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1.
甘薯羽状斑驳病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及特异抗血清的制备 总被引：12，自引：0，他引：12
根据已报道的甘薯羽状斑驳病毒（ＳＰＦＭＶ）外壳蛋白（ＣＰ）基因的核苷酸序列合成引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ的方法获得ＣＰ基因后,再将其克隆到原核表达载体ｐＥＴ３０ａ（＋）中。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,经ＩＰＴＧ诱导,ＣＰ基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得了高效表达。以含表达产物的凝胶为抗原,免疫家兔,制备了ＳＰＦＭＶ外壳蛋白的特异性抗血清。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和点免疫（Ｄｏｔｂｏ 相似文献
2.
拟南芥质膜水通道蛋白RD28保守区段在大肠杆菌中的表达及其抗体的制备 总被引：2，自引：0，他引：2
实验利用ＰＣＲ技术,从拟南芥原膜水旧白ＲＤ２８的ｃＤＮＡ中扩增了所有植物细胞质膜水通道蛋白保守区段（４２０ｂｐ）,并将其构入ｐＧＥＸ－ＫＧ。酶切、测序分析表明重组质粒ｐＧＥＸ－ＲＤ２８结构正确。０．１ｍｍｏｌ／Ｌ的ＩＰＴＧ可诱导表达分子量约４０ｋＤ融合蛋白ＧＳＴ－ＲＤ２８,该蛋白主要以非包涵体的形式存在。诱导表达后的菌体超声裂解液经谷胱甘肽活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析柱纯化得到了高纯度Ｇ 相似文献
3.
油菜波里马胞质雄性不育相关线粒体基因orf224在大肠杆菌中… 总被引：8，自引：0，他引：8
本研究设计合成引物，从油菜波里马胞质雄性不育系线粒体ＤＮＡ上扩增出可能与育性有关的ｏｒｆ２２４基因５＇端（Ａ片段）和３＇端（Ｂ片段）以及全长基因（Ｃ片段）片段，并分段克隆到ｐＢＶ２２０和ｐＧＥＸ－５Ｘ－１载体上，经序列分析证实，获得了编码２２４个氨基酸基因的各序列片段。各重组菌株诱导表达产物比较分析表明，只有ｏｒｆ２２４ ３＇端即Ｂ片段融合蛋白ＧＳＴ－Ｂ得到了高效表达，其它菌株在聚丙烯酰胺凝胶电泳 相似文献
4.
MBP-狂犬病毒NP融合蛋白在大肠杆菌中的表达及NP的纯化 总被引：2，自引：0，他引：2
将狂犬病毒核蛋白结构基因重组到原核表达质粒ｐＭＡＬ－Ｃ２Ｘ中,经ＩＰＴＧ诱导表达出的ＭＢＰ－ＮＰ融合蛋白分子量约９８ｋＤ;用支链淀粉琼脂糖凝胶亲和层析纯化得到电泳均一的融合蛋白,融合蛋白用因子Ｘａ裂解后,经Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析可将ＭＢＰ与ＮＰ分开,得到了电泳均一、分子量约５６ｋＤ的ＮＰ蛋白,经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析证实抗原性正确,为进一步利用ＮＰ蛋白制备抗体或单克隆抗体打下了基 相似文献
5.
ＮＤＶ北京强毒株Ｆ４８Ｅ９经ＳＰＦ鸡胚增殖,超速离心纯化,异硫氰酸胍法提取病毒ＮＡ后,用ＲＴ－ＰＣＲ扩增,得到其融合糖白基因。将扩增产物与ｐＧＥＭ＾Ｒ－Ｔ载体相连接转化,经过ＡｍｐＩＰＴＧ－Ｘｇａｌ（ＡＩＸ）平板筛选,ＨｉｎｄⅢ酶切及ＰＣＲ鉴定,初步获得了含Ｆ基因的阳性克隆。用渐近法对克隆片段进行全序列分析,证明得到了作长１７４４个核苷酸的ＮＤＶ Ｆ蛋白基因。 相似文献
6.
脑钠肽与谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的表达与分离纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
用ＰＣＲ技术扩增获得脑钠肽－９５ｃＤＮＡ,再由它获得脑钠肽－３８ｃＤＮＡ（ＢＮＰ－３８ｃＤＮＡ）选用融合蛋白表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ作载体,构建成谷胱甘肽巯基转移酶（ＧＳＴ）和ＢＮＰ－３８的融合基因,该基因在大肠杆菌ＪＭ１０９中表达的最佳体系是：以１：１０扩大培养４ｈ加入终浓度为０．５ｍｍｏｌ／Ｌ的诱导剂ＩＰＴＧ诱导培养４ｈ,诱导表达的融合蛋白量可达５６μｇ／ｍＬ,培养液,是国外文献的３．７３倍,用 相似文献
7.
马铃薯Y病毒普通株系外壳蛋白基因的克隆与原核表达载体的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究报道马铃薯Ｙ病毒普通株系外壳蛋白基因ｃＤＮＡ克隆,全序列分析及其原核表达载体构建的结果。从感染ＰＶＹ的烟草叶片中提取病毒粒体,ＳＤＳ－酚法提取病毒核酸。以所提核酸为模板,用一对ＰＶＰＣＰ基因引物进行ＲＴ－ＰＣＲ,扩增了０．８０ｋｂ的特异性核苷酸片段。该片段大小五国外报道的ＰＶＹ ＣＰ基因一致,将ＰＤＲ产物插入到克隆载体ｐＧＥＭ７Ｚｆ（＋）中转化大肠杆菌ＤＨ５α。 相似文献
8.
本研究利用表达油菜波里马胞质雄性不育相关线粒体基因ｏｒｆ２２４ ３＇端（Ｂ）片段的大肠杆菌，通过分级分离纯化得到了ＧＳＴ－Ｂ蛋白，并和亲和层析纯化的ＧＳＴ蛋白一起分别制备了抗血清。利用纯化的抗血清对在ｐＢＶ２２０和ｐＧＥＸ－５Ｘ－１系统表达的ｏｒｆ２２４各基因片段产物进行了分析，结果表明纯化的ＧＳＴ－Ｂ抗体具有ＯＲＦ２２４蛋白专一性，同时也证实了ｏｒｆ２２４全基因及其３＇端片段的表达。研究结果为进 相似文献
9.
表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2重组鸡痘病毒的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
含ＩＢＤＶ保护性抗原ＶＰ２的质粒,以ＳｐｈＩ消化,然后用Ｔ４噬菌体ＤＮＡ聚合酶将末端补平,产物纯化后再以ＳａｌＩ消化一次,经再次纯化后与ＳｍａＩ和ＳａｌＩ分步酶切的鸡痘病毒插入载体ｐＦＧ１１７５－１相连,使唤基因顺向插入到载体Ｐ７５启动子下游,得到含ＩＢＤ ＶＰ２基因的重组插入载体ｐＦＧ ＶＰ２。 相似文献
10.
通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增了新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８株核衣壳蛋白（ＮＰ）基因,并克隆到ｐＵＣＮＰ。应用分子克隆技术,将ＮＰ基因导入鸡痘病毒（ＦＰＶ）转移载体ｐＦＧ１１７５－１中Ｐ７．５启动子的下游,得到含ＮＤＶ ＮＰ基因的质粒ｐＦＧＮＰ１１７５－１。利用脂质体转染技术,将该质粒转染ＦＰＶ疫苗株２８２Ｅ４感染３－４ｈ的鸡胚成纤维细胞,采用蓝斑筛选方法纯化多次,得到稳定的重组Ｆ 相似文献