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1.
《畜牧兽医学报》2020,(1)
旨在建立一种可靠的体外活番鸭淋巴细胞的荧光标记方法,并用于分析番鸭呼肠孤病毒感染对雏番鸭回肠淋巴细胞归巢的影响。选择活细胞荧光染剂5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE,CFSE)对分离的番鸭淋巴细胞进行标记和利用流式细胞术对体外标记的淋巴细胞体内示踪检测分析,并利用该方法对MDRV感染雏番鸭回肠组织的淋巴细胞数量进行流式细胞术和石蜡切片免疫荧光检测分析;结果最终确定CFSE体外标记番鸭淋巴细胞的条件为以PBS为孵育液,终浓度10μmol·L~(-1),37℃30min;试验结果表明番鸭外周血内的CFSE~+淋巴细胞率基本稳定在2%～5%,CFSE~+淋巴细胞峰值出现顺序依次为脾、空肠、回肠、盲肠、十二指肠、法氏囊和胸腺;此外,感染MDRV后1～10dMDRV组中CFSE~+淋巴细胞率极显著(P0.01)高于MOCK组,该结果与α4~+淋巴细胞率和石蜡切片免疫荧光检测结果一致。结果表明本试验CFSE标记的淋巴细胞可用于体内淋巴细胞示踪,初步应用结果提示MDRV感染促进番鸭淋巴细胞向回肠归巢,为进一步阐明MDRV感染的肠道组织致病机制奠定了基础。 相似文献
2.
《中国预防兽医学报》2019,(8)
为研究番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染鸭后肠淋巴细胞归巢中的细胞定位,本研究通过RT-PCR方法扩增番鸭肠道α4编码基因,构建重组表达质粒p ET-His-α4,将其转化E.coli BL21 (DE3)表达了r His-α4,以其为抗原免疫福建黄兔,制备了抗r His-α4多克隆抗体,该多克隆抗体的间接ELISA和琼扩效价分别为1∶52 000和1∶32。利用制备的多抗对MDRV感染的番鸭淋巴细胞进行western blot和间接免疫荧光检测,结果显示体外淋巴细胞在感染MDRV后,α4蛋白的表达量呈增长趋势;雏番鸭感染MDRV后盲肠的α4+淋巴细胞增加的同时CFSE+淋巴细胞也显著增加,表明MDRV感染后诱导淋巴细胞大量表达了α4整合素,导致淋巴细胞向肠道黏膜组织归巢。本研究制备的番鸭r His-α4兔源多克隆抗体可以用于番鸭整合素α4的检测,同时也为进一步阐明MDRV感染诱导淋巴细胞归巢的分子机制研究奠定了基础。 相似文献
3.
为探究番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染对雏番鸭肠黏膜免疫的影响,本研究将100只1日龄MDRV抗原抗体阴性雏番鸭随机分为二组:空白对照组(NCG)和MDRV同居感染组(CIG),利用人工感染发病的20只番鸭对GIC组番鸭进行同居感染。NCG和CIG组番鸭分别于后者同居感染1 d、3 d、6 d、10 d、15 d、21 d后采集其十二指肠、空肠、回肠样品进行肠道形态结构(绒毛高度、宽度、V/C值、肠壁厚度、绒毛表面积)的观察及免疫相关细胞(上皮内淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞)的检测。结果显示:与NCG相比,CIG番鸭肠道绒毛高度下降、宽度变窄,排列稀疏,V/C值降低,绒毛表面积下降,肠壁厚度变薄,上皮内淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞数量下降,尤其是同居感染6 d以后其各项检查指标均与NCG差异极显著(p0.01)。表明MDRV可导致肠道消化吸收功能障碍和黏膜免疫抑制。该研究结果进一步充实MDRV感染的致病机制。 相似文献
4.
将抗番鸭GPV单抗腹水采用透析法标记异硫氰酸荧光素（FITC）,制备成抗GPV荧光抗体,研制检测GPV抗原的直接免疫荧光诊断方法。结果显示GPV荧光抗体仅与GPV阳性的组织切片或细胞呈现特异性荧光,与番鸭细小病毒（MPV）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）、鸭副粘病毒（DPMV）、鸭病毒性肝炎病毒（DHV）和正常番鸭组织切片不反应;与间接荧光方法的符合率为92．9％。表明GPV荧光抗体具有较好的特异性、敏感性和准确性,可用于临床快速诊断番鸭小鹅瘟病。 相似文献
5.
《中国家禽》2016,(9)
为研究猴头菇多糖(HEPS)对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染雏番鸭肠道修复作用与黏膜地址素细胞黏附分子1(MAd CAM-1)分泌量的关系,将200只1日龄番鸭随机分为空白对照组(BCG)、猴头菇多糖对照组(HCG)、同居感染对照组(CICG)和猴头菇多糖预防组(HPG),其中后两组按建立MDRV自然感染发病模型进行同居感染;各组番鸭分别于同居感染3、6、10、15和21 d后取血液和十二指肠样品进行放射性免疫检测MAd CAM-1含量,并观察其肠道形态和淋巴细胞分布及数量变化。结果显示,HCG组番鸭肠道MAd CAM-1分泌量极显著高于HPG(P0.01),且显著高于CICG(P0.05),HEPS对MDRV感染番鸭血清中MAd CAM-1含量的调节作用不显著;HPG组与CICG组相比,肠道形态结构较完整,淋巴细胞的分布有向黏膜上皮移动的趋向,且分布在细胞顶端的数量增多。研究表明:HEPS可能通过调节MDRV感染番鸭肠道MAd CAM-1的分泌量,参与淋巴细胞归巢过程,起到修复和保护肠道黏膜,提高雏番鸭的黏膜免疫力的作用。 相似文献
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7.
不同感染剂量MDRV对番鸭免疫反应和细胞毒性作用的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
用不同剂量番鸭呼肠孤病毒(MDRV MW9710株)感染8日龄番鸭后,通过检测血液中淋巴细胞对ConA、LPS的反应和NK细胞、细胞毒T细胞(CTL)的细胞毒性作用,探讨MDRV感染对番鸭免疫细胞功能和细胞毒性作用的影响。结果显示,不同感染剂量MDRV均会抑制番鸭血液淋巴细胞对ConA、LPS的增殖反应,降低NK细胞和CTL细胞的杀伤活性,且影响程度与剂量相关;同时感染番鸭生长缓慢,脾脏肿大,胸腺和法氏囊缩小。上述结果表明,MDRV感染能导致番鸭免疫抑制,且细胞免疫抑制程度与感染病毒量有关。 相似文献
8.
应用原位末端标记法和免疫组化SABC法,分别以H9亚型禽流感和番鸭呼肠病毒单独感染或混合感染雏番鸭后1、3、5、7、10d对胸腺、法氏囊、脾脏细胞凋亡和P53的动态变化进行检测。结果显示,H9亚型AIV,MDRV单独感染和混合感染均可导致雏番鸭胸腺、法氏囊和脾脏出现淋巴细胞凋亡增多;病毒感染早期各免疫器官组织细胞凋亡明显,感染后期细胞凋亡量逐渐减少;混合感染组脾脏、胸腺细胞凋亡更为显著。P53表达的变化与细胞凋亡呈现相同变化规律,表明P53表达与病毒诱导的细胞凋亡机制密切相关。 相似文献
9.
为了解福建省番鸭呼肠孤病毒（Muscovy duck reovirus,MDRV）的生物学特性及其遗传变异情况,2021—2022年从福建省番鸭集中饲养区,收集疑似MDRV感染临床病例的病料样品125份,进行MDRV病原学检测以及MDRV病原分离、攻毒试验、疫苗免疫攻毒试验和S4基因序列分析。结果显示:在115份免疫过MDRV活疫苗的临床病例病料中未检测到MDRV阳性,在10份未免疫MDRV活疫苗的临床病例病料中,检出6份MDRV阳性;从阳性病料中分离出的6株MDRV毒株均能致死番鸭胚,对雏番鸭的致病率为60%～100%,致死率为40%～60%;对1日龄番鸭免疫MDRV活疫苗后,在7日龄时进行分离毒株攻毒试验,未见番鸭发病死亡;6株MDRV分离毒株S4基因核苷酸序列的同源性大于99%,与1997年流行株MDRV-MW9710同源性为98.6%～99.4%,属于同一分支。结果表明:MDRV在福建省番鸭群中依然存在,对未免疫番鸭群的致病性较高,其致病性和S4基因序列特性与最初流行毒株变化不大,当前疫苗仍可有效预防MDRV感染,因此要重视MDRV活疫苗的免疫。 相似文献
10.
为研究不同剂量的猴头菇多糖(HPS)对番鸭感染番鸭呼肠孤病毒(MDRV)后病死率及肠道形态结构的影响,试验通过建立MDRV自然感染发病模型,采用HPS预防给药,给药剂量分别为0.1 g/L、0.2 g/L、0.4 g/L,试验期25 d。结果表明:给药组试验番鸭感染MDRV后该病潜伏期延长、发病临床症状减轻、病死率下降,中剂量(0.2 g/L)HPS效果最明显;MDRV感染后,番鸭十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度、绒腺比值(V/C值)、肠壁厚度、绒毛宽度、绒毛表面积均低于空白对照组(P0.01);而给药组上述指均标高于同居感染对照组(P0.01),其中中剂量HPS组提高最明显。由此可见,在饮水中添加不同剂量的HPS均可缓解MDRV感染的临床症状,保护消化道形态结构,降低感染番鸭的病死率,且以中剂量(0.2 g/L)HPS效果最好。 相似文献
11.
为了解番鸭源鸭疫里默氏杆菌的耐药性,本研究对疑似鸭疫里默氏杆菌感染的发病番鸭进行细菌分离培养、革兰氏染色镜检、病鸭病原检测、生化试验、16S rRNA序列分析、PCR鉴定、药敏试验和耐药基因检测。细菌分离结果显示,分离菌在鲜血琼脂培养基上长出表面光滑、边缘整齐、有光泽、半透明的奶油状针尖大小菌落;革兰氏染色镜检呈革兰氏阴性短小杆菌,命名为GZQN201907。GZQN201907生化试验中尿素反应阳性,葡萄糖、麦芽糖、乳糖等生化反应呈阴性。其16S rRNA系统进化树与鸭疫里默氏杆菌处于同一分支;并且分离菌鸭疫里默氏杆菌OmpA基因PCR鉴定结果为阳性。其对头孢呋辛、红霉素、头孢他啶等18种抗菌药耐药,对羧苄西林和环丙沙星中度敏感,对新霉素和复方新诺明敏感。而耐药基因能检测出β-内酰胺类耐药基因VIM、TEM,四环素类耐药基因tetB,大环内酯类耐药基因ermB和ermF。药敏试验与耐药基因检测结果说明,GZQN201907对β-内酰胺类、四环素类、大环内酯类3类药物的耐药表型和耐药基因检测结果一致。动物回归试验中接种GZQN201907的雏鸭在72 h内全部死亡,而对照组雏鸭未出现任何症状,说明GZQN201907对雏鸭有致病力。试验成功分离到1株番鸭源鸭疫里默氏杆菌,为鸭疫里默氏杆菌病的防治奠定基础。 相似文献
12.
In order to understand the drug resistance of Riemerella anatipestifer from Muscovy duck,this study carried out bacterial isolation and culture,Gram staining microscopy,pathogen detection,biochemical test,16S rRNA sequence analysis,PCR identification,drug sensitivity test and drug resistance gene detection for Muscovy duck suspected of Riemerella anatipestifer infection.The results of bacterial isolation showed that on the blood agar medium,the isolated bacteria grew creamy needle tip size colonies with smooth surface,neat edge,luster and translucency.The Gram-negative bacillus brevis was detected by Gram-negative staining microscopy,and it was named GZQN201907.In the biochemical test of GZQN201907,urea reaction was positive,but glucose,maltose,lactose and other biochemical reactions were negative.The 16S rRNA phylogenetic tree was in the same branch as Riemerella anatipestifer.And the OmpA gene of PCR identification results of the isolated strain were positive.The drug sensitivity test was sensitive to 18 antibiotics including cefuroxime,erythromycin and ceftazidime,moderately sensitive to carboxypicillin and ciprofloxacin,and sensitive to neomycin and cotrimoxazole.And the resistance genes could detect the β-lactam resistance genes VIM and TEM,tetracycline resistance genes tetB,macrolide resistance genes ermB and ermF.The results of drug sensitivity test and drug resistance gene detection indicated that GZQN201907 showed the same resistance phenotype and gene detection results for β-lactam,tetracycline and macrolide.In the animal regression test,all the ducklings inoculated with GZQN201907 died within 72 h,while the control group showed no symptoms,indicating that GZQN201907 was virulent to the ducklings.One strain of Riemerella anatipestifer from Muscovy duck was successfully isolated,which laid a foundation for the prevention and treatment of Riemerella anatipestifer from muscovich. 相似文献
13.
根据GenBank上发表的鸭呼肠孤病毒基因组序列,利用生物学软件设计合成内外2对引物,建立了检测番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)的套式RT-PCR检测方法,并运用建立的检测方法对分离病毒与其他禽病病毒进行检测。结果显示,该方法能从MDRV中扩增到与预期大小相符的特异性目的片段,检测灵敏度达到0.1 pg病毒RNA,对禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)、鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)、番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)、鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)、鸭病毒性肝炎病毒(duck hepatitis virus,DHV)等病毒样品的扩增结果均为阴性。因此,本研究为番鸭呼肠孤病毒病的快速检测及诊断研究提供参考。 相似文献
14.
《Veterinary microbiology》2015,175(2-4):232-243
Muscovy duck reovirus (MDRV) is a highly pathogenic virus in waterfowl and causes significant economic loss in the poultry industry worldwide. Because the host innate immunity plays a key role in defending against virus invasion, more and more attentions have been paid to the immune response triggered by viral infection. Here we found that the genomic RNA of MDRV was able to rapidly induce the production of interferons (IFNs) in host. Mechanistically, MDRV infection induced robust expression of IFNs in host mainly through RIG-I, MDA5 and TLR3-dependent signaling pathways. In addition, we observed that silencing VISA expression in 293T cells could significantly inhibit the secretion of IFNs. Remarkably, the production of IFNs was reduced by inhibiting the activation of NF-κB or knocking down the expression of IRF-7. Furthermore, our study showed that treatment of 293T cells and Muscovy duck embryo fibroblasts with IFNs markedly impaired MDRV replication, suggesting that these IFNs play an important role in antiviral response during the MDRV infection. Importantly, we also detected the induced expression of RIG-I, MDA5, TLR3 and type I IFN in Muscovy ducks infected with MDRV at different time points post infection. The results from in vivo studies were consistent with those in 293T cells infected with MDRV. Taken together, our findings reveal that the host can resist MDRV invasion by activating innate immune response involving RIG-I, MDA5 and TLR3-dependent signaling pathways that govern IFN production. 相似文献
15.
试验旨在探究猴头菇多糖（HEP）预处理RAW264.7细胞对番鸭呼肠孤病毒（MDRV）复制的影响及其机制,从Toll样受体3/β干扰素TIR结构域衔接蛋白（TLR3/TRIF）信号通路解析HEP在调节MDRV所致的雏番鸭机体免疫抑制中的作用机制并提供体外试验参考。试验设空白对照组（BCG）、病毒感染对照组（VCG）、HEP对照组（HCG）和HEP预防病毒感染组（HPG）,RAW264.7细胞在MDRV感染12和24 h后,通过Western blotting检测各组细胞中TLR3、TRIF和肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）的蛋白表达量;病毒感染24 h后,用ELISA法检测各组细胞培养液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-10（IL-10）、IL-6、IL-1β、干扰素-β（IFN-β）的含量。TCID50检测结果表明,MDRV病毒的TCID50为103.46。病毒感染后12 h,细胞未出现明显变化;病毒感染后24 h,细胞变圆;病毒感染后36 h,细胞大量死亡。MDRV在RAW264.7细胞中的复制结果显示,在感染病毒12~24 h内,σNS的表达量呈现上升趋势;在24~36 h,σNS的表达量维持在较高水平。Western blotting结果显示,与空白对照组相比,VCG组细胞TLR3、TRIF和TRAF6蛋白的表达量在感染后12和24 h均显著升高（P<0.05）,HCG组TRIF蛋白的表达量均显著升高（P<0.05）;与感染组相比,HPG组的σNS、TLR3、TRIF和TRAF6蛋白表达量在病毒感染12和24 h均显著降低（P<0.05）。ELISA检测结果显示,与空白对照组相比,VCG组细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-β的含量均显著升高（P<0.05）;与感染组相比,HPG组细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著降低（P<0.05）,IFN-β的含量显著升高（P<0.05）。结果表明,HEP可调节MDRV感染诱导RAW264.7细胞TLR3信号转导通路活化,抑制TLR3信号转导通路下游产物TNF-α、IL-10、IL-6和IL-1β的过度表达,同时上调IFN-β的表达,从而抑制MDRV在RAW264.7细胞中的复制。 相似文献
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探讨番鸭呼肠孤病毒强毒株和弱毒株在番鸭免疫器官中的分布和排毒的差异。结果显示强毒株在感染后1d就可在脾脏、法氏囊、胸腺检出病毒RNA,高峰期为攻毒后7～14d;直到感染后35d,在免疫器官中不能检测到病毒RNA。接种强毒株后7d开始向外界排毒,而14d后停止向外界排毒。雏鸭免疫弱毒疫苗后3d,即可在脾、胸腺、法氏囊中检出病毒RNA;高峰期为攻毒后7～14d,免疫后21d免疫器官中的检测逐渐降低,直到感染后28d,在免疫器官中不能检测到病毒RNA。表明番鸭接种活疫苗后7d开始向外界排毒,而11d后停止向外界排毒。 相似文献
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免疫组化法检测番鸭呼肠孤病毒在番鸭体内的分布 总被引：1，自引：1，他引：0
选取10日龄健康番鸭84只,人工感染番鸭呼肠孤病毒,于攻毒后6、12、24、48、60、72、84、108、144、204、312、384 h取材,应用免疫组化方法对病毒在番鸭体内的分布进行检测,从而探索番鸭呼肠孤病毒感染的细胞及发病机理。检测结果表明,感染后6、12 h时各脏器均呈阴性反应;感染后24 h,从肝脏、肠道、大脑中最先检测到阳性细胞;感染后144 h,各脏器均呈强阳性;感染后204 h,脾脏、肺脏及胸腺的阳性反应强度仍持续,其他脏器的阳性反应强度都有所下降。番鸭呼肠孤病毒对肝脏、脾脏、盲肠的组织嗜性最强,表明这3种组织为该病毒的主要靶器官。番鸭呼肠孤病毒感染的细胞如下：各组织器官的血管内皮细胞;肝脏的肝细胞、枯否氏细胞;脾脏的淋巴细胞、巨噬细胞;肾脏的肾小管上皮细胞、足细胞;心脏的心肌细胞;肺脏的肺泡上皮细胞、尘细胞;胸腺的淋巴细胞、巨噬细胞;法氏囊的淋巴细胞;肠道的上皮细胞、杯状细胞、淋巴细胞;大脑和小脑内的少突胶质细胞。在肝脏、肾脏、心脏、肺脏等组织内可见炎性浸润的淋巴细胞呈阳性。 相似文献
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番鸭呼肠病毒病是由番鸭呼肠病毒引起的一种急性传染病,主要发生于40日龄内的番鸭,临床上以软脚为主要症状,并伴有腹泻,发病率高,病情严重时可致全群死亡,给番鸭养殖业带来了巨大的损失。其病原为呼肠病毒科正呼肠病毒属番鸭呼肠病毒。文章综合了国内外对该病的病原学研究成果,从病毒的分类地位、生物学特性、基因组与编码蛋白、病原分布及流行特性、检测与防控等方面对该病的病原学进行了较全面的论述,以期对该病的深入研究和防控提供有用的资料。 相似文献