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自从1993年从发生增生性肠炎(PPE)的病猪中成功地分离到劳森氏胞内菌,并复制出PPE以来,许多国家和地区都已证实存在PPE病例。但由于劳森氏胞内菌在体外培养较困难,需要特殊的细胞系,所以我国对该病的研究尚在起步阶段,目前仅有少数猪病诊断实验室能应用PCR方法来检测劳森氏胞内菌。现将我们在2004年1-10月间对17个疑似PPE猪群中劳森氏胞内菌的检测结果报告如下,供大家参考。一、材料与方法1.疑似PPE猪群的选择,应符合下列条件之一:(1)2￣4月龄猪散发性腹泻;(2)后备种猪或育肥猪急性死亡,皮肤苍白。2.检测样品的采集:腹泻粪便或回肠… 相似文献
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《中国兽医学报》2017,(1):40-46
为了掌握胞内劳森菌在湖北省5个疑似猪增生性肠炎暴发规模化猪场中的流行情况,我们建立了一种从粪便中检测胞内劳森菌的巢式PCR方法,并利用该方法对采集于这5个规模化猪场不同生产阶段不同临床表现猪群的1 003份粪便样品进行监测。结果显示:5个猪场的胞内劳森菌检出率在11.5%~19.4%之间,平均阳性率为15.5%;就临床表现而言,腹泻猪粪便样品中胞内劳森菌的检出率高于非腹泻猪;就生产阶段而言,保育及育肥猪中胞内劳森菌的检出率高于断奶仔猪、母猪和公猪。我们还利用粪便检测胞内劳森菌呈阳性、疑似临床症状明显的猪的肠道制备的感染溶液进行了病例复制,试验猪在灌服感染溶液后出现了与胞内劳森菌感染相似的临床症状及病理变化,并且从感染猪的肠道组织和粪便中检测到了胞内劳森菌的存在。本试验对于进一步了解胞内劳森菌在我国猪群中的流行情况及致病性具有一定的意义。 相似文献
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为建立一种快速有效的检测猪劳森氏胞内菌(LI)的方法,本研究根据该菌的天冬氨酸氨裂解酶基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条TaqMan探针,建立了定量检测LI的荧光定量PCR方法,并对其进行敏感性、特异性、稳定性试验以及与套氏PCR方法的比较试验.结果表明,标准曲线的循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系,相关系数为0.998507;该方法对其他病原体的检测无特异性荧光信号;而且该方法灵敏度高于套式PCR方法.本研究为猪LI的检测提供了一种特异、敏感、快速的定量检测方法. 相似文献
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《中国预防兽医学报》2016,(12)
为建立一种猪增生性肠炎(PPE)的快速诊断方法,本研究根据Gen Bank中已登录的胞内劳森菌(LI)基因组16S rDNA基因序列,设计1对引物,以疑似PPE的病料样品,通过PK-15细胞培养,分离到一株LI,建立了LI的纳米金PCR检测方法。结果表明该方法能够扩增得到与实验设计相符的202 bp(LI)的特异性片段;与大肠杆菌、沙门氏菌、流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒无交叉反应,特异性良好。与普通PCR法进行比较,该方法检测灵敏度比普通PCR高100倍。经临床检测,从50份病料样品中检出5份阳性样品,并且发现回肠粘膜和粪便中LI的检出率明显高于组织中LI的检出率。该方法可以用于LI的临床快速检测与流行病学调查。本研究为进一步研究LI的人工培养和实验室诊断PPE奠定了基础。 相似文献
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《国外畜牧学(猪与禽)》2020,(5)
为了解胞内劳森氏菌在海南省各猪场中的流行情况,应用普通PCR技术检测了来自该省不同地区14家猪场的348份猪粪便样品中的胞内劳森氏菌。结果表明,送检的猪场全部存在胞内劳森氏菌流行情况,场阳性率达到100%;348份猪粪便样品中有133份检测为阳性,阳性率达38.22%,其中母猪粪便的阳性率为40.74%,4～9周龄猪的粪便阳性率为35.42%,11～20周龄猪的粪便阳性率为37.5%,20周龄之后的猪粪便阳性率为52%。可见海南省部分地区猪场都存在胞内劳森氏菌的感染情况。 相似文献
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针对江西某猪场肥猪出现血便症状,取病变肠组织提取DNA,采用猪胞内劳森菌荧光定量PCR试剂盒检测,并对PCR扩增产物进行序列测定和分析,结果表明,其与胞内劳森菌参考序列(AM180252.1和CP004029.1)同源性为100％.同时采集7个猪场的正常猪群粪便通过猪胞内劳森菌的荧光定量PCR检测方法进行检测,结果显示,猪增生性肠炎在各猪场的感染率为16.7％～40％,平均感染率为30.06％. 相似文献
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为了建立用于检测导致猪增生性肠炎(PPE)的胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)的荧光定量PCR方法,依据Gen Bank中登录的LI基因组asp A序列,应用分子生物学软件优化设计1对特异性引物,经PCR扩增出300 bp的目的片段。产物经回收与p MD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR-Green I荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性试验、特异性试验和重复性试验。结果显示:建立的检测方法标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,r2=0.997 9,产物TM在85.0~85.3℃之间,灵敏度为17.5个拷贝/μL,特异性和重复性较好,可用于临床PPE的诊断。本试验成功建立了检测PPE的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法,为LI的早期鉴别诊断以及PPE的致病机理研究提供了技术支持,也为PPE分子诊断试剂盒的研制奠定了技术基础。 相似文献
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为建立胞内劳森菌特异性抗体检测方法,将密码子优化合成的胞内劳森菌表面蛋白LsaA的编码基因克隆于pET32a(+)载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。用纯化的重组LsaA蛋白作为包被抗原,通过一系列条件优化,建立了检测胞内劳森菌抗体的间接ELISA方法。结果显示:该方法可以特异地检测抗胞内劳森菌抗体,与大肠杆菌、猪霍乱沙门菌、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒等常见猪腹泻病原的抗血清均无交叉反应。来自PCR检测粪便呈胞内劳森菌阳性猪的血清,用所建立ELISA检测均为胞内劳森菌抗体阳性。该方法具有较好的敏感性和重复性,阳性血清经过1∶800稀释检测结果仍为阳性,批内和批间重复试验的变异系数分别为0.352%~2.752%和0.877%~3.000%。应用建立的ELISA方法对河南省部分地区猪场胞内劳森菌的感染情况进行了血清流行病学调查,结果显示被检地区猪场均存在不同程度的胞内劳森菌抗体阳性,阳性率在13.3%~57.1%,平均阳性率为30.6%。结果表明,本研究所建立的ELISA方法可以用于胞内劳森菌抗体的检测,为胞内劳森菌感染的监测和流行病学调查提供了方法。 相似文献
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鸭圆环病毒病给养鸭业造成严重的经济损失,鉴于此,本研究根据GenBank登录的鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)保守区基因组序列(登录号:NC_005053.1),设计合成内、外2对引物,通过PCR反应条件的优化,建立了检测DuCV的巢式PCR检测方法。该方法对鸭病毒性肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭细小病毒、新城疫病毒的扩增结果均为阴性;第1轮扩增的灵敏度为10 pg,第2轮扩增的灵敏度为0.1 pg,通过巢式PCR,敏感性提高了100倍。本研究建立的巢式PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,可以准确快速的用于鸭圆环病毒的病原检测。 相似文献
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根据GenBank上发表的猪附红细胞体16S rRNA基因序列(登录号U88565)设计合成2对引物,建立了猪附红细胞体单管巢式PCR诊断方法,经酶切分析、单管巢式PCR进一步鉴定后进行序列测定,并与血涂片染色镜检、常规PCR进行了比较。结果:扩增的猪附红细胞体基因序列与GenBank中发表的猪附红细胞体基因序列(U88565)同源性为96%;特异性试验表明,设计的引物不能扩增弓形虫、链球菌、大肠杆菌、葡萄球菌及羊附红细胞体等病原体;敏感性试验表明,单管巢式PCR诊断方法最低能够检测出0.116 fg的标准模板DNA。通过对75份血液样本的检测表明,建立的单管巢式PCR方法明显优于血涂片染色镜检法及常规PCR方法,具有较高的敏感性和实用性。本试验建立的单管巢式PCR诊断方法具有特异、敏感、实用等优点,为猪附红细胞体的检测提供了一种新型、可靠的诊断技术。 相似文献
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对伪狂犬病病毒(PRV)国标PCR方法进行优化,建立一种高灵敏度的套式PCR方法。根据伪狂犬病病毒gD基因序列,设计并合成了2对引物,通过反应体系和条件的优化建立套式PCR方法。通过灵敏性试验、特异性试验、病料检测对比试验等验证建立方法的适用性。结果表明,建立的方法检测伪狂犬病病毒DNA的极限为2.6×10-7 ng/mL,灵敏度比国家标准方法提高了1 000倍,从疑似PRV感染组织病料中能大幅度提高阳性检出率。本研究成功建立了一种灵敏度高、特异性好的快速检测猪伪狂犬病病毒的套式PCR检测方法。 相似文献
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为建立一种更加准确、敏感的猪附红细胞体检测方法,本试验根据猪附红细胞体特异的DNA序列(AJ504999)设计2对巢式PCR引物,建立了巢式PCR检测方法。筛选该检测方法的最佳反应条件,并进行了特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的巢式PCR对猪附红细胞体基因组DNA能扩增出特异性片段,而对弓形虫、链球菌、牛瑟氏泰勒虫、牛附红细胞体基因组DNA扩增反应结果均为阴性;DNA最低检测量为0.124 fg/μL;通过对55份临床样本的检测,该巢式PCR较常规PCR的阳性检出率高23.7%。本试验为猪附红细胞体病的诊断提供了一种更为特异、敏感的检测技术。 相似文献
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YU Jing CHEN Yan-yong HE Xiao-jiang DAI Bing ZHAO A-yong WANG Xiao-du SONG Hou-hui 《中国畜牧兽医》2015,42(12):3173-3178
Porcine circovirus type 2 (PCV2) caused significant economic losses of swine industry,it's very important to establish a economy and rapid detection method.To strengthen the prevention and control of porcine circovirus disease,rapid and high sesitive detection method of PCV2 was established using nested PCR.According to PCV2 ORF2 gene conservative region,we designed two pairs of nested PCR primers,constructed ORF2 gene recombinant plasmid for standard template and optimizated the PCR reaction conditions to establish nested PCR detection method of PCV2 and detect the clinical samples of pig farms.Our results showed that the sensitivity and repeatability of this method were very high,the minimum detection level was 10 copies/μL and detection rate of clinical samples was 97.3%.In brief,the established nested PCR detection method of PCV2 in this study provided powerful means for quick and efficient detection of PCV2,and prevention and control of porcine circovirus disease in the swine industry. 相似文献
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猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)给养猪业造成了重大的经济损失,建立经济、快速的检测方法尤为重要。本研究旨在利用巢式PCR技术,建立高灵敏度PCV2检测平台,以加强对猪圆环病毒病的防控。根据PCV2 ORF2基因保守区,设计内、外2对巢式PCR引物,通过优化PCR反应条件,建立巢式PCR检测方法,并对猪场临床样本进行检测。结果显示,本研究建立的巢式PCR检测方法灵敏度高、重复性强,最低检出量为10拷贝/μL,检出率达97.3%。本研究建立的巢式PCR检测方法为快速、高效地检测PCV2以及为猪圆环病毒病的防控提供有力手段。 相似文献
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本试验根据GenBank中登录的禽白血病病毒(ALV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为478 bp,内部引物的扩增片段大小为314 bp,建立了适合ALV快速检测的套式PCR方法(nested-PCR)。采用该方法对ALV毒株进行了检测,试验结果表明,能扩增到314 bp的条带,禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒、禽网状内皮增生病病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1次扩增的敏感性是100 pg,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高105倍。所建立的套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于禽白血病病毒(ALV)的临床诊断和分子流行病学调查等。 相似文献
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本试验根据GenBank中登录的禽传染性贫血病毒(CAV)基因序列,设计合成2对引物,外引物的扩增片段大小为485 bp,内引物的扩增片段大小为297 bp,建立了适合CAV快速检测的套式PCR方法(nested PCR),并采用该方法对CAV阳性毒株及临床病料进行了检测。结果显示,该方法能扩增到297 bp的条带,禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、禽网状内皮增生病病毒、减蛋综合征病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1步扩增的敏感性是100 pg,第2步PCR扩增的敏感性是1 fg,敏感性提高了105倍。本研究建立的CAV套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于CAV的临床诊断和分子流行病学调查等。 相似文献
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The aim of the present study was to evaluate the effect of oral vaccination against Lawsonia intracellularis (LI) on growing-finishing pig's performance. In a large Hungarian growing-finishing pig production unit, pigs with positive LI status were randomly divided into 2 groups and treated as follows: Group one: growing pigs (n = 4112) were LI vaccinated with an avirulent oral live vaccine (Enterisol Ileitis Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc., St. Joseph, USA). Group two: growing pigs (n = 4188 pigs) have not received LI vaccination. Culling and mortality rates, reasons for culling or mortality, and average daily weight gain were evaluated. Porcine proliferative enteropathy (PPE) caused culling and mortality rates were lower (0.2 % vs. 14.9 %, P < 0.001), and vaccinated pigs had lower none-PPE caused culling and mortality rates compared with the non-vaccinated ones (1.4 vs. 2.6 %, P > 0.05). While systemic infections and social stress or cannibalism related culling or mortality were significantly (P < 0.05) lower in vaccinated than in non-vaccinated pigs, reasons for culling or mortality due to non-LI caused diseases were non-significantly different between the vaccinated and non-vaccinated pigs. Average daily weight gain was higher (P < 0.05) in the LI vaccinated group of animals compared with the non-vaccinated ones (780 +/- 45 g vs. 660 +/- 71 g). The present results indicate that that LI vaccination does not only prevent PPE, but might result in more resistance and tolerance against other infectious and management caused losses. 相似文献