Oral Inoculation with O157:H7(△hly△stx△toxB) Leads to Decreased Shedding in Goats after Challenge with Escherichia coli O157 :H7     

ZHANG Xue-han  HE Kong-wang  YU Zheng-yu  MAO Ai-hua 《华北农学报》2012,27(3)

为了明确O157:H7(△hly △stx△toxB)口服能否减少亲本株O157:H7在山羊体内的定殖.选用3月龄山羊,首先口服接种O157:H7(△hly△stx△toxB),分别于第7,14天再次口服接种亲本株O157:H7,监测亲本株O157:H7的排菌持续时间和排菌量.结果表明:O157:H7(△hly △stx△toxB)口服后第7天攻击亲本株O157:H7,第4天检测不到亲本株O157:H7的排菌；第14天攻击亲本株O157:H7,第9天检测不到亲本株O157:H7的排菌.直接口服亲本株O157:H7,排菌一直持续到第25天.口服O157:H7(△hly △stx△toxB)能够减少O157:H7在山羊体内的定殖,为研制EHEC O157:H7基因缺失疫苗奠定了基础.  相似文献   

出血性大肠杆菌O157: H7 Stx2B-Tir-Stx1B多价融合蛋白表达及免疫原性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

张雪寒  何孔旺  卢维彩  赵攀登  温立斌  李彬  郭容利  王小敏  倪艳秀  周俊明  俞正玉  茅爱华  吕立新 《华北农学报》2010,25(4)

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157∶ H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势.构建表达tir和stx1b的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stx1b亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-tir-stx1b重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右.重组蛋白纯化后皮下途径免疫小鼠,能够诱导高滴度(105)的IgG,鼻腔内途径免疫小鼠不仅能够诱导高滴度(104)的IgG,还能诱导高达102的IgA.二免后攻击50LD50的EHEC O157∶ H7,相对于对照组,免疫组粪便中排菌量明显降低、排菌时间明显缩短.结果表明:该融合蛋白免疫原性良好,并且由Tir、Stx2b和Stx1b三部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和志贺毒素(Stx)的抗体,在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值.  相似文献   

EHEC O157:H7二重PCR的建立及应用     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  叶青  吕立新  周俊明  姜平  张雪寒  李丽  李彬  栾晓婷  温立斌  王小敏  茅爱华  赵攀登  郭容利 《华北农学报》2011,(6):59-66

建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法.根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样...  相似文献   

大肠埃希氏菌O157∶H7三种标准中的检测方法比较     

《农产品加工．学刊》2016,(21)

在进行大肠埃希氏菌O157∶H7扩项过程中,对国内常用3个标准中的常规培养法进行比较分析。结果表明,不同温度培养的增菌肉汤均浑浊生长。大肠埃希氏菌O157∶H7显色培养基选择性较好,建议在日常检测工作中使用大肠埃希氏菌O157∶H7显色培养基,以提高区分度及检出率。同时,应用VITEK 2可以快速简便地鉴别目标菌。  相似文献   

环境因素对儿茶素抑制EHEC O157∶H7作用的影响     

张国鹏  王远亮 《农产品加工．学刊》2014,(9):13-15

采用活菌计数的方法研究儿茶素对EHEC O157∶H7的抑菌作用及培养温度、pH值、NaCl等因素对儿茶素抑菌活性的影响。结果表明,儿茶素对EHEC O157∶H7最小抑菌质量浓度为1.25 g/L;儿茶素对该菌株的抑制作用具有良好的稳定性,在37℃的中性环境中抑制作用较明显;同时,NaCl与儿茶素能起到协同作用,随着NaCl质量分数越大,儿茶素对EHEC O157∶H7的抑制作用越明显。儿茶素对EHEC O157∶H7的生长有较显著的抑制效果,且稳定性较好,这为儿茶素在食品和医药保健品方面的应用提供了理论依据。  相似文献   

牛乳中大肠杆菌O157:H7 PCR检测方法的建立     

《农产品加工．学刊》2016,(2)

为了建立牛乳中大肠杆菌O157∶H7的PCR快速检测方法,试验对大肠杆菌O157∶H7的rfbE基因序列进行分析,设计1对特异性引物,对大肠杆菌O157∶H7的DNA进行PCR扩增,结合特异性和灵敏性试验,实现对致病性大肠杆菌O157∶H7的检测;然后将不同含量的大肠杆菌掺入到牛乳中进行实际样品的检测。结果表明,该方法的特异性和灵敏性较好,能够检测到0.1 ng/μL的DNA模板,当牛乳中含有超过100 CFU/mL的大肠杆菌时,可利用该方法进行检测。  相似文献   

动物源大肠杆菌O157:H7多重PCR检测方法的初步研究     

陈雅君  胡慧  段志刚  崔保安  张龙现  孟振北  彭新然  陈丽颖  王亚宾 《华北农学报》2011,(5):87-91

为建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法,根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157:H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计2对特异引物,分别建立针对rfbE fliC基因的单一PCR方法;通过优化扩增条件,进一步建立可用于动物粪便检测的大肠杆菌多重PCR方法,并进行特...  相似文献   

肠出血性大肠杆菌O157:H7△hly△stx△toxB基因缺失株的构建     

张雪寒  何孔旺  赵攀登  栾晓婷  叶青  温立斌  倪艳秀  周俊明  李彬  王小敏  郭容利  俞正玉  茅爱华  吕立新 《华北农学报》2011,(5):76-82

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌.志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子.选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,...  相似文献   

抗香蕉枯萎病甲基营养型芽孢杆菌的鉴定及定殖     

周登博  陈宇丰  井涛  起登凤  张妙宜  冯仁军  王飞  谢江辉 《中国农学通报》2017,33(36):145-151

为系统评价分离自天然饼肥发酵液4-L-16菌株的抗真菌活性及定殖规律。以尖饱镰刀菌Race 4(Fusarium oxysporum f.sp.cubense Race 4)等9种病原菌为靶标菌株,采用平板对峙、含药介质法检测菌株抗真菌活性,并通过革兰氏染色、形态观察、生理生化特征和16S rDNA序列分析对其进行鉴定。结果表明:4-L-16菌株对9种植物病原菌具有广谱抗性,菌丝生长抑制率可达28.05%~76.07%,孢子萌发抑制率达24.44%~70.00%,其中对香蕉枯萎病菌的菌丝生长和孢子萌发抑制率分别为76.07%和70%,经鉴定该菌株为甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus。经抗生素标记,获得抗600μg/mL利福平的标记菌株,盆栽接种试验表明标记菌在香蕉根际土壤和植株体内具有良好定殖能力,接种第10天土壤中菌量达到最大值为6.67×10~6CFU/g,随时间延长,定殖数量逐渐降低,25天后数量趋于稳定,为2.05×10~6CFU/g。香蕉植株内定殖以根系最多,为4.38×10~3CFU/g。甲基营养型芽孢杆菌4-L-16菌株广谱抗真菌活性、良好的定殖能力,已成为香蕉枯萎病生物防治新的菌种资源。  相似文献