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【目的】获得转EGFP基因神经干细胞并监测其自我更新、增殖和多向分化潜能;通过用EGFP对神经干细胞进行标记和体外追踪实验,为EGFP作为示踪标记对神经干细胞进行体内移植研究奠定基础。【方法】利用神经干细胞培养技术体系,从胎龄30 d猪胎儿脑组织中分离培养神经干细胞,通过脂质体介导转染技术,将EGFP基因导入神经干细胞,诱导转基因神经干细胞贴壁分化,观察其体外增殖、分化特点。采用RT-PCR技术检测干细胞和分化细胞表面标志或相关基因。【结果】成功分离培养出神经干细胞,获得转EGFP基因神经干细胞,神经干细胞在表达EGFP的同时仍具有多向分化潜能。神经干细胞中Nestin表达强阳性,NogoA、DCX、CyclinD2、CD133、Hes1、Oct4、CD-90、Nanog和Sox2表达阳性;体外诱导的神经干细胞可以分化为星形胶质细胞(表达GFAP)、少突胶质细胞(表达GalC)和神经元细胞(表达NF、NSE和MAP2);能分化为脂肪细胞(表达LPL和PPARγ-D)、成骨细胞(表达Osteonectin和Osteocalcin)、肌细胞(表达myf-5、myf-6和myoD)、内皮细胞(表达CD31、CD34、CD144和eNOS)和软骨细胞(表达COL2A1)。【结论】从猪胎儿大脑组织分离神经干细胞具有可行性和有效性,转EGFP基因神经干细胞具有自我更新、增殖和多向分化潜能,可以用EGFP对神经干细胞进行标记、追踪,作为示踪标记进行神经干细胞体内移植研究。 相似文献
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《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2015,(4)
采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等方法对海洋放线菌Streptomyces sp.WQ-2固体发酵产物的化学成分进行分离纯化,并利用质谱、核磁共振谱及文献比对方法鉴定化合物的结构。结果表明:从Streptomyces sp.WQ-2固体发酵产物中分离得到5个化合物,分别被鉴定为D-阿洛醇(1)、胡萝卜苷(2)、5-oxo-pyrrolidine-2-carboxylic acid(3)、麦角甾醇(4)和lumichrome(5)。其中,化合物1、3和5首次从Streptomyces sp.发酵产物中分离获得。 相似文献
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雷公藤内生真菌的分离鉴定及抗肿瘤活性菌株筛选 总被引：2，自引：0，他引：2
目的:从雷公藤根(Tripterygium wilfordii)茎及叶中分离鉴定内生真菌,并对其发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。方法:采用微生物纯化方法分离雷公藤植物的内生真菌,根据菌落形态和显微特征对菌株进行分类鉴定。选用HCT-8(人结肠癌细胞)、Bel-7402(人肝癌细胞)、BGC823(人胃癌细胞)、A549(人肺癌细胞)为指标,采用MTT法对发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。结果:从雷公藤不同器官中分离得到64株内生真菌,经形态观察鉴定为3目,5科,11属。其中5株内生真菌发酵产物对不同肿瘤细胞具有显著选择性细胞毒作用。结论:雷公藤内生真菌种类多样,具有很好的研究和应用价值。 相似文献
4.
目的观察划痕损伤对大鼠脑皮层星形胶质细胞NF-B表达及自噬、凋亡和坏死的影响。方法建立SD大鼠脑皮层星形胶质细胞划痕损伤模型,用NF-B抑制剂吡咯醛二硫氨基甲酸（PDTC）干预48 h,分别用流式细胞术、免疫荧光法、Western blot检测不同时间点（1、6、12、24、48 h）星形胶质细胞凋亡、坏死及NF-B p65蛋白、自噬蛋白LC3Ⅱ表达。结果星形胶质细胞NF-B蛋白表达在划痕损伤后1 h开始增多,24 h达高峰,凋亡、坏死及LC3Ⅱ表达均随时间推移有不同程度升高（P〈0.01）。PDTC处理后,上述变化均有不同程度的抑制（P〈0.01）。结论划痕损伤后可激活脑星形胶质细胞NF-B表达、自噬、凋亡和坏死。 相似文献
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为了探讨神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)在体外培养中的生物学特性,研究不同细胞因子对NSCs分化的影响,试验对大鼠胎儿神经干细胞进行了分离培养,并研究了10,50和100 ng/mL的神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain derived neruotrophic factor,BDNF)和胶质源性神经生长因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对NSCs的定向诱导分化作用。结果表明,大鼠胎儿NSCs可在体外增殖并形成典型的神经球,指数增长期在传代后的第4~5天;10和50 ng/mL的NGF、BDNF和GDNF对NSCs的诱导分化作用不明显,100 ng/mL的NGF、BDNF和GDNF可诱导NSCs分化为神经元或胶质细胞。说明NGF和BDNF可诱导NSCs向神经元方向分化,GDNF诱导其向胶质细胞分化。 相似文献
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《湖北农业科学》2018,(22)
对海绵共附生真菌FWZ0415进行固体发酵培养,并对其发酵培养物的次级代谢产物进行分离纯化和结构鉴定等方面的研究。运用常压硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱(Sephadex LH-20)和半制备高效液相色谱(HPLC)等手段,从该菌株固体发酵培养物的提取物中分离纯化得到两个化合物,并运用核磁共振1H NMR、13C NMR等手段鉴定这两个化合物的结构为violaceol-I和violaceol-II。测试这两个化合物对肿瘤细胞系K252、MCF-7、SGC7901的细胞毒性,violaceol-I未见显著的细胞毒性(IC_(50)30μmol),violaceolII对3株肿瘤细胞系的IC_(50)分别为16.7、16.3、15.8μmol。 相似文献
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为探究防风内生真菌DL02次生代谢产物的结构与活性,采用形态学特征和ITS序列鉴定菌株,利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析和重结晶等方法对该菌株的发酵产物进行分离和纯化,并结合所得化合物的理化性质和波谱数据鉴定其结构,通过最小抑菌浓度（MIC）对其次生代谢产物进行活性测试。结果表明,菌株DL02为裂褶菌（Schizophyllum commune Franch.）,从其发酵产物中分离得到7个化合物,分别为烟酸（1）、丁二酸（2）、麦角甾醇（3）、22E-5α,8α-桥二氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇（4）、色胺酮（5）、lawsaritol A（6）、胡萝卜苷（7）,其中化合物6为首次从真菌发酵产物中分离得到,化合物5有很好的抑菌活性,其中对大肠杆菌的MIC值为3.9 μg·mL-1。 相似文献
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《江苏农业科学》2017,(5)
研究戴氏虫草菌丝体抑制肿瘤细胞增殖活性有效部位的化学成分及其抑制肿瘤细胞活性。采用液体深层发酵制备戴氏虫草菌丝体,MTT法筛选其抑制肿瘤细胞增殖活性的有效部位,反复正相柱层析,Sephadex LH-20等方法分离纯化其有效部位中的化学成分,利用EI、ESI及1D-NMR等技术对其结构进行鉴定;并研究他们对肿瘤细胞增殖的抑制活性。结果显示,戴氏虫草菌丝体石油醚、乙酸乙酯萃取部位为抑制肿瘤细胞增殖活性部位,并从中分离得到6个化合物,分别为反式-16-十八碳烯酸(化合物1)、壬二酸(化合物2)、5α,8α-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(化合物3)、亚油酸甲酯(化合物4)、亚油酸(化合物5)和十七-烷醇(化合物6)。活性检测表明,化合物2对舌癌Tca-8113细胞增殖具有较高的抑制活性,IC50值为31.90μmol/L,化合物3对乳腺癌MDA-MB-435细胞和BT474细胞具有较高的细胞增殖抑制活性,IC50值分别为25.57、26.31μmol/L。从戴氏虫草菌丝体抑制肿瘤细胞增殖的活性部位中分离到6个化合物,化合物1~2、4~6为首次从该菌丝体中分离得到。化合物2、3分别选择性地对Tca-8113细胞和MDA-MB-435细胞、BT474细胞有较强的细胞增殖抑制活性,可能为戴氏虫草菌丝体抑制肿瘤细胞增殖的有效成分。 相似文献
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三尖杉内生真菌S19次生代谢产物的结构与活性 总被引：1，自引：0，他引：1
为探明三尖杉内生真菌S19的次生代谢产物的结构与活性,采用形态学特征和ITS序列鉴定菌株,利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析和重结晶等方法对该菌株的发酵产物进行分离、纯化,并结合所得化合物的理化性质和波谱数据鉴定其结构,通过测试菌对其次生代谢产物进行活性测试。结果表明：菌株 S19为黄曲霉（Aspergillus flavus ）,从其发酵产物中分离得到6个化合物,分别为5-羟甲基呋喃-3-羧酸（1）、麦角甾醇（2）、β-谷甾醇（3）、豆甾-7,22-二烯-3β,5α,6α-三醇（4）、胶霉毒素（5）和丁二酸（6）。黄曲霉（S19）可以大量产生5-羟甲基呋喃-3-羧酸（1）。化合物1对大肠杆菌抑菌活性较好,其 MIC 值为15．6μg／mL;化合物5对测试菌均有很好的抑菌活性。 相似文献
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【目的】研究紫苏内生真菌Penicilliumsp.12Y25的化学成分及其抑菌活性,为开发新型天然药物提供参考。【方法】以分离自山西太原健康紫苏茎秆的内生真菌为研究对象,采用硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱层析等分离手段和现代光谱学技术,对其液体发酵产物的乙酸乙酯提取物进行了分离和结构鉴定;采用菌丝速率法,测试了分离化合物对番茄灰霉病菌、西瓜枯萎病菌和小麦赤霉病菌等植物病原菌的抗菌活性。【结果】从紫苏茎秆内生真菌Penicilliumsp.12Y25发酵产物的乙酸乙酯提取物中分离鉴定了10个化合物,分别为麦角甾醇过氧化物麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮、9(11)-去氢麦角甾醇过氧化物、22E,24R-7,22-麦角甾二烯-3β,5α,6β-三醇、22E,24R-7,22-麦角甾二烯-3β,5α,6β,9α-四醇、麦角甾醇、单油酸甘油酯、α-亚麻酸、对甲氧基苯乙酸和对氨基苯乙酸,均为首次从该菌种中分离得到,其中22E,24R-7,22-麦角甾二烯-3β,5α,6β-三醇和22E,24R-7,22-麦角甾二烯-3β,5α,6β,9α-四醇对番茄灰霉菌和西瓜枯萎菌有中等强度的抑制活性。【结论】紫苏内生真菌Penicilliumsp.12Y25化学成分多样,部分化合物具有植物病原菌抗菌活性。 相似文献
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本文研究乳酪蛋白源抗高血压活性肽(Antihypertensive peptides of casein)的制备及其在体内与体外对高血压的影响.乳源酪蛋白酶解产物经过大孔树脂DA201C脱盐处理,并采用RP-HPLC的分离纯化,检测了脱盐酶解产物与活性肽产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性,并用活性肽产品与酶解物灌胃SHR,观察SHR血压的影响.结果显示,活性肽(02mg·mL-1)与酶解产物(1 mg·mL-1)对ACE的活性有很强的抑制作用,抑制率分别为75.5%、80.1%;活性肽(5 mg·kg-1)与酶解产物(500mg·kg-1)均对自发性高血压大鼠(SHR)有较显著的降血压作用. 相似文献
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【目的】探讨长春碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(VLB-PBCA-NP)对正常细胞的毒性及其急性毒性。【方法】采用MTT法并结合形态学观察,比较了VLB-PBCA-NP和VLB原料药对原代大鼠星形胶质细胞和小鼠成纤维细胞L929的毒性;用相同剂量的VLB-PBCA-NP和VLB原料药溶液对小鼠进行尾静脉注射,每日观察小鼠死亡情况,并计算半数致死量(LD50)。【结果】在质量浓度为0.5~50 ng/mL时,VLB-PBCA-NP和VLB原料药对星形胶质细胞增殖抑制率的影响无显著性差异,当质量浓度达到500和5000 ng/mL时,VLB-PBCA-NP对大鼠星形胶质细胞的毒性显著低于VLB原料药(P<0.05)。5000 ng/mL的VLB-PBCA-NP对小鼠成纤维细胞L929的毒性为3级,极显著降低了VLB原料药的毒性(P<0.01)。VLB-PBCA-NP和VLB原料药的LD50分别为26.38和22.7mg/kg,前者较后者提高了16.21%。【结论】VLB-PBCA-NP对小鼠的急性毒性和对非肿瘤细胞的毒性均显著低于VLB原料药。 相似文献
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华中五味子藤茎化学成分及其抗氧化活性 总被引：1，自引：0，他引：1
以华中五味子藤茎为材料,采用硅胶柱层析、MCI树脂柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析等方法,分离鉴定所得化合物的结构,采用ABTS方法评价其抗氧化活性,以全面了解华中五味子的化学成分,明确其藤茎中药效成分及活性作用。结果表明:1）从藤茎乙酸乙酯萃取部位中分离得到7个化合物,分别鉴定为胡萝卜苷(1)、pinobatol (2)、Matairesinol 4′-O-glucoside (3)、(-)-secoisolariciresinol-O-a-L-rhamnopyranoside (4)、(-)-secoisolariciresinol 9-O-α-L-arabinopyranoside (5)、(-)-儿茶素 (6) 和异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(7);2）化合物2~5为首次从该属植物中分离得到;3）化合物2~7清除ABTS自由基IC50值分别为14.43、13.45、7.39、3.84、1.88、14.11 μg·mL-1;化合物4~6抗氧化活性与阳性对照品相当。 相似文献
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[目的]从蛇足石杉体内分离筛选出具有体外抑制乙酰胆碱酯酶活性的内生真菌。[方法]取野外采集的蛇足石杉的叶、茎和根进行表面消毒后接种于PDA培养基,分离出内生真菌后进行摇瓶发酵,超声提取其发酵产物,以DTNB法检测其发酵产物在体外抑制乙酰胆碱酯酶的活性。[结果]从根、茎、叶中分离得到194株内生真菌,在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中发酵后,对内生真菌发酵提取液进行体外AChE抑制活性检测;共有31株内生真菌显示出体外AChE抑制活性,抑制活性较强的有13株,抑制率在50.2%～80.5%。其中从蛇足石杉茎部位分离得到9株,叶部位分离得到4株。[结论]从蛇足石杉体内可分离出内生真菌,该内生真菌的发酵产物在体外有较强的抑制乙酰胆碱酯酶活性,这可能是寻找乙酰胆碱酯酶抑制药物的有效途径之一。 相似文献
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以青岛海域野生牡蛎为原料,采用菌丝尖端切割法分离获得内生真菌,采用形态学和18S rDNA对其进行鉴定,并对其进行种属分类。结果表明从牡蛎中共分离得到13株真菌,经鉴定这13株真菌全部属于子囊菌门(Ascomycetes),其中7株为枝孢霉属(Cladosporium),是牡蛎内生真菌的优势菌属,占分离真菌总数的53%,另外青霉属(Penicillium)两株,节菱孢霉(Arthrinium)、蜡蚧菌属(Lecanicillium)、链格孢霉属(Alternaria)和黑团孢属(Periconia)的菌株各1株。对分离得到的牡蛎内生真菌进行体外抗阿尔茨海默病活性筛选,其中5株真菌发酵产物兼具抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)和抑制β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)聚集的活性。为进一步开发利用,采用单因素结合响应面方法对活性菌株ML3发酵条件进行了优化。结果表明：最佳发酵条件为发酵温度28℃,发酵时间12天,种子液接种量10%。在此条件下,次生代谢产物AChE抑制率和Aβ1-42相对抑制率分别为57.65%和52.43%,比未优化前分别提高了9.35%和... 相似文献
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为进一步开发、利用和保护夹竹桃植物资源,对从秦岭山区夹竹桃茎中分离得到活性较高的内生真菌J14进行鉴定,并对其次生代谢产物的化学成分进行研究。采用形态学特征和ITS序列分析对菌株J14进行鉴定,利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、重结晶等方法对该菌株的发酵产物进行分离、纯化,根据化合物的理化性质和1 H-NMR、13C-NMR数据鉴定其结构,利用金黄色葡萄球菌、乳酸链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌以及小麦赤霉病菌、番茄灰霉病菌、烟草枯萎病菌、白菜黑斑病菌对所得化合物进行抑菌活性测试。结果表明:经形态学特征和ITS序列分析,鉴定菌株J14为链格孢霉(Alternariasp.SPS-04)。从其发酵产物中分离得到8个化合物,分别鉴定为交链孢甲醚(1)、交链孢酚(2)、malformin A1(3)、胸腺嘧啶(4)、尿嘧啶(5)、黄嘌呤(6)、赤藓醇(7)和甘露醇(8)。化合物3、4、5、6、7首次从链格孢属真菌发酵产物中得到。化合物1对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.95μg/mL,对番茄灰霉病菌的最小抑菌浓度为3.91μg/mL。 相似文献
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为从昆明山海棠根及茎中分离鉴定内生真菌,并对其发酵产物乙酸乙酯提取物进行体外抗肿瘤活性筛选,采用微生物纯化方法,从昆明山海棠植物中分离得到内生真菌, 根据菌落形态和显微特征对菌株进行分类鉴定。选用Bel-7402（人肝癌细胞）、A549（人肺癌细胞）、BGC823（人胃癌细胞）、HCT-8（人结肠癌细胞）为指标,采用MTT法对发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。结果表明,从昆明山海棠不同器官中分离得到37株内生真菌,经形态观察鉴定为2目、4科、8属。其中3株内生真菌发酵产物对不同肿瘤细胞具有显著选择性细胞毒作用。研究结果为国内首次从昆明山海棠植物中分离得到内生真菌,昆明山海棠内生真菌种类多样,具有潜在的研究和应用价值。 相似文献
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[目的]测定花脸香蘑[Lepista sordida（Schumach.Fr.）Singer]发酵产物的体外抗氧化及抗肿瘤活性。[方法]利用不同溶剂对花脸香蘑发酵次生代谢物质进行了分级分离提取,用二苯基苦味酰基苯肼（DPPH）法检测各级分离物的抗氧化活性;用噻唑兰（MTT）法检测其体外抗肿瘤活性。[结果]固体发酵花脸香蘑乙酸乙酯相抗氧化活性最高,其次为发酵液乙酸乙酯相;花脸香蘑发酵液乙酸乙酯相抗肿瘤活性最高,对人宫颈癌细胞Hela的IC50值为50μg/ml;菌丝提取物也表现出较强的抗氧化、抗肿瘤活性。[结论]该结果为进一步研究和开发利用花脸香蘑提供了新的科学依据。 相似文献
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黄槿植物的叶、树皮和花是中药黄槿的入药部位,具有抗菌、抗炎、抗肿瘤的药用价值。药用植物内生真菌与宿主植物在基因层面存在信息传递,会产生与宿主植物相同或相似的代谢产物,因此黄槿内生真菌次生代谢产物可能成为新型天然活性产物。从不同地点采集的半红树林植物黄槿中分离纯化出64株内生真菌并鉴定,通过固体发酵得到其次生代谢产物,采用牛津杯法检测内生真菌的粗提物对5种常见致病细菌的抑菌活性,后根据分离部位的不同构建系统发育树,并筛选确定3株具有强抑菌活性的菌株,用于后续次生代谢产物中化学成分的研究。 相似文献