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利用简并引物RT-PCR,克隆复叶槭FtsZ基因的cDNA序列,利用马铃薯X组病毒载体pgR107,构建RNA干扰重组病毒载体pVX-AnFtsZi,并转化农杆菌GV3101(含辅助质粒pJIC Sa-rep)侵染烟草.40 d后,检测烟草内源FtsZ基因的表达量.研究结果表明:从复叶械中克隆到的569bpFtsZ基因cDNA片段,具有FtsZ蛋白的核心功能序列GGGTGSG.构建的hpRNA型RNA干扰载体抑制了FtsZ基因的表达.为培育槭树类彩叶新品种奠定分子理论基础. 相似文献
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为研究油茶种子成熟调控蛋白基因的功能,以pCAMBIA1304质粒为载体,根据油茶种子成熟调控蛋白基因的cDNA序列设计了小干扰RNA(Si RNA)序列,构建了油茶种子成熟调控蛋白基因小干扰RNA植物表达载体pCAMBIA1304-si RNA,并借助农杆菌介导叶盘法将pCAMBIA1304-si RNA转化到野生型烟草中,获得了稳定表达的转基因烟草苗。为下一步的油茶种子成熟调控蛋白基因的功能鉴定奠定了基础。 相似文献
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《中南林业科技大学学报(自然科学版)》2015,(7)
糖基转移酶基因是生物分子糖基化中的关键基因,已有研究表明少数糖基转移酶14(Glycosyltransferase14,GT14)家族基因在植物细胞壁合成及对逆境的响应中发挥重要的生物学功能,然而GT14基因对逆境的响应机制目前仍不清楚。为了研究糖基转移酶基因的生物学功能,本实验室在克隆了白桦Bp GT14基因(JQ409354)编码区序列全长的基础上,利用Bam HⅠ单酶切的方法构建了白桦Bp GT14基因的p BI121植物表达载体,并利用一步PCR之后在同一体系中同时酶切-连接的方法,构建了Bp GT14基因RNA干扰载体,相比于传统的RNA干扰载体构建方法更为高效快捷。测序结果表明,植物表达载体及RNA干扰载体均构建成功。本研究的完成,为Bp GT14基因进一步的遗传转化及转基因植株的获得奠定了基础,同时为今后植物表达载体的构建提供了高效便捷的参考方法。 相似文献
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慈竹木质素合成酶基因4CL RNAi载体构建与烟草转化 总被引：2，自引：0，他引：2
根据慈竹4-香豆酸辅酶A连接酶(Na4CL)全长cDNA序列,通过RT-PCR从慈竹幼笋cDNA中扩增约600 bp的保守片段。DNAMAN多重比对分析表明,该目标片段与3条烟草4CL基因同源性达84.08%。将目标片段插入到pSK-int中间表达载体中,获得pSK-4CL-RNAi中间表达载体,然后将其转入植物双元表达载体pBI121中,构建该基因的shRNA表达载体,并利用农杆菌介导法转化烟草(K326)。对获得的抗性再生植株的PCR检测分析初步表明该基因已插入烟草基因组中。 相似文献
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为了探究马尾松木材形成的分子机制,以马尾松嫩枝的总RNA反转录得到的cDNA为模板,利用反转录PCR和RACE技术克隆得到马尾松CesA2基因的全长cDNA序列(命名为PmCesA2),序列长度为3 500 bp,包含一个长为3 174 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码1 057个氨基酸.序列分析表明:PmCesA2序列与已报道的火炬松CesA2基因(AY789651.1)的相似性达98％.将全长基因克隆到载体pBI121质粒的SnaBI,Sacl双酶切位点之间,构建正义表达栽体pBI121-PmCesA2. 相似文献
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[目的]构建白蜡虫(Ericerus pela)蜡酯合酶(wax synthase,WS)基因干扰载体并建立其体外dsRNA(doublestranded RNA,dsRNA)原核表达体系,低成本大量制备白蜡虫ws基因的dsRNA。[方法]克隆白蜡虫蜡酯合酶基因ws片段,连入L4440载体,将重组质粒转入大肠杆菌HT115感受态细胞,经IPTG诱导获得与目的片段相对应的dsRNA。[结果]白蜡虫ws基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体成功构建,重组质粒转入HT115感受态细胞经IPTG诱导后菌体成功表达dsRNA,dsRNA的平均获得量1 705 ng·m L~(-1)。[结论]该研究通过原核表达白蜡虫ws基因的dsRNA,为后续利用RNAi实验研究白蜡虫ws基因功能及作用机理奠定基础。 相似文献
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油桐桐酸合成酶基因克隆和植物表达载体构建 总被引：1，自引：0，他引：1
α-桐酸合成酶是控制亚油酸向α-桐酸(18:3Δ9cis,11trans,13trans)转化的关键酶。本研究以发育中的油桐种子为材料,利用改良TRIzoL法提取总RNA,并根据GenBank中已经登录的α-桐酸合成酶基因FADX的序列,设计特异性引物,采用RT-PCR方法,克隆得到FADX基因全长cDNA,长度为1221bp。通过生物信息学分析结果表明,该序列5’端和3’端非编码区序列长度分别为13bp和47bp,含有一个开放阅读框(14～1174bp),编码386个氨基酸,含有典型的脂肪酸脱氢酶结构域。将所得基因经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI121,构建反义表达载体pBI121fadx。 相似文献
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[目的]分别构建84K杨的微管蛋白TUA5和TUB16与红色荧光蛋白mCherry融合的植物过表达载体,瞬时表达验证载体在植物体内表达后的荧光信号,为研究杨树微管功能奠定基础。[方法]以毛果杨微管蛋白TUA5和TUB16的基因序列为模板,设计84K杨的皿5和7TZB76基因的引物,提取野生型84K杨的RNA并反转录成cDNA,同源克隆得到84KTUA5和84KTUB16基因,分别连接在pCAMBIA 1300载体mCh-ep荧光标签的N,端和C端,转化到大肠杆菌TOP10感受态细胞中,通过菌落PCR和测序鉴定获得阳性单克隆,并通过电击法将重组质粒转化到农杆菌GV3101中,瞬时转化烟草后进行荧光观察。[结果]克隆得到了84KTUA5和84KTUB16基因,成功与pCAMBIA 1300-mCherry载体连接,烟草瞬时表达荧光观察结果显示:仅目的基因与mCherry标签C,端相连的融合蛋白能够成功表达,且荧光明显。[结论]成功构建了84K杨皿5和TUB16基因与pCAMBIA 1300-mCherry的融合表达载体,为进一步研究杨树微管功能提供了背景材料。 相似文献
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以我国重要的生物能源灌木--中间锦鸡儿枝叶和种子为材料,根据GenBank中已经发表fad2基因的同源序列,利用PCR技术克隆得到基因片段.在GenBank中Blast(GenBank登录号AY957393)所得基因片段和同属豆科的Glycine max Gmfad2-2a同源性高达88%,位于fad2基因编码区中部.将所得片段经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI121,构建了反义表达载体pBI121fad2,并利用农杆菌介导法转入烟草叶片,获得了抗卡那霉素和氨苄青霉素的再生烟草植株.初步分析结果表明:与对照烟草相比,转基因烟草种子脂肪酸含量没有明显差异,而亚油酸则减少10.3%. 相似文献
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IntroductionRAPDisawidelyadoptedmolecularbiologicaltechniqueinmanyfieldsincludingforestry.J.1.Hormazaetsl.(1994)appliedthistechniquetosexrelatedresearchondioecioustreespeciesPistsciaveraL.andresultedverywell.Arandomprimerthatproducesspecificamplificationsolelyforfemaleplantwasscreened.Itwassupposedthespecificamplificationwascloselylinkedtofemafesexcontrolgene.AndtherandomprimerwasprovedapplicabletoseedlingsexidentificationofPiStscisveraL.bysystematicalexperiments.ApreliminarystudyonAcerne… 相似文献
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1999年 7月和 8月对干旱胁迫下 3年生复叶槭幼苗挥发物进行了检测 .7月检测出 10种挥发物 (丁醇、戊醇、Z 3 己烯 1 醇、E 2 己烯 1 醛、戊醛、戊酸、己醛、己酸、苯乙酮和长叶烯 )明显受干旱的影响 .除长叶烯外 ,其他化合物释放量随干旱程度的增加而增加 .复水后 ,除长叶烯外其他化合物释放量都下降 .在 8月份 ,没有发现上述挥发物与干旱之间的相关性 .但是 ,另外 7种物质受干旱影响较大(包括环己基异硫氰酸酯、肉桂腈、苯酚、萘、庚醛、长叶烯、苯丙噻唑 ) .这些物质在干旱条件下释放量下降而复水后大部分物质升高 相似文献
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三种槭树叶的组织结构与抗虫性的关系 总被引：1，自引：0，他引：1
为了研究槭树叶的组织结构与抗虫性的关系,采用石蜡切片的方法,对复叶槭、五角枫和挪威槭3种槭树叶的组织结构进行了比较研究。数据分析结果表明:3种槭树科植物的叶片总厚度、叶片表皮气孔密度和栅栏组织密度的大小排列顺序均为:复叶槭<五角枫<挪威槭,方差分析结果表明这3项指标均差异显著,且大小排列顺序与植物的抗虫性顺序是一致的。而叶柄木质部与韧皮部厚度比值大小排列顺序为:挪威槭<五角枫<复叶槭,方差分析结果表明此指标差异极显著,且大小排列顺序与植物的抗虫性顺序是相反的。此外,3种槭树科植物叶片表皮及主脉韧皮部中的内含物与植物的抗虫性也可能存在某种联系。 相似文献
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《林业研究》2020,(5)
Boxelder maple(Acer negundo L.) is widely grown as ornamental trees in China. In 2017 in Pizhou,Jiangsu Province, China, the boxelder maple trees suffered from a disease which caused wilting and yellowing leaves,rotted roots, and discolored xylem. The disease broke out from July to August. Seven fungal isolates were obtained from symptomatic tissue and tested for pathogenicity.Isolate An7 was isolated at high frequency from the discolored vascular tissues, which caused the wilt disease on healthy 2-year-old seedlings after inoculation and eventually killed all the seedlings. We conducted molecular analysis for An7, including the partial sequences of the rDNA internal transcribed spacer, calmodulin, RNA polymerase II second largest subunit and the translation elongation factor 1-a and evaluation of the variously sized conidia, chlamydospores and conidiophores and cultural traits. The pathogen was identified as Fusarium nirenbergiae, a member of the Fusarium oxysporum speciescomplex. To our knowledge, this is the first report of F.nirenbergiae causing wilt on A. negundo in China. 相似文献