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1.
本实验建立了用ＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术体外扩增牛Ｙ染色体特异ＤＮＡ序列的方法。根据牛的ＳＲＹ序列设计一对引物，两条引物均为２３ｂｐ，对公牛１９４ｂｐ序列进行体外扩增。从屠宰的公、母牛肝和血液中提取ＤＮＡ，用作ＰＣＲ模板，ＰＣＲ仪内进行扩增。结果表明公牛个体样品显示清晰可见的特异ＤＮＡ扩增带，而母牛个体样品无扩增片段出现，与预期的结果完全符合。 相似文献
2.
用聚合酶链式反应技术鉴定杂交稻种子纯度的初步研究 总被引：7，自引：4，他引：3
应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术,对３个杂交稻组合及其相应亲本的核ＤＮＡ进行了分析,筛选出９个随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）随机引物和１对简单重复序列（ＳＳＲ）引物,可对供试材料进行真伪和纯度鉴定,该技术具有快速,简便,准确的特点,每人每天可测定１８０份样品,适用于杂交稻种子的商业化鉴定。 相似文献
3.
禽传染性支气管炎病毒免疫原基因的PCR获取及其酶切鉴定 总被引：3，自引：1，他引：3
分绍用ＲＴ－ＰＣＲ（反转录－聚合酶链反应）获取禽传染性支气管炎病毒Ｍ４１株和广东地方致弱株Ｄ４１免疫原（Ｓ１）基因的详细方法，所用引物为ＩＢＶ Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因两侧的对应序列，跨幅为１．７ｋｂ，结果表明，两株病毒所获的ＰＣＲ产物与预期的一致；用此对引物，以ＩＢＶ Ｄ４１株Ｓ１基因ＰＣＲ产物为模板，扩增出一样的ＤＮＡ片段，试验还显示，国内外几家公司有关ＲＴ和ＰＣＲ的分子生物学试剂可以兼用 相似文献
4.
RT-PCR和Digoxigenin标记的核酸探针检测鸡传染性支气管炎病毒试验研究 总被引：1，自引：0，他引：1
用２对已发表的引物和１对自行设计的引物对同一ＩＢＶＨ１２０株进行ＲＴ－ＰＣＲ，分别获得了Ｓ１基因上与引物设计相一致的１７２０ｂｐ，２２８ｂｐ，６０２ｂｐ，的扩增片段。用自行设计的引物对７个毒株（Ｈ１２０，Ｈ５２，Ｍ４１，Ｃｏｎｎ，Ｇｒａｙ，Ｔ，Ｈｏｌｔｅ）和５个分离株（宜毒，上毒，云毒，ＨＫ，１１８）的含毒尿囊液或纯化病毒进行ＲＴ－ＰＣＲ。结果除Ｈｏｌｔｅ株，２个分离株（宜毒，云毒）外，其余均被成功地扩增出６０２ｂｐ的片段。将ＩＢＶＨ１２０株０６ｋｂＰＣＲ产物用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记为探针，分别与上述各ＩＢＶ毒株的核酸及其扩增产物进行核酸杂交，均呈现阳性反应，而该探针不与ＩＢＤＶ和ＮＤＶ的ＤＮＡ，ＥＤＳ－７６病毒的ＤＮＡ及正常鸡胚尿囊液抽提物反应。ＲＴ－ＰＣＲ和核酸杂交技术提供了直接从尿囊液中快速检测出病毒，作为诊断ＩＢＶ的新方法。 相似文献
5.
用ＰＣＲ技术,从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＣＶ１９８８／Ｃ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出含起始密码子的ＭＤＶｐｐ３８基因同源物编码序列,在以Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的ｐｐ３８基因作为探针,在Ｓｏｕｌｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中,该探针能识别该ＰＣＲ扩增片段。将该ＰＣＲ扩增片段在ＢａｍＨ Ｉ和ＰｓｔＩ位点克隆进ｐＵ１８质粒载体,酶切分析筛选到含ｐｐ３８基因同源物的重组质粒并进行了全序 相似文献
6.
烟草黑胫病菌分子检测 总被引：9，自引：0，他引：9
随着聚合酶链式反应 (ＰＣＲ)技术的发展 ,用特异引物进行真菌种间核糖体ＤＮＡ片段进行ＰＣＲ扩增以达到鉴定生物种的目的已成为一种简便、快捷的技术和方法。本试验根据从ＧｅｎｅＢａｎｋｄａｔａｂａｓｅ获得的疫霉属真菌 (Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｓｐｐ .)ｒＤＮＡＩＴＳ区段序列 ,合成了 1对 1 7ｂｐ特异寡聚核苷酸引物进行了不同病原菌、病组织及土壤中寄生疫霉菌 (Ｐａｒａｓｉｔｉｃａｖａｒ.ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ)的特异扩增试验 ,提供并完善了一套快速检测该菌的技术和方法。1 材料与方法1 1 供试菌株 烟草疫霉菌菌株 ,交… 相似文献
7.
甘蔗白条病(Xanthomonas albilineans)PCR,ELISA,DIA检验技术研究(英文) 总被引：1，自引：0，他引：1
应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术检测甘蔗白条病（Ｘ．ａｌｂｉｌｉｎｅａｎｓ）蔗茎无症带菌样品和纯培养及总ＤＮＡ;并以改良半选择性培养基（ｍＸＡＭ）定量．比较了ＰＣＲ,ＥＬＩＳＡ,ＤＩＡ的检测效率和可靠性．表明ＰＣＲ能够特异性检出白条黄单胞包括标准菌株３３９１５ＡＴＣＣ和血清型Ｉ,Ｉ等１９个菌株．但是不能扩增其它５个分离自蔗茎的腐生黄单胞和１３个其它属种的植物细菌．能够检出少至１０ｐｇ靶细菌总ＤＮＡ或２０个活细菌．ＰＣＲ检测灵敏度较ＥＬＩＳＡ和ＤＩＡ高１００～１０００倍．田间样品检测结果与实际发病符合度为９３．４６％．这一分子检测技术适用于国内外甘蔗种质资源交换和口岸检疫以及病害流行学研究 相似文献
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为建立能快速灵敏检测甘蔗宿根矮化病 （ｒａｔｏｏｎｓｔｕｎｉｎｇｄｉｓｅａｓｅ,ＲＳＤ）的 ＰＣＲ检测方法。本文通过改进模板 ＤＮＡ的制备方法,在 ＰＣＲ基本程序的基础上,以甘蔗宿根矮化病菌 （Ｌｅｉｆｓｏｎｉａｘｙｌｉｓｕｂｓｐ．ｘｙｌｉ,Ｌｘｘ）１６Ｓ-２３ＳｒＤＮＡ基因间隔区特异性引物,调整 ＰＣＲ扩增反应体系各组分的浓度、反应的退火温度、循环参数等主要因子,优化 ＰＣＲ反应体系。此检测体系能从感染 ＲＳＤ的样品中扩增出大小为４３８ｂｐ的特异性片段,而阴性对照和未感染样品则未扩增出任何片断;未优化仅从稀释３０倍的蔗汁总 ＤＮＡ中扩增出 ＲＳＤ的特异性片段,优化后可以从稀释３０００倍的蔗汁总 ＤＮＡ中扩增出 ＲＳＤ的特异性片段。对３１份田间采集样品检测,未优化的阳性检出率为 ３２.２６％;优化后阳性检出率 ７４.１９％,与 Ｉ-ＥＬＩＳＡ检测结果一致。应用此检测方法可稳定、快速地检测出蔗株是否感染 ＲＳＤ,且检测效率高,适合于田间大批量样品快速检测。 相似文献
9.
参考人、鸡,鼠的ＥＳＲ基因序列,设计一对引物,采用ＰＣＲ技术扩增出猪的ＥＳＲ基因一段ＤＮＡ片段,将该片段克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ质粒载体中,重组质粒经ＰＣＲ鉴定和酶切分析确定克隆成功,经测序结果分析确定该片段为猪ＥＳＲ基因与其他动物第４号外显子相对应的一段ＤＮＡ片段,大小为３３２ｂｐ。 相似文献
10.
利用ＰＣＲ技术从拟南芥菜基因组ＤＮＡ中扩增出一条长４１４ｂｐ的ＤＮＡ片段。该片段被克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（－）手ＥｃｏＲＶ位点上。序列分析结果证实扩增和克隆的ＤＮＡ片段是分生组织特征基因ＬＥＡＦＹ３＇端的部分片，不含内含子序列。结果表明，供试果树，基因组中均存在单拷贝的ＬＥＡＦＹ同源基因。 相似文献
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DNA分子标记技术在酿酒酵母菌株遗传多样性分析中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
本文介绍了RAPD、mtDNA-RFLP、微卫星DNA（microsatellite）、Interdelta指纹图谱以及线粒体DNA COX1基因指纹图谱等5种DNA分子标记技术的方法和原理及其优缺点,同时探讨了DNA分子标记技术在国内外酿酒酵母菌株区分中的应用状况与前景。 相似文献
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云南烟草野火病菌遗传多样性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
应用Rep-PCR分子指纹技术结合传统植物病理学分析了51个采自云南各大烟区的烟草野火病菌（Pseudomonas syringae pv.tabaci)以及其他不同致病变种、不同种、不同属的植物病原菌的群体遗传多样性。用REP、ERIC,BOX,IS1112和IS1113等5组专化性的引物对以上菌系基因组DNA进行PCR扩增,并对扩增指纹图谱综合进行UPGMA聚类分析,在相似水平0．92时,可将云南烟草野火病菌分为3个群,即YN1,YN2,YN3。 相似文献
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Mette Lübeck 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2004,30(4):463-463
Universally Primed PCR (UP-PCR) is a PCR fingerprinting method that has demonstrated its applicability in different aspects of mycology. These applications constitute analysis of genome structures, identification of species, analysis of population and species diversity, revealing of genetic relatedness at infra-and inter-species level, and identification of UP-PCR markers at different taxonomic levels (strain, group and/or species) . A further development of the UP-PCR technique is an … 相似文献
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为了筛选适用于家畜布鲁氏菌病检测的荧光定量PCR方法,合成目前报道最多的布鲁氏菌IS711插入序列、per基因和bcsp31基因的引物和探针,并分别对这3种荧光定量PCR方法的敏感性、特异性、重复性以及63份临床样品检测效果进行比较。结果显示：3种荧光定量PCR方法均具有较好的敏感性且均不与其他常见细菌发生交叉反应;3种方法的批内变异系数和批间变异系数均小于5%。在检测临床样品时,3种方法的敏感性均高于套式PCR方法,其中IS711荧光定量PCR方法与套式PCR方法符合率为95.24%,其他2种方法与套式PCR方法的符合率为98.41%。比较而言,IS711荧光定量PCR敏感性最高,更适合于布鲁氏菌核酸含量低的样品的检测。 相似文献
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苜蓿基因组DNA的RAPD指纹图谱 总被引：8，自引：6，他引：8
魏臻武 《甘肃农业大学学报》2003,38(2):154-157
在建立可靠的苜蓿基因组DNA提取分离和RAPD-PCR扩增技术体系的基础上,筛选具有稳定的多态性位点的RAPD引物。利用RAPD标记检测苜蓿品种(系)的DNA分子标记多态性,构建苜蓿品种的DNA指纹图谱。筛选的引物扩增条带清晰,具有5～10个多态性位点。利用琼脂糖凝胶电泳可以便捷地检测扩增的DNA多态性。从大量RAPD随机引物中筛选出36个RAPD引物,确定了180多个多态性位点。对几个抗寒苜蓿进行了RAPD分析,构建了55个苜蓿品种(系)的DNA指纹图谱,用于苜蓿品种鉴定。 相似文献
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云南滇西高原粳稻区白叶枯病菌遗传多样性初探 总被引：5，自引：0，他引：5
用IS-PCR和rep-PCR法分析了17个采自云南滇西高原粳稻区的水稻白叶枯病菌(Xanthomonasoryzaepv.O-ryzae)和7个其他地区的水稻白叶枯病菌的群体遗传多样性。用2个适合中国水稻白叶枯病菌的引物J3和ERIC对这24个菌系基因组DNA进行PCR扩增反应,J3引物有14条条带,ERIC引物有13条条带,2个引物呈现18种谱型。用PHYLIPVersion3.6软件UPGMA聚类分析法分析白叶枯病菌系之间的遗传距离,可将24个病原菌分为4簇,3个来自菲律宾的白叶枯病菌与中国的菌系距离较远,云南高原粳稻区分离的菌系十分复杂,4个簇中都有,但主要集中在2个簇中,共有14个菌系。 相似文献
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基于转录组信息的坛紫菜EST-SSR标记的开发及新品系SW-81的种质鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
基于坛紫菜（Pyropia haitanensis）转录组序列信息进行EST-SSR标记的开发,并利用多态性SSR标记构建DNA指纹图谱用于坛紫菜新品系SW-81的种质鉴定。结果显示：转录组数据中共检测出9 033个微卫星位点,其中三核苷酸重复类型为绝对优势基元,占比高达95%;经Primer 5.0软件对微卫星位点进行引物设计,并从中随机合成187对微卫星引物进行有效性分析,最终获得92对有效引物,其中42对为多态性EST-SSR标记,多态扩增率约为22.46%;利用开发的多态性EST-SSR标记构建了适用于5个坛紫菜品系的DNA指纹图谱,为新品系SW-81的种质鉴定提供有效的分子检测手段。上述结果表明：坛紫菜基因组中有着丰富的微卫星位点,且同一位点的基因序列在不同品系间存在变异,表现为扩增产物的多态性。基于EST-SSR标记的多态性分析可为坛紫菜种质资源的管理与鉴定提供有效的分子检测手段。 相似文献
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以RAPD分子标记技术对玉米的10个品种的全基因组DNA进行PCR扩增,再用Popgene32软件和SPSS13.0软件分析扩增结果,研究10个玉米的种质资源遗传关系。结果表明:(1)所选20个引物可扩增出214条RAPD条带;(2)所选引物扩增条带的多态性比率为86.4%,RAPD分子标记扩增10个玉米品种间的相似性系数分别在0.316￣0.654之间;(3)用RAPD-PCR扩增条带的分析结果建立了遗传相关系数矩阵、构建了分子树状图、可将10个玉米品种分为3个类群;(4)RAPD分子标记适合于构建玉米的DNA指纹图谱,进行品种鉴定和遗传分析。 相似文献