奶牛乳酸杆菌、产乳酸球菌和表皮葡萄球菌的分离率明显高于患病奶牛,且差异达显著水平(P<0.05);大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及链球菌的分离率均显著低于患病奶牛,其差异也达显著水平(P<0.05)。【结论】健康奶牛和患子宫内膜炎奶牛生殖道需氧及兼性厌氧细菌差异明显,乳酸细菌减少引起的生殖道内菌群紊乱是奶牛子宫内膜炎发病的重要诱因。 相似文献
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【目的】研制复方呋喃西林纳米乳,并检测其对奶牛子宫内膜炎的治疗效果。【方法】用紫外分光光度计测定呋喃西林在3种油相(肉豆蔻酸异丙酯(IPM)、橄榄油、石蜡油)和2种表面活性剂(聚氧乙烯醚氢化蓖麻油(RH40)、Tween-80)中的溶解度,确定纳米乳处方。采用转相乳化法制备复方呋喃西林纳米乳,对其进行质量评价,并研究其对西安和北京2个奶牛场子宫内膜炎病牛的治疗效果。【结果】复方呋喃西林纳米乳的配方是:呋喃西林1%,替硝唑0.3%,Tween-80 32.5%,Span-80 13.7%,橄榄油5%,蒸馏水47.5%(各组分含量均为质量分数)。用该配方制备的复方呋喃西林纳米乳为O/W型,乳滴呈球形,分布均匀,无粘连,平均粒径为67.20 nm,乳液澄清透明,避光保存时稳定性较好。复方呋喃西林纳米乳对西安某奶牛场子宫内膜炎病牛的治愈率为92.9%,较清宫液对照组高7.2%;有效率为92.9%,与清宫液治疗组相同。复方呋喃西林纳米乳对北京某奶牛场子宫内膜炎病牛的治愈率为66.7%,有效率为77.8%,均极显著高于宫速清溶液(P<0.01)。【结论】复方呋喃西林纳米乳研制成功,其对奶牛子宫内膜炎有较好的治疗效果。 相似文献
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【目的】利用虾青素较强的抗氧化特性,通过探讨黏膜屏障重塑对脂多糖（LPS）诱导的牛子宫内膜细胞炎症的影响,为牛子宫内膜细胞炎的预防和治疗提供理论基础。【方法】培养液中添加1 μg·mL -1 LPS,培养子宫内膜细胞6 h,检测培养液中炎症因子TNF-α和IL-6含量,建立细胞的体外炎症模型。在此基础上去掉培养液,重新加入含1×10 -6 mol·L -1 虾青素的新鲜培养液,继续培养细胞24 h。对照组为不添加LPS或AST,LPS组为仅添加LPS,AST组为添加LPS和AST。采用ELISA法检测培养液中TNF-α和IL-6炎症因子分泌量以及细胞SOD和CAT酶活性,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇（ROS）水平,利用免疫荧光染色检测细胞紧密连接蛋白Claudin、CDH1、TJP1的分布情况,利用荧光定量RT-PCR法和Western Blot法分别检测Claudin、CDH1、TJP1基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平。【结果】利用1 μg·mL -1 LPS培养子宫内膜细胞6 h,检测发现培养液中炎症因子IL-6和TNF-α分泌水平显著高于对照组（P小于0.05）,说明LPS诱导子宫内膜细胞产生炎症反应。与对照组相比,细胞内ROS水平显著增加（P小于0.05）,SOD和CAT酶活性都显著降低（P小于0.05）,说明LPS诱导的子宫内膜细胞炎症造成了氧化损伤。加入1×10 -6 mol·L -1 虾青素培养细胞24 h后,发现培养液中IL-6和TNF-α因子的分泌水平显著低于LPS组（P小于0.05）,同时ROS阳性细胞比率显著下降（P小于0.05）,SOD和CAT酶活性都显著升高（P小于0.05）。LPS组与对照组相比,细胞膜处Claudin、CDH1、TJP1蛋白的荧光信号减弱,这3种紧密连接蛋白的mRNA和蛋白表达水平也都显著降低（P小于0.05）。加入1×10 -6 mol·L -1虾青素培养24 h后,与LPS组相比,在细胞边缘和细胞核内可以检测到荧光信号很强的Claudin、CDH1、TJP1蛋白,而且这3种紧密连接蛋白的mRNA和蛋白表达水平也都显著升高（P小于0.05）。【结论】虾青素通过降低子宫内膜细胞因炎症反应产生的氧化损伤,减轻炎症导致的子宫内膜细胞紧密连接结构损伤,对子宫内膜的物理免疫屏障起保护作用,为牛子宫内膜炎的预防和治疗提供理论借鉴意义。 相似文献
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【目的】对睾丸、附睾和前列腺组织细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)蛋白质组分进行鉴定,以明确其在精子发生、成熟及功能维持方面所发挥的作用。【方法】用总外泌体分离试剂盒 (total exosome isolation,TEI)分别富集小鼠睾丸、附睾和前列腺组织的EVs,用免疫印迹法对EVs进行鉴定。用透射电镜观察EVs的形态,动态光散射粒径分析仪(dynamic light scattering,DLS)分析其直径分布。用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)分析EVs的蛋白质组分,运用DAVID 6.8在线分析工具从细胞组分、分子功能、生物学过程三方面对筛选出的蛋白质进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析。【结果】用TEI法分离纯化的EVs均可检测到分化抗原63(cluster differentiation antigen 63,CD63)和肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)标记蛋白,表明EVs分离成功。透射电镜下观察EVs呈凹杯状,睾丸组织来源的EVs以直径30~140 nm的居多,附睾组织EVs直径在105 nm处有峰值,前列腺组织EVs直径在50和90 nm处有峰值。用LC-MS/MS分析3种EVs的蛋白组分,睾丸组织EVs筛选到1 148种蛋白,附睾组织EVs筛选到902种蛋白,前列腺组织EVs筛选到651种蛋白。睾丸组织EVs特有蛋白有667种,主要参与RNA加工及剪切、精子发生、DNA损伤应答等生物学过程;附睾组织EVs特有蛋白有311种,主要参与转运、代谢和免疫作用等生物学过程;前列腺组织EVs特有蛋白有142种,主要参与代谢活动等。三者共有蛋白277种,主要发挥蛋白质结合、RNA结合等分子功能,参与蛋白质翻译和运输等生物学过程。【结论】睾丸、附睾和前列腺组织EVs分别在精子发生、精子的睾丸后成熟及功能维持中发挥一定的作用。 相似文献
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子宫内膜炎是奶牛分娩或产后由于微生物感染而引起的子宫内膜发炎,是适繁奶牛所患的一种常见病,它通常是子宫膜的黏液性或脓性炎症,由于炎症所产生的有毒物质可致死精子和胚胎而成为奶牛不孕的常见原因之一。分娩时消毒不严、阴道感染、难产、子宫内恶露滞留、胎衣不下、死胎、阴道及子宫脱出等是引起子宫内膜炎的主要诱因。 相似文献
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犬子宫蓄脓是指犬子宫腔内聚积有大量脓液并伴有子宫内膜增生性炎症,是犬发情后期的一种生殖器官急性或慢性疾病,特征是子宫内膜异常并伴有炎性病理变化,子宫腔内积有大量脓液。临床上按子宫颈开放与否可分为闭锁型与开放型两种。本病多发于小型中老年犬,特别是运动量较小的小型玩赏犬、处女犬。做过剖腹产或有子宫内膜炎病史的母犬更易发病。 相似文献
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子宫内膜炎为子宫内膜的急性炎症,是奶牛生殖系统的常见病,其发病率达30-42%,占不孕症的72%,该病影响了奶牛的生产性能,降低了经济效益,阻碍了奶牛业的发展。本文简述奶牛子宫内膜的病因、症状、诊断,并阐述一个病例的诊治过程。 相似文献
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奶牛化脓性子宫炎是子宫内膜及深层的各型炎症的统称,是导致奶牛不孕的主要原因之一。笔者在临床中运用中西医结合治疗奶牛化脓性子宫内膜炎32例,治愈30例,好转2例,疗效满意,现介绍如下。 相似文献
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在奶牛几种类型的子宫内膜炎中，有一类比较特殊的子宫内膜炎．称为渗出性子宫内膜炎。患有该类子宫内膜炎的奶牛多有正常发情表现，有正常的发情周期．发情期能生成正常的卵泡．但由于子宫内膜腺体生成的粘液和水样炎性渗出物较多，精液输人子宫后。由于子宫内水样粘液量大，在配种时奶牛出现努责或配种后躺卧在地时．从子宫内流出的粘液很容易将输入的精液携带出子宫，使子宫内精子的数量减少，出现不孕现象。另外．子宫水样粘液中含有炎性产物对精子有杀害作用或使受精卵在有轻微炎症的子宫壁上着床困难．常常会出现屡配不孕的现象。 相似文献
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子宫内膜炎为子宫内膜的急性炎症，是奶牛生殖疾病的常见病，发病率高达20％一柏％，占不孕症的70％左右。子宫内膜炎通常是子宫黏膜的黏液性或化脓性炎症。而子宫肌炎、子宫浆膜炎，只有在产后急性子宫炎时才可能发生，也很少见。子宫内膜炎是母畜极为常见的一种生殖器官疾病，分急性和慢性。急性多发生于产后，在难产、子宫脱、胎衣不下时感染病原菌后继发；慢性多数由急性转来，或经配种感染。 相似文献
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【目的】研究S100蛋白在动情周期SD大鼠子宫中的分布情况及其变化规律。【方法】采用阴道涂片方法将16只雌性SD大鼠分为动情前期、动情期、动情后期和动情间期4组,处死各组大鼠取子宫制作石蜡切片,采用免疫组织化学超敏感法(Streptavidin-Peroxidase,SP),研究S100蛋白在大鼠动情周期子宫中的分布规律。【结果】S100蛋白免疫阳性产物在各期子宫各层中均有不同程度的分布,主要定位于子宫内膜上皮细胞、腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、肥大细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞中。S100蛋白免疫阳性产物在动情周期子宫内膜、肌层和外膜中的表达变化规律一致:动情前期着色最弱,动情期着色最深,动情后期着色变浅,动情间期着色又加深,表达呈双峰变化趋势。【结论】S100蛋白在动情周期SD大鼠子宫中的表达具有一定规律,可能受性类固醇激素的调节。 相似文献
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患子宫内膜炎奶牛免疫应答变化规律的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
利用流式细胞仪及ELISA技术,通过对血液中CD4+、CD8+和血液及子宫分泌物中三种免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)含量进行检测,探讨在炎症状态下,各指标的动态变化与诊断子宫内膜炎的相关性。结果表明,在感染后期CD8+占主导地位,CD4+/CD8+也随之降低。而产后奶牛血液中IgA、IgG、IgM均呈现升高趋势(... 相似文献