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用9头梅山、8头二花脸和4头苏白公猪的精液进行了冷休克和冷冻试验.共分原精(对照)、稀释、稀释后平衡和冷冻四种情况,10个处理组别。结果表明,冷休克使猪精于活力明显下降,并随着低温处理的延长和冷冻过程而加剧.冷休克后光镜下顶体形态主要表现为质膜膨大,顶脊突出或形成皱褶。稀释后平衡有保护顶体减轻冷休克损伤的迹象.冻后精子主要表现为顶体严重肿胀,起泡乃至破裂.原精的顶体完整率与活力呈正相关(r=0.60,p<0.01),低温处理后这两个性状的相关不显著。猪精子冷冻前后的电镜观察研究揭示,解冻后精子的主要损伤部位在顶体.冻后精子质膜严重膨大、破裂,顶体外膜肿胀,形成小泡,顶体內容散失.试验中未见到由质膜和顶体外膜共同形成的所谓“杂合泡”。冷休克和冷冻后精清内 GOT 和 LDH 活性增加,冻后精清內 LDH 为原精的1.5倍,GOT 为原精的13.6倍。低温处理对精清内 GPT 活性的影响不大。用琼脂糖凝胶电泳分离猪精清,得到5条 LDH 同功酶区带.原精冷休克后 LDH—4上升(p<0.05),解冻后精清內 LDH—4上升(p<0.01),原精经稀释平衡后,M—LDH明显升高。 相似文献
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为筛选出适宜于马氏珠母贝Pinctada martensii精子形态分析的染色方法,采用曙红Y和结晶紫染液对不同方法制作的马氏珠母贝精液抹片进行染色,并通过显微镜观察比较染色效果。结果表明：1）采用将精液先抹片后染色（0.8 mg/mL曙红Y染液）的方法时,精子头部着色不完全,染色效果不随染色时间的延长而改善,精子形态特征不明显,故该方法不适于精子形态检测;2）将精液与20 mg/mL的曙红Y染液等体积混合后抹片,精子头部着深红色,尾部着浅红色,精子各部分结构清晰,形态特征明显,背景干净,对比明显;3）用5 mg/mL的结晶紫染液对精液进行渗透染色时,精子形态染色特征明显,头部着深紫色,尾部着浅紫色,背景干净,可较准确地判断精子的形态特征;4）依精子形态对马氏珠母贝精子进行分类,并确定了主要的畸形类型及其特点,马氏珠母贝精子畸形主要集中在精子的颈部和尾部,头部畸形情况较少;5）采用两种染色方法判定的正常精子率之间无显著差异（P〈0.05）,数据稳定,因此,这两种染色方法均可用于马氏珠母贝精子形态的评价中。 相似文献
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【目的】制备猪0.5mL细管冷冻精液,并对其输精效果进行检测。【方法】制备猪0.5mL细管冷冻精液,解冻后对其品质(活力、快速直线游动精子比例、质膜完整率、顶体完整率)进行检测。将36头母猪随机分为8组:A-1、A-2组(各5头)均输新鲜精液精子4×109个,稀释至80mL,其中A-1组采用常规输精,A-2组采用子宫内人工输精;B-1、B-2组(各4头)均采用子宫内人工输冷冻精液,精子数量分别为1×109和2×109个,均稀释至20mL;C-1、C-2组(各5头)均采用子宫内人工输冷冻精液精子2×109个,C-1组稀释至60mL,C-2组稀释至80mL;D-1、D-2组(各4头)均采用子宫内人工输冷冻精液精子4×109个,D-1组稀释至60mL,D-2组稀释至80mL。人工授精后记录妊娠率、受胎率及产仔数量。【结果】制作的猪0.5mL细管冷冻精液解冻后,活力最高的达到(42.4±0.9)%,质膜完整率为(47.2±0.3)%,顶体完整率为(46.8±0.4)%。新鲜精液平均妊娠率为100%,产仔数为9.00±0.63;冷冻精液平均妊娠率为72%,产仔数为6.64±0.82,新鲜精液妊娠率和产仔数均显著优于冷冻精液。【结论】新鲜精液人工输精效果优于冷冻精液;冷冻精液采用60和80mL稀释液体积对产仔率、产仔数没有明显影响;冷冻精液通过子宫内人工输精,效果最佳的精子数为2×109个,稀释液体积为60mL。 相似文献
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以新鲜精液为对照,研究了5种不同渗透压(582、355、329、306、162 mOsm/L)的稀释液(Ⅰ液、Ⅱ液、Ⅲ液、Ⅳ液及Ⅴ液)在冷冻过程中对犬精子功能的影响.精液与稀释液1:1混合后于4℃平衡1.5 h,再转入4℃含甘油的冷冻液中平衡1.5 h,精液最终稀释比为1:2,然后进行冷冻.分别检测冷冻前、后精子的运动度、质膜完整性(PI染色)和顶体完整性(FITC-PNA染色).结果表明:与新鲜精液相比,冷冻前接近等渗的稀释液(Ⅲ液)处理精子后,精子的运动度、质膜完整性与顶体完整性未发生显著变化(P>0.05),其他各组各指标均显著低于对照组(P<0.05),其中以Ⅴ液组降低最显著(P<0.05),但Ⅲ液与Ⅳ液不存在显著差异(P>0.05);冷冻-解冻后各试验组犬精子的运动度、质膜完整性与顶体完整性均显著低于对照组(P<0.05),其中Ⅲ液和Ⅳ液冷冻效果明显优于其他各组(P<0.05),且二者无显著差异(P>0.05),Ⅴ液组冷冻效果最差,依次为Ⅰ液和Ⅱ液.说明等渗和适当低渗的稀释液-冷冻液适合于犬精子冷冻保存. 相似文献
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人工采取5头优质大白猪精液,利用BTS稀释液和添加氨基—钠—十二烷基硫酸脂(OEP)、十二烷基硫酸钠(SDS)及卵黄所组成的防冻液稀释后,冷冻程控仪制成细管冻精,采用荧光显微镜及流式细胞仪对冷冻复苏后精子质膜完整率和凋亡状况进行测定,目的在于比较不同检测方法评估猪冻融精子活率的差异性,探讨OEP、SDS对猪冻融精子质膜完整率和凋亡状况的影响。结果表明,Annexin-V/PI染色流式细胞术能准确测出猪冻融精子质膜完整率及处于凋亡状态的数量,同Annexin-V/PI染色流式细胞术相比,利用SYBR-14/PI染色荧光显微镜法往往高估冻融精子的死亡率。各处理组间冻融精子质膜完整率及凋亡数量存在一定差别,添加OEP防冻剂的实验组早期凋亡精子的比例显著低于对照组(P<0.05),而正常活性精子的比例(46.5%)显著高于对照组(37.2%)(P<0.05),结果提示:OEP对维持冻融精子质膜完整性、抑制冻融精子凋亡起到较好作用。 相似文献
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为研究一种Tris-卵黄稀释液0℃（冰水混合物中）保存牛精液的效果,该试验选用5头西门塔尔牛,将每头牛采集的精液等量分装,按1∶3的比例分别与试验组稀释液（Tris-卵黄专利稀释液）、对照组稀释液（基础稀释液）等温稀释处理,在0℃（冰水混合物中）状态下保存。检测保存0、 1、 2、 4、 6、 8、 10、 12 d的精子活率、顶体完整率及质膜完整性,并用保存5 d的精液进行人工授精,统计受胎率。结果表明：保存4～10 d, A组稀释液保存的精子活率显著高于B组（P<0.05）;保存10 d时,A组精子活率大于50%; 0℃保存牛精子顶体完整率、质膜完整性随保存时间的延长而逐渐降低,但不同处理间无显著差异（P>0.05）。A组稀释液保存牛精子的受胎率显著高于B组。可见,用Tris-卵黄稀释液0℃保存牛精液,保存效果较好,受胎率较高。 相似文献
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用团头鲂精子诱导红白锦鲤雌核发育研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]研究用团头鲂（Megalobrama amblycephala）精子诱导红白锦鲤（Cyprinus carpioL.）雌核发育。[方法]用紫外线灭活的团头鲂精子刺激性成熟的红白锦鲤卵子,进行雌核发育,并采用热休克方法诱导染色体加倍。[结果]成功获得了红白锦鲤雌核发育二倍体鱼苗28尾。诱导红白锦鲤雌核发育的最佳条件为：团头鲂精子采用紫外线照射20min后,在孵化水温20~22℃条件下,与红白锦鲤卵子授精后3min进行热休克处理,41℃水温下持续处理2min,此时雌核发育率最高（1.78%）。形态学比较表明,单倍体与雌核发育F1代二倍体和正常二倍体在发育过程中存在明显差异,从肌节开始沉积大量黑色素,胚体扭曲严重,呈＂C＂型;而雌核发育二倍体与正常二倍体对照组相比,在体长、体高、体色和卵黄囊长等方面都极为相似。[结论]该研究为进一步探讨红白锦鲤色素遗传机制及定向培育优良新品种奠定了基础。 相似文献
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研究探讨了不同解冻方法对0.25 mL奶牛细管冻精解冻后的影响,细管冻精分别在5,15,40,75,90℃下不同时间（1～120 s）进行解冻操作,通过评定精子冻后活率、顶体完整率、尾膜完整率,筛选出最佳的奶牛细管冻精的解冻方法。结果表明：（1）奶牛细管冻精采用75℃解冻3 s,精子的活率最高,解冻效果最好;其次在接近体温40℃解冻20 s,效果也较好;在低温5℃和室温15℃解冻,精子活率低于0.3;在90℃高温解冻条件下不稳定,不适合生产使用;（2）90℃解冻精子的顶体完整率、尾膜完整率明显低于40℃和75℃,差异显著（P＜0.05）,但是精子畸形率却高于40℃与75℃的处理组（P＜0.05）,而后两者间差异不显著（P＞0.05）;（3）不同解冻温度解冻后精子在37℃时保持有效存活时间存在较大差异,表现为：40℃＞75℃＞90℃。因此,在生产实践中对奶牛细管冻精进行解冻时,可根据具体情况选用适合的解冻方法。若解冻后立即输精的,建议采用75℃下3 s解冻;解冻后不能立即输精的,为了使精子在较长时间内保持活力,宜采用40℃下20 s解冻。 相似文献
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HSP90蛋白表达量与牛精子抗冻性的关系 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】探索热应激蛋白90（HSP90）表达量与牛精液冷冻-解冻后品质的关系。【方法】采用假阴道法采集身体健康、年龄2～4岁的9头荷斯坦奶牛精液（编号1～9）,测定新鲜精液指标（活力、形态、活率和密度）,评定其品质,合格的精液样品经过冷冻解冻后检测其精子活率、质膜完整率和顶体完整率,并根据冻后品质将其分为HFTs(High freezing resistance teams)和LFTs（Low freezing resistance teams) 2组,对精子HSP90蛋白进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳和Western blot检测,分析其表达量与精子抗冻性的关系。【结果】不同牛个体精液冻后品质相差较大。SDS-PAGE电泳结果显示,HFTs组的分子质量约为90 ku的蛋白表达量显著高于LFTs组（P＜0.05）,经Western blot分析,该蛋白为HSP90。HSP90蛋白表达量与冷冻-解冻后的牛精子品质呈明显正相关,其与精子活率、顶体完整率、质膜完整率的相关系数分别为0.364,0.447和0.402。【结论】HSP90蛋白表达量可以作为判断牛精子抗冻性的指标之一。 相似文献
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旨在研究他克林对猪精液冻后质量、抗氧化能力及糖代谢的影响机制。手握法采集12头18～24月龄健康杜洛克种公猪精液,在其冷冻保存稀释液中加0.10mmol/L他克林并冷冻保存,检测冻后精子活率、质膜完整率、顶体完整率和畸形率、线粒体膜电位、DNA完整性,同时利用试剂盒检测总抗氧能力、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、总胆固醇含量、丙酮酸含量及己糖激酶活性。结果表明,与鲜精相比,冻融后精子活率和质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位、DNA完整性、抗氧化能力及糖代谢指标均极显著下降,畸形率极显著升高。与空白组相比,他克林显著提高冻后精子顶体完整率、DNA完整率、超氧化物歧化酶、丙酮酸含量;极显著提高精子活率、质膜完整率、线粒体膜电位、总抗氧能力、丙二醛含量、总胆固醇含量及己糖激酶活性,极显著降低畸形率。总之,猪精液冷冻前添加浓度为0.10 mmol/L的他克林可能通过提高抗氧化能力和糖代谢水平改善冻融后猪精子的质量。 相似文献
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为探究不同稀释液对鸡精液冷冻保存效果的影响,选择LR、Lake’s、BPSE、Modified Sasaki、Beltsville和Nabi共6种稀释液对霞烟鸡精液进行冷冻,解冻后分别在37或4 ℃条件下短时间保存,分析不同冷冻稀释液和保存条件对精子活率、活力、功能完整性和抗氧化指标的影响。结果表明,6种稀释液中Lake’s稀释液的冻后活率、活力和顶体完整性最高,分别为48.20%、45.70%和45.26%;LR稀释液虽然获得了48.16%的冻后活率,但其活力显著低于Lake’s稀释液。解冻后4 ℃保存更适合鸡精子的短时间保存,Lake’s和Nabi稀释液在4 ℃条件下保存45 min后活力仍达30 %以上。虽然Nabi稀释液解冻初始时的精子活率和活力低于LR和Lake’s稀释液,但随着保存时间的延长,其冻后精子存活能力表现最佳。随着冻后保存时间的延长,LR、Lake’s和Nabi稀释液冻后精子的线粒体活性、质膜完整性和抗氧化能力均呈现下降趋势,且37 ℃保存时下降更为明显,同时LR稀释液在这些指标上表现出较差的耐受性。综上所述,Lake’s和Nabi冷冻稀释液对鸡精子冷冻保存的效果最佳;解冻后4 ℃保存可延长冻精的体外存活时间;LR稀释液虽获得了较高的冻后活率,但其活力和冻后耐保存性能较差。 相似文献
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直流电场中鲤的行为特性及体长与电刺激阈值的关系 总被引：1，自引：0，他引：1
用行为学的方法测量了鲤Cyprinus carpio在直流电场中的电刺激阈值,并分析了电刺激阈值与体长的关系。结果表明,鲤的感电能力与鱼体所处的位置相关,即感电反应中鲤有游向阴极的现象,头部朝向阳极是鲤趋电反应的主要特征。鲤在各反应阶段的电场强度阈值和电流密度阈值与体长相关,鱼体的状态电压与体长无关。 相似文献
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为研究大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素（proanthocyanidin，PC）对山羊精子的冷冻保护作用，以20％卵黄为对照（EY组），分别在大豆卵磷脂为基础稀释液的冻精稀释液中添加最终浓度为0、10、20、40、60 μg·mL-1的PC（分别命名为SL0、SL1、SL2、SL3、SL4组），冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、抗氧化和凋亡指标进行检测。结果表明，当大豆卵磷脂稀释液中PC添加浓度为40 μg·mL-1（SL3组）时，解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高，分别达58.49%、53.45%、50.46%、55.37%和55.16%，显著高于其他PC添加组和EY组（P<0.05）。SL3组解冻后精子的超氧化物歧化酶（SOD）（224.87 U·mL-1）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量（129.6 U·L-1）最高，总caspase凋亡率（54.33%）和TUNEL凋亡率（41.36%）最低，与EY和SL0组差异显著（P<0.05）。当PC的添加浓度提高至60 μg·mL-1（SL4组）时，解冻后精子质量显著下降，表现为对精子毒性作用。综上，在山羊精液冷冻中，大豆卵磷脂稀释液中添加PC浓度为40 μg·mL-1可降低精子氧化损伤和细胞凋亡，提高冻精品质。该研究改善了无动物源稀释液在山羊精液冷冻中的应用效果，提高了山羊冻精的生物安全性和应用前景 相似文献
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对中间球海胆Strongylocentrotus intermedius精子的超低温保存技术进行了研究。以煮沸消毒海水为基础液,添加体积分数为10%的DMSO、体积分数为6%的甘油以及25 mmol/L海藻糖配制成冷冻保护液,与鲜精液按体积比以1∶1混合,在4℃下平衡15 min,于液氮面上方15、3 cm处分别停留3 min和5 min,然后浸入液氮保存。结果表明：用此方法保存的精子解冻后其存活率可达58.2%,受精率达24.7%;解冻后精子受精时,在受精海水中分别添加0、28、56、112、280 mmol/L的葡萄糖,56 mmol/L组的受精率高于其他组,受精率达26%;精子解冻后受精时,在受精海水中添加适量葡萄糖有助于提高受精率。本试验表明,冷冻过程中降温方式、冷冻保护液、平衡时间对精子的冷冻保存效果均有较大影响,各个因素通过优化组合可以大大提高解冻后精子的存活率和受精率。 相似文献
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牛精液中药复方稀释液配方筛选研究 总被引：1，自引：0，他引：1
在种公牛精液商业稀释液的基础上,按6%、12%、24%和48%的4个水平向稀释液中分别添加4种中药复方提取液,制作0.25 ml细管冻精,解冻(40 ℃,10 s)后比较分析精子活率、顶体完整率、质膜完整性3个指标,以确定较优的中药稀释液配方.结果表明:添加了中药复方提取液的稀释液能更有效的冷冻保存牛精子细胞.其中,复方一和复方二的冷冻效果最佳.复方一在添加量为12%时精子活率、顶体完整率及质膜完整率分别为41.50%、40.14%和38.16%(P＜0.05),分别比对照组提高了10.67%、3.92%和5.50%;复方二在添加量为6%时,精子活率、顶体完整率、质膜完整率3项指标分别达到41.33%、41.59%和40.00%(P＜0.05),分别比对照组提高了10.50%、5.37%和7.34%. 相似文献