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提高农杆菌转化水稻频率几个因素的研究 总被引：13，自引：1，他引：13
以6个重要的籼稻和粳稻品种为材料,研究了影响农杆菌转化水稻频率的几个重要因素。结果表明,对于籼稻品种而言,CC培养基是愈伤组织的最适诱导培养基;添加1.0~2.0 mg/L ABA能有效地改善愈伤组织的质量;在继代培养基中添加山梨醇能改善愈伤组织的生长状态,降低愈伤组织的褐化。而对于粳稻品种来说,适宜的诱导培养基是NB培养基,添加ABA对愈伤组织的改善效果不明显,对于多次继代的愈伤可以适当增加蔗糖浓度以提高抗性愈伤率。此外,在筛选时期适当加大筛选压力,分化时去掉筛选压力,壮苗时加适当的选择压力,可提高转化率。在分化时,采用适宜的激素配比有利于提高分化率。应用所优化的农杆菌转化系统,获得了一些有价值的转化植株。 相似文献
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水稻成熟胚盾片诱导愈伤组织再生体系的建立 总被引：6，自引：0，他引：6
采用水稻成熟胚盾片诱导愈伤组织作为分化再生的外植体，通过优化激素组合和调节培养基渗透压，建立了适合水稻遗传转化的高效再生体系，将水稻成熟胚诱导愈伤组织分化再生的过程划分为3个不同时期，即成熟胚盾片愈伤组织诱导，胚性细胞诱导保持，胚性愈伤组织分化再生，以CultureI(LS 2,4-D2.0mg/L)诱导成熟胚盾片愈伤组织，愈伤组织剥离后接种于Culture II-3(LS 2,4-D 2.5mg/L 山梨醇3g/L)上诱导胚性愈伤组织，继代后接种于Culture Ⅲ-2(MS NAA 0.5mg/L 6-BA 1.0mg/L Kinetin 2.0mg/L 山梨醇8g／L）上分化成苗，培养结果表明，该再生体系所获得的胚性愈伤组织分化再生率均在60％－80％之间，利用本研究建立的高效再生体系建立水稻外源基因遗传转化系统，使转化过程中所得转化愈伤组织高效再生成苗，从而顺利获得转化植株，可以提高水稻外源基因转化的效率，为水稻品种的定向遗传改良提供优良的遗传转化技术体系。 相似文献
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橡胶树品种热研88-13易碎胚性愈伤组织的诱导及其植株再生 总被引：1，自引：0，他引：1
以高产优质橡胶品种热研88-13的幼嫩种子内珠被为外植体材料,对愈伤组织诱导培养基和继代培养基中的影响因素如植物生长调节剂的种类和浓度、钙离子浓度等进行了研究。经过连续6个月的继代选择培养,逐渐诱导出易碎的胚性愈伤组织,适宜的易碎胚性愈伤组织诱导培养基为:MH基本成分,添加0.5 mg/L KT,2.0 mg/L 2,4-D,11.0 mmol/L CaCl2,80.0 g/L蔗糖和2.0 g/L Phytagel。组织学切片证明长期继代培养的易碎胚性愈伤组织维持了胚性的状态。取继代培养2 a多的易碎胚性愈伤组织诱导体细胞胚的形成,得到了16 000多个体细胞胚。将这些胚进行进一步的转移培养,得到了115株再生植株。 相似文献
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通过继代培养提高橡胶树体胚诱导频率的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
橡胶树体胚诱导频率低、正常胚状体比例低是影响橡胶树花药培养的重要限制因子。组织切片结果显示:50 d的愈伤组织生长期实际上应划分为2个阶段:0~30 d为愈伤诱导阶段,30~50 d为胚性表达和愈伤增殖阶段,因此本试验以30 d的橡胶树花药愈伤组织为材料,通过继代培养基的正交筛选,探索通过继代培养提高橡胶树体胚分化频率的途径。试验结果显示:橡胶树初代花药愈伤组织经过优化后的继代培养基继代培养1次后,分化的胚状体是不继代培养分化胚状体数量的4.29倍,而其中正常胚状体的数量是不继代的2.4倍。继代培养基包含4种激素,以6-BA的影响最大,其次为KT。优化的愈伤继代培养基为改良MS培养基添加6-BA0.1 mg/L+KT 0.3 mg/L+3,4-D 0.3 mg/L+ABA 0.013 mg/L。与传统橡胶树花药再生体系相比,本试验增加了愈伤组织继代这一程序,并摸索了适宜的继代培养基配方,使花药再生体系更加符合实际花药培养发育的过程,以提高橡胶树胚状体分化频率,促进橡胶树体胚苗产业的发展。 相似文献
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提高水稻成熟种胚体细胞培养力 总被引：4，自引：0，他引：4
实验结果认为,水稻成熟胚是一种“竞争性”外植体。高浓度的脱落酸（ABA）能有效地抑制胚芽和胚根的生长,而对水稻盾片愈伤组织的生长影响较小,从而促进盾片愈伤组织的同步健壮生长。这些愈伤组织致密,呈乳白色且分化频率高。调节分化培养基的浓度可减少愈伤组织变褐老化,有效地提高愈伤组织绿苗分化率。在诱导培养期间,较高的2,4－D浓度（大于1 mg/L）和6－BA会抑制种胚体细胞愈伤组织的诱导,其中籼稻比粳稻敏感。在诱导培养基中附加2,4－D 0.5 mg/L,BA 0.5 mg/L,ABA 5 mg/L,B_1 (5－10 mg/L)对成熟籼稻种胚培养是较合适的。 相似文献
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玉米成熟胚愈伤组织诱导及褐化控制研究 总被引：2，自引：0，他引：2
玉米成熟胚组织培养过程中发生褐化可影响愈伤组织的诱导、生长和组培过程的进行。实验研究探讨3种防褐剂硝酸银(AgNO3)、活性炭和PVP及培养条件对玉米成熟胚愈伤组织诱导和继代过程中褐化控制的作用。结果表明,一定浓度的AgNO3能明显减轻褐化,其中愈伤组织诱导时10.0 mg/LAgNO3控制外植体褐化的效果最佳;愈伤组织继代培养时7.0 mg/LAgNO3控制较为适宜。2.0 g/L活性炭能有效抑制外植体的褐化,高于此浓度会抑制愈伤组织的诱导;继代培养初期在含2.0 g/L活性炭的培养基中培养7 d,不仅能有效控制褐化,还在一定程度上促进了愈伤组织的生长。愈伤组织诱导时1.0 g/LPVP能在有效控制外植体褐化的同时促进愈伤组织的形成。暗培养能显著减轻褐化的发生,有利于愈伤组织的诱导。 相似文献
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对芦荟(AloeveraL.)组织培养和再生体系进行了研究,初步获得芦荟的初代和继代培养基为MS 6-BA2.5mg/L NAA0.2mg/L 蔗糖30mg/L,生根培养基成分为1/2MS IBA0.2mg/L NAA0.1mg/L 蔗糖30mg/L,愈伤组织培养采用粗壮的芦荟基部的白色部分,诱导愈伤组织的培养基为B5 6-BA2.0mg/L 2,4-D2.0mg/L 蔗糖30mg/L,采用Vc5.0mg/L抑制愈伤组织诱导过程中褐变的产生。诱导愈伤组织和外植体直接出芽2种方式并存。试管苗移栽后存活率为100%。采用潮霉素为抗性筛选标记,选择浓度为20￣30mg/L。 相似文献
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以优良甘蔗品种桂糖42号心叶为外植体,以MS为基本培养基,探究不同浓度2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)及营养成分[水解酪蛋白(CH)和椰汁(CW)]对甘蔗胚性愈伤组织诱导效果的影响,优化甘蔗胚性愈伤组织诱导培养基;测定诱导胚性愈伤组织发生过程中不同组织样品的4种激素[玉米素核苷(ZR)、赤霉素(GA3)、生长素(IAA)和脱落酸(ABA)]含量。结果表明,甘蔗心叶在添加3.0 mg/L 2,4-D的MS培养基中其愈伤组织诱导率达93.33%,第一代愈伤组织转接于添加3.0 mg/L 2,4-D和100.0 mL/L CW的MS培养基,其胚性愈伤组织诱导率达83.33%;在甘蔗胚性愈伤组织诱导过程中,内源激素ZR和GA3含量呈下降趋势,IAA和ABA含量呈上升趋势,胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织间的4种激素含量均存在显著差异(P<0.05),其中,胚性愈伤组织的GA3含量是非胚性愈伤组织的1.77倍。本研究将甘蔗愈伤组织诱导培养基优化为MS+3.0 mg/L 2,4-D,继代培养基优化为MS+3.0 mg/L 2,4... 相似文献
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CHENEn-hui ZHANGPing ZUOShi-min LIAi-hong ZHANGYa-fang CHENZong-xiang PANXue-biao 《水稻科学》2004,11(4):181-185
Several important factors affecting the efficiency of Agrobacterium-mediated rice transformation were studied with several predominant commercial indica and japonica rice cultivars. As far as indica rice callus was concerned, CC medium was the best and the quality of callus was improved with the addition of 1.0 to 2.0 mg/L ABA. It decreased the percentage of browning calli and improved the callus growing state by addition of a certain amount of sorbitol to the subculture medium. NB medium was the best for callus initiation of japonica rice, but the improvement in the quality of callus of japonica subspecies was not obvious by adding ABA. During the period of subculture, to a certain degree, increasing the sucrose concentration could improve the proportion of hygromycin resistant calli. Furthermore, the transformation efficiency would be higher by applying selection pressure in the selection stage, removing selection pressure during the plantlet differentiation period and applying selection pressure again during seedling hardening period. Besides, suitable combination of plant hormones was beneficial for callus differentiation. An efficient /Agrobacterium-mediated rice transformation system had been established for several rice cultivars and a lot of transgenic rice plants had been obtained. 相似文献
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CHEN En-hui ZHANG Ping ZUO Shi-min LI Ai-hong ZHANG Ya-fang CHEN Zong-xiang PAN Xue-biao 《水稻科学》2004,11(2)
Several important factors affecting the efficiency of Agrobacterium-mediated rice transformation were studied with several predominant commercial indica and japonica rice cultivars. As far as indica rice callus was concerned, CC medium was the best and the quality of callus was improved with the addition of 1.0 to 2.0 mg/L ABA. It decreased the percentage of browning calli and improved the callus growing state by addition of a certain amount of sorbitol to the subculture medium. NB medium was the best for callus initiation of japonica rice, but the improvement in the quality of callus of japonica subspecies was not obvious by adding ABA. During the period of subculture, to a certain degree, increasing the sucrose concentration could improve the proportion of hygromycin resistant calli. Furthermore, the transformation efficiency would be higher by applying selection pressure in the selection stage, removing selection pressure during the plantlet differentiation period and applying selection pressure again during seedling hardening period. Besides, suitable combination of plant hormones was beneficial for callus differentiation. An efficient Agrobacterium-mediated rice transformation system had been established for several rice cultivars and a lot of transgenic rice plants had been obtained. 相似文献
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籼稻绿芽悬浮细胞原生质体再生成株 总被引：2，自引：1，他引：1
采用籼稻Hu-18绿芽为外植体,在N6附加2 mg/L 2,4-D的培养基上诱导愈伤组织。加20 d后转人AA 培养基进行悬浮培养。继代培养45 d左右形成了分裂旺盛的胚性细胞悬浮系。即从绿芽诱导至胚性细胞悬浮系的建立仅用了65 d左右。继代后前6 d,细胞干重几乎每2 d增加1倍,而培养液的渗透压及pH 值迅速下降。取继代后4 d的悬浮细胞游离原生质体,产率为8.74X106/g鲜重。纯化后的原生质体在KPR培养基中进行琼脂糖包埋培养,原生质体植扳率为12.0％ 。将20 d后的小愈伤组织(0.1 mm)转入 N6附加0.5 mg/L 2,4- D、1 mg/ L BA、1 mg/L KT、0.3 mg/L ZT的培养基上增殖,待长成直径2～3 mm 左右时,用N6附加1 mg/L BA,1 mg/L KT,0.3 mg/L ZT的培养基进行分化培养, 5 d后同时出现芽根生长,最终再生成绿色植株,绿苗分化率为3.5株/10000个原生质体。 相似文献
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荔枝胚性悬浮培养物的建立,保持和优化原生质体分离的研究 总被引：12，自引：1，他引：12
将松散颗粒状的荔枝胚性愈伤组织转入液体培养基,２－３周后即可建立起优质的悬浮培养物,长时间悬浮培养后,荔权胚性悬浮培养物的生长势和分化能力下降,但液体培养基＋固体培养基交替培养可使其保持稳定良好的状态。材料来源,继代时间,酶液浓度,酶液渗透压和高渗预处理对胚性悬浮培养物的原生质体分离均有明显影响。 相似文献
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亚麻转基因中抗生素应用效果的研究 总被引：2，自引：1，他引：2
在利用农杆菌介导法进行亚麻抗除草剂草丁膦(Basta)目的基因(Bar)导入工作中；对选择培养基内加入．500mg/l克拉维酸钾(timentin进口) 200mg/l头孢噻肟(claforan进口)的抗菌素来取代500mg/l头孢噻肟(Cefotaxime国产)不仅脱菌效果彻底，期效长，且不影响亚麻愈伤形成和芽的分化；同时对再生植株进行了盆栽Basta抗性筛选试验，获得不同抗性的植株和种子。 相似文献
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水稻愈伤组织生长和衰老过程中信息大分子化合物的变化 总被引：2，自引：0，他引：2
水稻愈伤组织转移继代培养后的0—20天,生长速率较快,核酸和蛋白质含量急剧增加,且维持较高水平,核糖核酸酶和血红蛋白水解酶活性急剧下降,且维持较低活性。因此,愈伤组织的继代培养时间最好掌握在生长速率较快,核酸蛋白质含量较高、水解酶类活性较低的阶段,即在20天以内。核酸和蛋白质含量与其水解酶类(核糖核酸酶和血红蛋白水解酶)的比活之间存在着密切的关系,从而认为核糖核酸酶和血红蛋白水解酶分别在核酸和蛋白质含量下降中起着积极作用。根据信息大分子化合物的变化动态和愈伤组织外部形态变化提出愈伤组织转移继代培养过程可以分为三个阶段,即旺盛生长、稳定生长和衰老阶段。 相似文献
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Fotso Oumar Nicolas N Néhémie DT Denis ON 《Pakistan journal of biological sciences: PJBS》2008,11(5):726-732
A productive genotype of Irvingia gabonensis were cultured in vitro for induction embryogenic calli, somatic embryogenesis and regeneration of plantlets. Fragments of young leaves were used as primary explants. Callogenesis was initiated by culture of explants during 30 days on Murashige and Skoog medium half strength (MS/2) supplemented with 1-6 mg L(-1) of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). The highest percentage of explants forming calli is 85.1% at 3 mg L(-1) of 2,4-D. Somatic embryos were obtained after a subculture of embryogenic calli during 60 days on MS/2 supplemented with 1-3 mg L(-1) of BAP. The highest percentage of embryogenic calli which differentiates somatic embryos is 63.8 +/- 2.3% at 1 mg L(-1) of 6-benzylaminopurine (BAP). The highest number of somatic embryos per callus which is 43.6 is obtained with 2 mg L(-1) of this phytohormone. When isolated from calli and sub-cultured during 30 days on MS/2 supplemented with 2 mg L(-1) of BAP, somatic embryos germinate with a highest percentage of 83%. The subculture of germinated somatic embryos on the same Basal Medium (BM) supplemented with 4 mg L(-1) of BAP and 2 mg L(-1) of Naphthalene Acetic Acid (NAA) during 80 days gives rise to the plantlets with 82.7 +/- 4.8% of success. With this combination, each plantlet has average length of 5.6 cm, bears 3.3 leaves and 7.2 roots with 1 or 2 pivoting roots. Plantlets acclimatized on a mixture sterilized soil/vermiculite at equal volume survive at 93%. Results of this study constitute a new way for a production of Irvingia gabonensis seedlings with pivoting root and they permit to arrest the difficulties of natural and horticultural reproduction. 相似文献
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琼脂浓度对水稻愈伤组织植株再生率和内源激素含量的影响 总被引：9，自引：1，他引：9
以盐粳2号脱壳种子为外植体研究了培养基不同浓度琼脂对愈伤组织植株再生率的影响及可能的机理。在分别进行脱分化、分化和继代培养基中琼脂浓度试验时，当琼脂从0.5％提高到1.0％ 植株再生率均显著升高。在继代和分化培养基琼脂浓度均为1.0%时植株再生率最高，而脱分化培养基0.5%或1.0%琼脂和分化培养基1.0%琼脂 组合，再生率最高，两者均为1.0% 琼脂反而降低。试验还表明，随着培养基中琼脂浓度提高，愈伤组织含水量显著降低而脯氨酸含量上升。较高浓度（1.0%）琼脂继代培养的愈伤组织内源ABA含量显著高于较低浓度（0.5%）琼脂的，而ZRs含量则显著较低。同样，在分化培养过程中，较高浓度琼脂分化培养的愈伤组织内源ABA含量显著地高于较低琼脂的，而ZRs含量则相反，但差异不显著。 V 关键词：琼脂浓度：精 相似文献