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【目的】探索微流控芯片电泳方法在PCR产物检测方面的效果,并建立针对番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV）的微流控芯片电泳检测方法,弥补琼脂糖凝胶电泳方法在试剂消耗、所用时间、安全性方面的缺陷。【方法】通过对TYLCV的基因组进行分析后,在该基因组中相对稳定的位置设计引物,同时兼顾引用已被研究者研究过的引物,对这些选择的引物进行特异性、稳定性、灵敏度等方面的验证,筛选出用于后续试验的引物。选择DNA标准物φX174/BsuR I(Hae Ⅲ) marker,分别进行琼脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳,对二者在耗材、耗时和灵敏度方面进行比较,确定微流控芯片电泳在核酸检测方面的应用价值。利用筛选出的其中1对引物对番茄叶片的实际样品进行PCR扩增,随后通过微流控芯片电泳对其进行检测,以此探讨微流控芯片电泳在病毒检测方面的检测效果。【结果】共筛选出14对TYLCV备用引物,其中2对引自文献,12对为本文设计,每对引物均可满足微流控芯片检测要求。选择其中1对引物TYLCV-T作为随后的研究对象。利用琼脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳对DNA标准物检测,结果表明微流控芯片电泳在耗时方面不足琼脂糖凝胶电泳的1/10,约为13 min,试剂消耗为琼脂糖凝胶电泳的1/8,检测灵敏度方面至少比琼脂糖凝胶电泳高103倍,根据DNA标准物原液浓度计算可知,微流控芯片电泳至少可准确检测到浓度为5×10-6 μg?μL-1的核酸样品。利用微流控芯片电泳对TYLCV-T扩增的TYLCV PCR产物进行检测,将检测峰值图与DNA标准物的峰值图时间比较,就可判断出产物峰的大小范围。【结论】筛选出的关于TYLCV的备用引物可作为进一步研究微流控芯片技术在该病毒检测方面的基础;通过将琼脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳进行比较,确立了后者在核酸检测方面的应用价值;通过微流控芯片电泳对TYLCV PCR产物的检测,建立了基于微流控芯片电泳的TYLCV快速检测方法,为TYLCV的快速检测提供新的技术支持。 相似文献
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PCR-DGGE技术用于猪场沼气池细菌群落分析的条件优化 总被引：2，自引：0，他引：2
本研究采用变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术研究猪场沼气池细菌群落,对基于16S rDNA V3区的PCR-DGGE电泳的最佳变性剂梯度范围、电泳时间、染色时间进行优化.研究结果表明,最佳变性剂梯度范围为35%～60%,电泳时间为12 h,SYBR(R)Green Fluorescent Dye染料的染色时间是30 min,优化后的PCR-DGGE确保了实验的准确性、灵敏度和可重复性.运用此优化后的PCR-DGGE技术对5个猪场沼液细菌群落进行了研究,获得了较丰富的多样性.该实验为深入研究畜禽养殖粪污治理的菌种筛选奠定了基础. 相似文献
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[目的]对枣树叶片蛋白质提取方法及其SDS-PAGE单向电泳条件进行优化。[方法]对枣树5种蛋白质提取方法和影响SDS-PAGE单向电泳的因素进行比较研究。[结果]改良丙酮沉降法提取出的蛋白质杂质较少,条带数量多且清晰,同时通过研究确定了一套适用于枣树蛋白检测的SDS-PAGE凝胶制备及电泳方法。[结论]该研究为进一步从分子生物学的角度研究枣树与枣疯病植原体的互作机制提供了技术的基础。 相似文献
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公鱼属(Hypomesus)是胡瓜鱼科的小型经济鱼类,分布于北太平洋两岸。在我国见于黑龙江水系和鸭绿江、大连等地。大连和黑龙江公鱼在形态上有很大差异,为知此差异是否属于本质上的,我们从生化角度采用了聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳方法对两地公鱼的肝酯酶同工酶进行了初步分析。 应用电泳法研究鱼类的同工酶进行鱼类的系统分类研究在国内及国外均有报导但用于研究不同种和种群的生化差异,则报导较少。 相似文献
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电泳谱带法在作物品种纯度鉴定上的应用研究 总被引：9，自引：0，他引：9
在１９８９～１９９５年期间，以玉米、高粱、番茄、西瓜、黄瓜、辣椒、白菜、萝卜、瓠瓜、甜瓜等１０种作物为试材，研究了ＥＳＴ，ＰＯＤ，ＡＥＳ和ＡＤＨ４种同工酶的ＰＡＧＥ电泳和ＩＥＦ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，ＰＡＧＥ蛋白质电泳谱带法在品种纯度鉴定上的应用。除甜瓜外，在其它作物上都取得了突破性进展，并对电泳应用技术进行研究和改进，在玉米上完成了联合应用试验已开始在生产上试用。 相似文献
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[目的]建立高效毛细管电泳测定鸡蛋中环丙沙星含量的方法。[方法]通过对电泳缓冲液类型、离子浓度和pH值、样品溶剂种类、分离电压、分离温度和冲洗程序等电泳条件进行考察,确立测定鸡蛋中环丙沙星的高效毛细管电泳法,并测定电泳参数对检测结果的影响。[结果]在检测波长为277 nm时,最佳电泳条件为:电泳缓冲液为30 mmol/LNa2B4O7-10 mmol/LKH2PO4溶液(pH值8.53),未涂层石英毛细管(50μm×47 cm,有效长度38.5 cm)为分离通道,分离电压为18 kV。在鸡蛋中对环丙沙星的检测结果显示,在最佳电泳条件下,环丙沙星在11 min内实现基线分离,在0.25～80.00μg/ml浓度范围内其浓度和峰面积呈良好的线性关系(R2=0.999 2),平均加标回收率为101.48%,平均RSD为2.466 4%(n=5)。[结论]该方法快速简便、灵敏度高、重现性好,可用于鸡蛋中环丙沙星含量的测定。 相似文献
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以松毛虫赤眼蜂为试验材料,对SSCP分子标记体系的电泳条件、温度、变性时间、上样缓冲液等诸多影响因素进行了研究。结果表明:4℃恒温,7W恒功率下,上样缓冲液中不添加甘油、用量为PCR产物体积的0.5~3.5倍,变性温度95℃或98℃,变性时间10~15min,电泳缓冲液为1×TBE,电泳16h,为SSCP分子标记体系最佳的条件组合。 相似文献
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电泳是指荷电的胶体颗粒在电场中的移动。1809年，一位俄国物理学家进行了世界上第一次电泳实验，这个早期实验为电泳理论和技术的发展及其应用奠定了基础。 相似文献
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隋德新 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》1986,(2)
如何长期保存好电泳后的凝胶标本,是许多实验人员面临的难题。由于聚丙烯酰胺凝胶强度低,脆性强,收缩性大,所以在电泳后,通常把凝胶标本浸于η％的醋酸溶液中保存。但这种保存法常导致标本变形、霉变或区带脱落。在长期实践中,我们研究出一种简便、快速的凝胶标本保存法,结果令人满意。材料与方法电泳:电泳在垂直板电泳槽中进行。凝 相似文献
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[目的]建立1种利用毛细管电泳快速、高效检测限制性内切酶酶切产物的方法。[方法]以甲基纤维素(MC)为筛分介质,用PBR322/BsuRⅠDNA Marker为试验对象,研究筛分介质浓度、pH值、毛细管柱温度和电场强度对毛细管电泳法分离小片段双链DNA的影响,寻求最佳电泳条件,并将此方法用于检测MspⅠ内切酶的酶切产物。[结果]MC浓度对双链小片段DNA的分离度有较大影响。随MC溶液浓度的增加,分离度呈先增后减的趋势。毛细管电泳的最佳条件为:MC浓度为2.0%,pH值为8.0,毛细管柱温度15℃,电场强度为275 V/cm。在此条件下,对MspⅠ内切酶的酶切产物进行检测,在20 min内检测到3个酶切片段。[结论]与平板凝胶电泳相比,运用毛细管电泳检测小片段限制性内切酶酶切产物更高效。 相似文献
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[目的]研究仿火箭电泳应用于单细胞凝胶电泳技术,为单细胞凝胶电泳技术寻求另一种可行的电泳方法提供参考。[方法]将仿火箭电泳方法应用于单细胞凝胶电泳技术,检验单细胞水平上的DNA损伤,并与传统的电泳方法比较,分析其优劣势。[结果]在细胞DNA未受损状态下,2种电泳方法所得的结果一致;而在细胞DNA受到损伤时,传统的电泳方法下一些细胞的慧尾发散出现漂移,仿火箭电泳方法得到的慧尾图像集中且未发生偏移。[结论]仿火箭电泳方法较传统的电泳方法存在一定优势。 相似文献
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[目的]研究仿火箭电泳应用于单细胞凝胶电泳技术,为单细胞凝胶电泳技术寻求另一种可行的电泳方法提供参考。[方法]将仿火箭电泳方法应用于单细胞凝胶电泳技术,检验单细胞水平上的DNA损伤,并与传统的电泳方法比较,分析其优劣势。[结果]在细胞DNA未受损状态下,2种电泳方法所得的结果一致;而在细胞DNA受到损伤时,传统的电泳方法下一些细胞的慧尾发散出现漂移,仿火箭电泳方法得到的慧尾图像集中且未发生偏移。[结论]仿火箭电泳方法较传统的电泳方法存在一定优势。 相似文献
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美凤蝶滞育期间水溶性蛋白的初步研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为深入了解美凤蝶滞育机理,利用毛细管区带电泳对滞育期间蛋白质特征进行了研究。电泳结果显示,滞育期间蛋白质吸收峰在25~42个之间, 3月中旬最少为25个,12月下旬最多为42,其余时期相近,在28~34个之间;同时,滞育期间蛋白质峰面积和迁移时间上存在差异。结果表明,滞育期间进行着一定程度的蛋白质代谢,其种类、数量和含量发生了变化,但除12月下旬变化较大外,其余时期相对稳定。 相似文献
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王金玉 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》1981,(3)
前人的研究结果表明:人血清、动物血清以及各种组织匀浆和浸液均可通过醋酸纤维薄膜电泳,区分和测定主要的蛋白质。但迄今为止,国内应用于鸡蛋浓蛋白的醋酸纤维薄膜电泳研究,尚未见报道。据悉,国外近年来电泳鸡蛋浓蛋白的方法,除采用盘状电泳、等电聚焦法电泳,偶尔也有醋酸纤维薄膜电泳、纸电泳法等。虽然,盘状电泳、等电 相似文献
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以油菜、大白菜、番茄茎叶中的脂酶、过氧化物同工酶和蛋白酶为研究对象,采用等电聚焦(IEF)电泳法,分别对3种蔬菜不同苗龄幼苗中酶的提取物电泳结果进行分析,结果表明,过氧化物同工酶等电聚焦电泳是鉴定大白菜、油菜、番茄品种真实性和纯度的理想方法。大白菜和番茄适宜凝胶支持物的pH范围为3.0～9.5,油菜为6.0～9.0。大白菜5～6 d、油菜3～4 d、番茄6～7 d的幼苗过氧化物同工酶的酶谱清晰度高,品种间的多态性能得到充分的体现,是鉴定种子真实性和纯度的适宜苗龄。 相似文献
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珍珠黄杨无性系过氧化物酶同工酶分析研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]利用过氧化物酶（POD）同工酶标记技术对珍珠黄杨无性系进行研究。[方法]以珍珠黄杨普通无性系和新整理出的5个无性系为材料,对其叶片提取液进行POD同工酶电泳。[结果]结果表明：珍珠黄杨各无性系经POD同工酶电泳后条带数较少,只有4条,多态性不强,但根据酶谱染色深浅仍能区别各个无性系。[结论]研究认为该技术在珍珠黄杨无性系鉴定中有一定的应用潜力。 相似文献
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大豆基因组DNA提取纯化方法研究 总被引：3，自引：0，他引：3
[目的]通过逐步富集的方法,提高大豆DNA的纯度和质量,为其他动植物基因组DNA的提取纯化提供参考。[方法]以梅桥大豆为试验材料,在CTAB法提取大豆基因组DNA的基础上,对大豆基因组DNA进行了纯化,对纯化后的DNA进行了光密度、紫外光谱、琼脂糖电泳和RAPD-PCR等的检测。[结果]光密度和紫外光谱检测表明A260/A230介于1.678~1.722,平均为1.697,A260/A280介于1.733~2.022,平均为1.844;琼脂糖电泳检测证实DNA分子量较大、完整性好、RNA残留少;RAPD-PCR检测得到了谱带清晰、多态性丰富的电泳谱带。DNA的得率为66.969μg/g。该试验的研究方法具有DNA质量高、操作简便、试验条件要求不高的特点。[结论]该方法可以应用于其它动植物的DNA提取纯化。 相似文献