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1.
用猪传染性胃肠炎(TGEV)华毒株弱毒H-155代感染iBRS_2传代细胞,通过冻融、PEG3000沉淀、蔗糖密度梯度离心提纯制备的TGEV抗原,免疫BALB/c小鼠,取血清抗体阳性的免疫鼠的脾细胞,在50％PEG4000作用下,与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合,产生杂交瘤。用ELISA间接法对杂交瘤细胞生长孔上清液进行检测,筛选阳性杂交瘤细胞株。通过有限稀释法进行3次克隆,获得了2株分泌抗TGEV的单克隆抗体杂交瘤细胞株。并对其所分泌的单克隆抗体免疫球蛋白亚类、特异性、中和反应性等特性作了初步鉴定。 相似文献
2.
用猪传染性胃肠炎（TGEV）华毒株弱毒H－155代感染iBRS2传代细胞，通过冻融、PEG6000沉淀、蔗糖密度梯度离心提纯制备的TGEV抗原，免疫BALB／C小鼠，取血清抗体阳性的免疫鼠的脾细胞，在50％PEG4000作用下，与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞进行融合，产生杂交瘤，用ELISA间接法对杂交瘤细胞生长孔上清液进行检测，筛选阳性杂交瘤细胞株。通过有限稀释法进行3次克隆，获得了2株分泌抗TGEV的单克隆抗体杂交瘤细胞株，并对其所分泌的单克隆抗体免疫球蛋白亚类、特异性、中和反应性等特性作了初步鉴定。 相似文献
3.
以乳牛L-选择素为免疫抗原免疫BALB／c小鼠1只，相隔14d进行3次免疫，抗原用量每次30big，首次免疫后第116d进行尾静脉加强免疫，抗原用量10μg。免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后接种12块96孔板。以L-选择素包被酶标板，间接ELISA检测阳性孔，有限稀释法克隆阳性孔，筛选出6株杂交瘤细胞。小鼠腹腔注射杂交瘤细胞株制备McAb，并对其分别进行Ig亚类测定。结果，6株杂交瘤细胞7810、10F6、10E2、5C6、12G7和llA3的Ig亚类分别是IgG2a、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG1和IgG1。 相似文献
4.
为了制备特异性的抗绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV) 内蒙株衣壳蛋白(CA)的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞系,以原核表达CA蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,经4次免疫后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞经杂交瘤技术进行融合,同时以表达蛋白作为包被抗原进行特异性ELISA检测,共筛选到6株阳性杂交瘤细胞株。经过3次亚克隆后,最终得到了5株能稳定分泌抗体的单细胞克隆株;再利用CA真核表达蛋白以间接免疫荧光法,对此5株杂交瘤细胞进行进一步的特异性鉴定。结果显示,有3株具有特异性强荧光反应,也能检测到目的基因的表达产物。本试验获得了3株稳定分泌抗JSRV-NM株CA蛋白McAb的杂交瘤细胞系,为建立检测病原的特异性诊断方法、分析JSRV-NM株CA蛋白的功能及鉴定B细胞抗原表位等奠定基础。 相似文献
5.
猪流行性腹泻病毒S基因B细胞表位的筛选及其单克隆抗体的制备与鉴定 《畜牧与饲料科学》2022,43(4):14-18
目的 应用生物学软件与单克隆抗体技术相结合的方法鉴定PEDV S2基因B细胞表位肽。方法 利用CLC Sequence viewer 6.8软件及在线数据库IEDB筛选出PEDV S2基因B细胞表位,并人工合成表位肽。将表位肽与钥孔血蓝蛋白（KLH）耦联后作为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,通过ELISA法筛选出抗体效价较高的小鼠进行1次加强免疫,3 d后取脾脏制备脾细胞悬液进行细胞融合。经HAT选择培养基培养筛选有效杂交瘤细胞,采用ELISA法筛选阳性克隆继续进行扩大培养。将部分阳性杂交瘤细胞进行小鼠腹腔注射,并收集腹水。通过ELISA方法分别检测小鼠腹水和单克隆细胞株培养上清液抗体效价,确定最高效价作为后备细胞株。结果 筛选出B细胞表位肽序列为:MQYVYTPTYYML;免疫多肽抗原后融合前血清抗体效价达到1:2 000;BALB/c小鼠腹水及单克隆细胞株培养物上清液ELISA检测结果显示抗体效价达到1:4 000。结论 筛选出了PEDV S2基因B细胞表位,为PEDV表位肽疫苗载体构建研究提供参考。 相似文献
6.
《中国兽医学报》2017,(12):2270-2274
为建立有效检测鸡IL-4(ChIL-4)的生物学方法,将重组真核表达质粒pVAX1-ChIL-4作为免疫抗原,肌肉注射法免疫6周龄BALB/c小鼠,免疫的间隔时间为4周,共免疫5次;于加强免疫3次后,取免疫鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合。以His-ChIL-4为检测抗原,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞株;采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞株进行亚克隆,体内诱生腹水法大量制备腹水单抗;采用ELISA、Western blot法分析mAbs的特异性。结果本研究共获得3株抗ChIL-4mAbs:1C11、5C1和3E10,其亚类分别为IgM、IgM和IgG2a,腹水效价为(1.6~6.4)×104。间接ELISA及Western blot结果显示,所获得的mAbs均只识别重组ChIL-4,而不能识别其他无关抗原,表明所获得的3株mAbs均特异性针对ChIL-4。该mAbs的获得为建立检测ChIL-4的生物学方法及进一步研究ChIL-4的生物学功能提供了有效的生物材料。 相似文献
7.
猪胸膜肺炎放线杆菌单克隆抗体的制备与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:建立抗血清1型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP-1)脂多糖(LPS)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的免疫检测技术奠定基础。方法:腹腔注射APP-1标准株的甲醛固定抗原免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清中LPS抗体滴度并选择值最高的小鼠用于细胞融合,且于融合前3天加强免疫1次。常规方法进行融合,HT、HAT培养液选择培养融合后的细胞,ELISA检测细胞培养上清中的LPS抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆传代。结果:获得2株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其小鼠腹水单克隆抗体效价132000～164000。结论:已成功建立2株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的免疫胶体金分型诊断技术奠定基础。 相似文献
8.
用绵羊肺炎支原体（ＭＯ）抗原免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取血清抗体阳性免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下进行融合，产生杂交瘤细胞、用间接ＥＬＩＳＡ法对杂交瘤细胞生长孔上清液进行检测，筛选阳性杂交瘤细胞株．以有限稀释法克隆１～２次，得到６株分泌抗绵羊肺炎支原体抗原的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株．选择抗体分泌较高的１４Ａ６、７Ａ２７、Ｂ３８进行了较详细的研究，结果表明，其核内染色体数为９４～９６．抗体属性是：１株为ＩｇＧ２ａ、２株为ＩｇＧ１．用间接ＥＬＩＳＡ法对３株ＭｃＡｂ作符异性分析、该ＭｃＡｂ只特异地与绵羊肺炎支原体抗原发生反应，而不与猪肺炎支原体、山羊无乳症支原体抗原发生反应．将杂交瘤细胞注射ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水．其抗体效价提高１００倍．杂交瘤细胞在液氮中保存１～２年后复苏仍能稳定地分泌抗绵羊肺炎支原体ＭｃＡｂ。 相似文献
9.
抗氨苄青霉素单克隆抗体的制备及初步鉴定 总被引：4，自引：2，他引：2
利用碳化二亚胺(EDC)法将氨苄青 霉素(Ampicillin,AMP)与匙孔嘁血蓝蛋白 (mcKLH)偶联制备免疫原免疫Balb/c小鼠, 应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓 瘤细胞(SP2/0)融合,建立分泌氨苄青霉素单 克隆抗体的杂交瘤细胞株。同上方法将氨苄 青霉素连接到阳离子化的牛血清白蛋白(cB SA)上制备检测抗原,对AMP KLH偶联物 免疫小鼠产生的抗体进行检测。通过对杂交 瘤细胞培养上清的检测、鉴定,筛选出8株高 亲和力的杂交瘤细胞株,用其制备的腹水 ELISA效价达到2×106,纯化后的单克隆抗 体(McAb)可以应用于氨苄青霉素残留的快 速检测。 相似文献
10.
《中国兽医杂志》2016,(2)
本研究采用鸡胚繁殖NDV-XX08,差速离心法纯化NDV,用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与NSO细胞进行融合,用间接ELISA和血凝抑制试验(HJ)进行筛选,挑选效价高的杂交瘤细胞进行克隆和亚克隆,建立阳性杂交瘤细胞株,最终得到一株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,命名为4F12。采用体外细胞培养和体内诱生腹水的方法制备了其McAb。对获得的单克隆抗体采用ELISA,HI,Western-Blotting方法进行鉴定。杂交瘤细胞培养上清和腹水的ELISA效价分别为1:160和1:3.2×10~4。获得的单克隆抗体与NDV具有良好的特异性反应,与鸡胚阴性尿囊液、鸡正常组织、鸡[gG、鸡传染性囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽流感检测抗原均无交叉反应性。HI试验表明,制备的单抗没有血凝抑制活性。Western-Blotting证明获得的单抗与新城疫病毒蛋白有特异性反应。经连续传代20次,冻存、复苏3次,4F12杂交瘤细胞株仍能稳定分泌抗体。 相似文献
11.
用副猪嗜血杆菌（HPS）血清5型灭活菌液免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,以HPS外膜蛋白5（OMP5）为抗原,经间接ELISA法筛选阳性融合孔,并用有限稀释法对筛选的阳性孔进行亚克隆,获得2株分泌抗HPS OMP5单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E2和8D9;间接ELISA法效价检测,1E2和8D9细胞培养上清抗体效价均为1∶2 560,纯化后腹水抗体效价分别为1∶204 800和1∶51 200;抗体型别鉴定,1E2和8D9分别分泌IgG2b、IgG2a型抗体;特异性检测表明,2株单抗均能特异识别OMP5。将2株杂交瘤细胞反复冻融3次复苏后仍能稳定分泌抗体。2株抗HPS OMP5单克隆抗体的成功制备,将为HPS感染快速检测方法的建立以及检测试剂的研制奠定基础。 相似文献
12.
制备抗促乳素(prolactin,PRL)的单克隆抗体。应用PRL纯品免疫BALB/c小鼠,被免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆,将阳性克隆多次有限稀释得到抗PRL阳性单克隆细胞株,杂交瘤细胞上清分离法和诱生腹水法制备单克隆抗体,测其效价。共建立5株持续分泌抗体的杂交瘤细胞,分别命名为AA5B1、AB6C8、BB3C1、CA6E4、CE2H6。杂交瘤细胞株冻存4个月后复苏培养,形态良好,生长旺盛。培养液上清及腹水效价的OD值略有升高,说明杂交瘤细胞株稳定。5株杂交瘤细胞染色体众数均为99～105,并可见到中部和亚中部着丝点的骨髓瘤细胞标志染色体,说明5株杂交瘤细胞确为SP2/0骨髓瘤细胞与被免疫小鼠的脾细胞融合而产生的。 相似文献
13.
为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白单克隆抗体,首先构建猪PRRSV GP5基因的真核重组表达载体pCDNA-GP5,将其作为免疫原,对Balb/c小鼠进行免疫。取免疫4次后的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。构建PRRSV GP5基因的原核重组表达载体pGEX-6P-GP5,将其转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)并诱导表达。以表达的原核蛋白GP5作为单克隆抗体的筛选抗原,通过间接ELISA进行杂交瘤细胞株的检测和筛选。本研究成功构建了GP5基因的真核重组表达载体pCDNA-GP5,表达并纯化了GP5蛋白。经2~3次亚克隆后获得3株针对GP5蛋白的杂交瘤细胞株,IFA和Western blot对3株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行了鉴定。GP5蛋白单克隆抗体的成功研制,为进一步建立特异性PRRSV检测方法奠定了基础。 相似文献
14.
马绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备及鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究采用马绒毛膜促性腺激素(equine chorionic gonadotropin,eCG)纯品免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按1∶10融合,间接酶联免疫吸附法(ELISA)筛选阳性克隆和有限稀释法克隆,扩大培养后于小鼠腹腔制备腹水,共得到8株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用间接ELISA测定抗体效价,效价均达10-5以上。用获得的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体,为eCG分泌水平的ELISA检测方法的建立确立了条件。 相似文献
15.
《中国兽医学报》2016,(9):1531-1536
以原核表达后经纯化的重组牛朊蛋白为免疫原,免疫prnp-/-基因敲除鼠。4次免疫后,利用淋巴细胞杂交瘤技术,取脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合。间接ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞,采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行3次克隆,用间接ELISA筛选出了稳定分泌针对牛重组朊蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为5C9D6。Western blotting鉴定结果表明,5C9D6均能特异性识别重组牛朊蛋白、健康牛、BALB/c脑组织匀浆中的PrPc,不识别prnp-/-基因敲除鼠脑组织匀浆液。本试验制备了可与牛、BALB/c鼠反应的单克隆抗体,同时也为牛海绵状脑病的研究及其诊断方法的建立奠定了基础。 相似文献
16.
SMD单克隆抗体的制备及测定方法的建立 总被引：6，自引：0，他引：6
用戊二醛作为偶联剂 ,将磺胺对甲氧嘧啶 (SMD )与牛血清白蛋白 (BSA )或卵清蛋白 (OVA)偶联形成完全抗原 ,经紫外分光光度计扫描鉴定。以人工抗原免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与骨髓瘤细胞 (SP2 /0 -Ag1 4)融合 ,用间接ELISA联合竞争ELISA法筛选出产生针对SMD抗体的杂交瘤细胞。经克隆 ,得到 3株特异性好的阳性杂交瘤细胞 ,注入小鼠腹腔产生腹水。建立了测定SMD的ELISA法 ,其检测下限小于5ng/mL。 相似文献
17.
旨在制备毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)配子体抗原EnGAM22单克隆抗体,用Ni-NTA亲和层析纯化的重组抗原rEnGAM22免疫BALB/c小鼠,免疫3次后,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用预先建立的ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行4次亚克隆后,获得2株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株并命名为2F3和3D3;对单抗亚类和特异性进行鉴定,应用单抗识别天然蛋白和虫体定位。结果显示,单克隆抗体2F3和3D3亚类分别为IgG2a、IgG2b,纯化后腹水效价分别为1:256 000、1:64 000,能特异性识别重组抗原rEnGAM22和毒害艾美耳球虫天然配子体蛋白;免疫荧光定位显示单克隆抗体2F3和3D3能特异性识别大配子体的成壁体和卵囊壁,表明EnGAM22抗原参与卵囊壁的形成。制备的单克隆抗体为研究球虫卵囊壁形成的分子机制奠定了基础。 相似文献
18.
为获得鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus, IBV)N蛋白的单克隆抗体,通过原核表达IBV N蛋白,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,并按常规方法制备杂交瘤细胞。经ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经过3次亚克隆获得3株杂交瘤细胞株,命名为1#、18#、19#,并进行了抗体亚类的鉴定、Western-blot和IFA检测。结果显示：制备的3株单克隆抗体亚型均为IgG1,Western-blot和IFA试验结果表明单克隆抗体均能与IBV发生特异性反应而与其他禽病常见病毒均无交叉反应。本研究成功制备了IBV单克隆抗体,为进一步建立IBV检测方法和深入研究IBV的生物学特性奠定了基础。 相似文献
19.
为获得针对猪带绦虫六钩蚴（TSO）45W-4BX抗原的杂交瘤细胞株,用IPTG对TS045W-4BX的重组质粒pGEX-4BX进行了诱导表达,并采用Sepharose-4B层析技术对表达产物进行纯化,运用SDS—PAGE和Western—blot分别对其纯度和活性进行了检测。分别用弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂乳化已纯化的猪带绦虫TS045W-4BX重组抗原,随后用其分别免疫BALB／c小鼠3次,检测血清抗体效价呈阳性。之后,再进行加强免疫,取免疫小鼠脾细胞和SP2／0细胞进行融合,经TS045W-4BX抗原和GST抗原双系统间接ELISA筛选,最终获得了18株抗TS045W-4BX抗原的杂交瘤细胞株。采用有限稀释法对其中的4株进行5次亚克隆,最终获取了4株稳定分泌针对TS045W-4BX抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,金标试纸条法鉴定其抗体亚类均属于IgG1类,轻链为κ型。 相似文献
20.
抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
用绵羊肺炎支原体抗原免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取血清抗体阳性免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下进行融合，产生杂交瘤细胞、用间接ＥＬＩＳＡ法对杂交瘤一长孔上清液进行检测，筛阳性交瘤细胞株。 相似文献