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通过乙酸萘酯水解产物的显色反应，研究了ＤＮＡ分子二级结构对催化萘酯水解活性的重要性，结果表明：双链ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）分子具有良好催化乙酸－α－萘酯、乙酸－β－萘酯水解的活性，而单链ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）则完全不具备这种活性，ＤＮＡ完全酶解产物也不能使α－萘酯产生显色反应。因此认为，ＤＮＡ分子是具有催化活性的生物高分子。从ＤＮＡ二级结构角度探讨了其催化萘酯水解的反应机理。 相似文献
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DNA催化活性的研究 Ⅲ.多聚核苷酸的催化作用 总被引：1，自引：0，他引：1
以多聚腺苷酸（ｐｏｌｙＡ），多聚尿苷酸（ｐｏｌｙＵ）及其混合复性的ｐｏｌｙＡ·ｐｏｌｙＵ与乙酸－α－萘酯及坚牢蓝ＲＲ盐混合保温，研究了多聚核苷酸催化乙酸－α－萘酯水解的作用，结果表明：由ｐｏｌｙＡ·ｐｏｌｙＵ组成的双链ＲＮＡ具有与ＤＮＡ分子相似的催化活性，ｐｏｌｙＡ这一单链多聚物也能起催化作用，ｐｏｌｙＵ则没有这一功能。据此认为，核酸分子的催化活性与核糖２＇－位脱氧与否无关，而碱基的堆积为素酯分子的疏水奈环基团提供足够的疏水空间，则是催化活性所必须的。双链ＤＮＡ及双链ＲＮＡ都能满足这一条件，ｐｏｌｙＡ中嘌呤碱基堆积则刚能容纳下萘环，所以均能催化萘酯的水解；而ｐｏｌｙＵ中嘧啶碱基的堆积不足以容纳下萘环，因而不具备这一催化作用。 相似文献
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应用改进的十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）方法从感染柑速衰病毒（ＣＴＶ）强株系和弱株系的墨西哥酸橙病株中检测到一种相对分子质量约为１３０００的特异蛋白，而在健株中未能检测到，该蛋白泳谱带没有差异，应用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术进一步分析表明，这种蛋白不能ＣＴＶ特异的多克隆抗体１０５２和３ＤＦ１单克隆抗体反应，这暗示着该蛋白是墨西哥酸橙在ＣＴＶ侵染胁迫条件下编码产生的一种病程相关蛋 相似文献
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萘普生为水体中普遍存在的新型非甾体药物,属于典型PPCPs污染物。采用UV、H2O2、UV/H2O2为处理方法,HPLC为检测方法,研究低浓度萘普生废水的降解效果。结果发现,pH值对萘普生光解效果有直接影响,最佳pH值为4;在最佳pH值条件下,UV/H2O2协同系统对萘普生降解效果最为明显,120 W汞灯为光源照射50 min时,降解效果达到99%;UV法对萘普生降解有一定效果,300 W汞灯为光源照射40 min时,降解效果达到97.6%;H2O2对于萘普生的降解效果并无影响。 相似文献
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珍稀濒危植物绵刺克隆生长构型与资源利用方式关系的研究 总被引：7，自引：2，他引：7
绵刺是蔷薇科绵刺属植物，为阿拉善荒漠区特有植物。其具有独特的克隆生长构型，即同一植株同时具有两种典型的克隆生长构型；游击型克隆生长构型和密集型克隆生长构型，而成为研究克隆种群生态学代表性的材料。由于绵刺生存环境中资源异质性的广泛存在和干扰的随机发生，因而在不同的生态条件下两种克隆生长构型是可塑的，这种可塑性是绵刺对环境资源利用最优的进化对策。本文对不同干扰和不同资源的方差分析，得出绵刺在适应环境中所表现的觅食行为和风险分摊等生态对策，并对游击型和密集型及资源利用方式的定义进行修改和完善。 相似文献
6.
应用萘酯坚固蓝反应显色法对ＤＮＡ的酯酶催化活性进行了研究。结果表明，辣椒ＤＮＡ、鲱鱼精ＤＮＡ具有分解萘酯的活性；反应混合物中鲱鱼精ＤＮＡ浓度为０．００３４ｍｇ／ｍＬ时，ＤＮＡ仍有分解萘酯的活性；随着ＤＮＡ浓度增加，ＤＮＡ的催化活性增强。６种寡聚核苷酸均具有催化萘酯水解的能力，但活性强弱不同；４种ｄＮＴＰ均不能催化萘酯水解。双链ＤＮＡ、单链ＤＮＡ的显色反应完全来自ＤＮＡ的催化萘酯水解反应 相似文献
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为了制备可用于检测氟苯尼考的特异性多克隆抗体,采用戊二醛法合成氟苯尼考的人工抗原FFA－BSA、FFA－OVA、紫外分光光度计进行鉴定,用FFA－BSA免疫BALB／C雌性小鼠获得可用于检测氟苯尼考的特异性多克隆抗体,并用间接ELISA法对其进行特异性鉴定。结果显示：经过紫外扫描鉴定,成功合成了人工抗原合 FFA－BSA和FFA－OVA,偶联比分别为12∶1和11∶1。制备的抗体效价低于1∶32000,抑制率为50％（ IC50）时的氟苯尼考浓度为36．9 ng／mL。可见,本试验制备的氟苯尼考多克隆抗体具有较好的亲和力和高特异性,有良好的应用价值。 相似文献
8.
以戊二醛法制备Ｂｕｒｓｉｎ－ＫＬＨ，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞，以ＰＥＧ为融合剂，与ＳＰ２融合，用间接ＥＬＩＳＡ法筛选出与Ｂｕｓｉｎ－ＢＳＡ结合，不与ＢＳＡ结合的２Ｆ９－４克隆株克隆株，经鉴定，抗体属性为ＩｇＭ，Ｋ轻链。水溶性Ｂｕｒｓｉｎ可阻性２Ｆ９－４对鸡法氏囊的反应，切片标本经ＰＢＳ处理，反应性消失，免疫组织化学染色于法氏囊上获得特征阳性结果。 相似文献
9.
用维生素Ｅ－硒（ＶＥ－Ｓｅ）注射液、中草药１号、硫酸锌、牲血素、胸腺肽和左旋咪唑作免疫增强剂，采用β－微量鸡新城疫血凝抑制试验（ＮＤ—ＨＩ）、醋酸纤维薄膜电泳（测血清丙球蛋白γ－Ｉｇ）以及α－萘酯酶法（ＡＮＡＥ），检测了参试雏鸡的３种免疫学指标．结果表明：ＶＥ—Ｓｅ注射液对蛋用雏鸡的ＮＤ—ＨＩ抗体、γ－Ｉｇ和ＡＮＡＥ＋淋巴细胞均比对照组明显提高，差异极显著（Ｐ＜０．０１）．中草药１号具有与ＶＥ－Ｓｅ注射液相似的免疫增强效果．补锌组在４９日纷呈现良好的免疫增强作用（Ｐ＜０．０５）．补铁剂和胸腔肽只对γ－Ｉｇ有升高作用．左旋咪唑不产生明显的免疫增强效果． 相似文献
10.
应用萘酯坚固蓝反应显色法对ＤＮＡ的酯酶催化活性进行了研究。结果表明，辣椒ＤＮＡ、鲱鱼精ＤＮＡ具有分解萘酯的活性；反应混合物中鲱鱼精ＤＮＡ浓度为０．００３４ｍｇ／ｍＬ时，ＤＮＡ仍有分解萘酯的活性；随着ＤＮＡ浓度增加，ＤＮＡ的催化活性增强。６种寡聚核苷酸均具有催化萘酯水解的能力，但活性强弱不同；４种ｄＮＴＰ均不能催化萘酯水解。双链ＤＮＡ、单链ＤＮＡ的显色反应完全来处ＤＮＡ的催化萘酯水解反应。 相似文献
11.
R Goldman H I Silman S R Caplan O Kedem E Katchalski 《Science (New York, N.Y.)》1965,150(697):758-760
A stable papain membrane has been prepared on a collodion matrix by absorbing papain in a collodion membrane and then cross-linking the papain with bisdiazobenzidine 3,3'-disulfonic acid. The pH-dependence of the activity of the enzyme membrane on the low-molecular-weight substrate, benzoylarginine ethyl ester, was found to differ from that of crystalline papain; the activity was low in the neutral pH range where the native enzyme has its optimum and high at alkaline pH. This anomalous behavior is due to a lowering of the local pH within the membrane as a result of the release of acid by the enzymic hydrolysis of the ester substrate. 相似文献
12.
为制备M13噬菌体多克隆抗体,将噬菌体十二肽原始文库进行大量扩增,作为免疫原制备兔抗M13的多克隆抗体血清并进行间接ELISA鉴定。结果表明,该多抗效价达1 1 048 576,说明此多抗可与扩增噬菌体文库发生很好的抗原抗体反应。将制备的噬菌体M13多克隆抗体与商业化M13抗体水平比较,制备多抗与商业化M13抗体效果相当。本研究成功制备兔抗M13噬菌体多克隆抗体,为深入研究噬菌体展示技术提供了材料。 相似文献
13.
[目的]制备恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体。[方法]采用活性酯法合成恩诺沙星的人工抗原,并通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE电泳对其进行鉴定。利用免疫原(ENR-BSA)免疫新西兰大白兔,制备抗恩诺沙星的高亲和力和高特异性的多克隆抗体。[结果]恩诺沙星成功地偶联到载体蛋白上。通过动物免疫,获得了高效价的抗血清,最高效价达到1∶100 000,说明人工抗原成功地诱导机体产生免疫应答。[结论]恩诺沙星的人工抗原合成路线简单易行,可为进一步建立恩诺沙星的免疫检测方法奠定了基础。 相似文献
14.
分别自假产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes C2-1)和假单胞菌（Pseudomonas sp. 1-7）中克隆得到甲基对硫磷水解酶基因ophc2和ophc3,其编码甲基对硫磷水解酶OPHC2和OPHC3的氨基酸序列相似性达98.5%,仅5个氨基酸残基不同,但酶学性质差异很大,特别是对不同底物降解特性有很大差异。OPHC2对甲基对硫磷的催化效率是OPHC3的2.75倍,对乙基对硫磷的催化效率仅为OPHC3的12.9%。为了提高OPHC2对乙基对硫磷的降解活性,以OPHC3的序列为依据,针对5个不同的氨基酸设计正交实验,对OPHC2进行组合突变,最终获得了一个突变体P165S/A169V,对乙基对硫磷的催化效率是OPHC2的1.19倍,对甲基对硫磷的催化效率是OPHC2的1.36倍。 相似文献
15.
Solution conformation of valinomycin-potassium ion complex 总被引：4，自引：0，他引：4
The complete conformation of the valinomycin-potassium ion complex in methanol is presented. Extension from the reported secondary structure requires arguments and data relating to ester orientation, direction of coiling, side-chain orientation, and conformational stability. Conformation of the valinomycin-potassium ion complex provides a clear-cut example in which elucidation of conformation is sufficient to gain an understanding of molecular function which, in this case, is selective ion transport by a carrier mechanism. 相似文献
16.
通过制备兔抗鹿血和小鼠抗鹿血多克隆抗体,建立了以兔抗为包被抗体,鼠抗为检测抗体的鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法。采用方阵滴定法确定了抗原、抗体的最佳反应浓度,并对ELISA各反应条件进行优化。结果表明:兔抗最佳包被浓度为1∶8 000,鼠抗的最佳反应浓度为1∶2 000,最佳封闭时间为60 min。该方法对鹿血检测灵敏,可达3×10-4倍稀释度,且对马血、牛血、羊血、猪血的检测结果均为阴性,说明该方法特异性良好。 相似文献
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The enzymic nature of antibody catalysis: development of multistep kinetic processing 总被引：3，自引：0，他引：3
S J Benkovic J A Adams C L Borders K D Janda R A Lerner 《Science (New York, N.Y.)》1990,250(4984):1135-1139
Detailed kinetic investigations of a catalytic antibody that promotes the hydrolyses of an anilide and phenyl ester show that this catalyst uses a multistep kinetic sequence resembling that found in serine proteases to hydrolyze its substrates, although antibody was elicited to a single transition-state analog. Like the serine proteases the antibody catalyzes the hydrolysis reactions through a putative covalent intermediate, but unlike the enzymes it may use hydroxide ion to cleave the intermediates. Nevertheless, the antibody is a potent catalyst with turnover at higher pH values rivaling that of chymotrypsin. This analysis also reveals that turnover by the antibody is ultimately limited by product desorption, suggesting that improvements in catalytic efficiency may be achieved by judicious changes in the structure of the substrate, so that it is not superimposable on that of the eliciting hapten. 相似文献
18.
CcmK2蛋白是集胞蓝细菌PCC 6803羧酶体外壳蛋白的主要组分,在羧酶体的组装与功能行使方面扮演重要角色。为解析其功能,本研究构建了原核表达载体pET28a-CcmK2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有6个组氨酸标签的CcmK2重组蛋白。通过金属亲和层析技术,将CcmK2重组蛋白纯化后免疫家兔,制备抗CcmK2多克隆抗体。基于Dot blot分析的结果显示:该多克隆抗体能够有效检测蓝细菌CcmK2蛋白;进一步的抗体特异性分析显示,CcmK2多克隆抗体与其他羧酶体外壳蛋白存在微弱的抗原抗体反应;最后,通过Western blot分析证实该多克隆抗体能够特异而灵敏地检测集胞蓝细菌PCC 6803中CcmK2的丰度。 相似文献
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LIU Zhi-da XING Wan-jin WANG Lian-qing LV Li-xia 《中国农业科学(英文版)》2010,9(4):605-613
Izumol is a novel member of the immunoglobulin superfamily locating on sperm, and is indispensable for sperm-egg fusion. According to its immunoglobulin-like domain in the extracellular region, Izumol was fractionated into 6 fragments （F0-F5） which were ligated with pGEX-4T1 to construct the prokaryotic expression vectors pGEX-Fn. The recombinant plasmids were transformed into Escherichia coli BL21 （DE3） and the GST-Fn fusion proteins were expressed successfully by induction with IPTG. GST-F0, a recombinant fusion protein of GST with the full length of extracellular region of mature cashmere goat Izumol, was purified by polyacrylamide gel slicing method and was used as an antigen to immunize the Kunming mouse to generate anti-GST-Izumol ascetic polyclonal antibody with intraperitoneal injection of S 180 cells. Subsequently, the anti-GST-Izumol polyclonal antibody was purified with miscellaneous antigen by glutaraldehyde cross-linking method. Western blotting analysis showed that the purified ascetic polyclonal antibody had high affinity to all 6 GST-Izumol fragment fusion proteins. Immunohistochemical analysis with this antibody displayed that the cashmere goat Izumol proteins were at the equatorial segment of sperm head surface. These results indicate that this polyclonal antibody has high specificity and lays the foundations for further study on the expression pattern of Izumol in cashmere goat testis and binding abilities of each extra-membrane fragment of Izumol to the egg surface. 相似文献
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Libin WEN Fengzhi WANG Kongwang HE Yanxiu NI Xuehan ZHANG Rongli GUO Bin LI Xiaomin WANG Zhengyu YU Aihua MAO Junming ZHOU Lixin LU Jianping XIE 《农业科学与技术》2014,(2):187-190
Recently, a novel porcine circovirus-like virus P1 with a circular DNA genome of 0.648 kb was identified. P1 antigen was detected both in vitro and in vivo by synthetic peptide-derived polyclonal antibody-based immunochemistry. The designed peptides were synthesized by solid-phase technique, purified by high per-formance liquid chromatography, coupled to Keyhole limpet hemocyanin, and injected into rabbits to prepare polyclonal antibody. The emergence of positive cells revealed that synthetic peptide could elicit antibodies against P1 and viral protein could be synthesized. The polyclonal peptide antibodies described here was successfully ap-plied to immunochemical staining and proved helpful in diagnosing P1. 相似文献