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农杆菌介导的百合遗传转化受体系统的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]研究农杆菌介导的百合遗传转化受体系统。[方法]选取改进MS培养基为基本培养基,以百合的鳞片为材料进行外植体再生和抗生素筛选试验,确定农杆菌介导的百合遗传转化受体系统。[结果]MS改进培养基中添加0.5 mg/L2,4-D、1.0 mg/L BA最有利于鳞片不定芽的分化,分化率为59.1%。小叶块在添加0.1 mg/LBA、1.0 mg/L2,4-D的MS改进培养基中的分化率最高,达94.4%,且生根情况较好。以百合的鳞片和小叶块作为农杆菌介导的基因转化的受体材料时,所用头孢霉素的浓度以400 mg/L最好,鳞片和小叶块周围几乎没有农杆菌菌斑。潮霉素筛选鳞茎的亚致死浓度为14 mg/L,潮霉素筛选小叶块的亚致死浓度为18 mg/L。[结论]该研究为百合农杆菌介导的转基因研究奠定了基础。 相似文献
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融合杀虫基因对甘蔗的遗传转化 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]利用MAR序列介导转基因表达及融合杀虫基因,以期克服外源基因失活,增强抗虫基因表达能力,延缓昆虫抗性的发生,获得高抗虫转基因甘蔗植株.[方法]以甘蔗品种ROC25为材料,进行愈伤组织、芽苗分化和生根的Hyg抗性筛选试验.利用农杆菌介导,将含MAR序列介导融合杀虫基因(AVAc-CpTI)导入甘蔗基因组.[结果]愈伤组织增殖、出芽时Hyg的最佳筛选浓度为50 mg/L,生根时Hyg的最佳筛选浓度为30 mg/L.获得13个MAR序列介导转基因表达基因系,48株Southern杂交阳性甘蔗植株;获得8个无MAR序列介导转基因表达基因系,7株Southern杂交阳性甘蔗植株.MAR序列介导转基因表达使转化过程中转基因系的获得数量提高了62.5%.[结论]建立了ROC25的潮霉素抗性筛选体系;MAR序列介导融合杀虫基因进行甘蔗遗传转化,可提高甘蔗外源基因转化效率. 相似文献
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[目的]探讨魔芋愈伤组织培养基、不同转化条件(菌液浓度、侵染时间、预培养时间及共培养时间)及转化植株的筛选条件(抗生素浓度和乙酰丁香酮(AS)浓度)等因素对转化效率的影响。[方法]采用卡那霉素抗性基因为选择标记,对农杆菌介导的花魔芋遗传转化体系进行优化。[结果]在预培养2 d,用OD600为0.6的菌液侵染30 min、共培养3 d,卡那霉素100 mg/L,羧苄青霉素250 mg/L,AS浓度100μmol/L的条件下能有效提高转化效率。再生花魔芋植株经GUS染色及PCR检测,结果表明外源目的基因已经整合到花魔芋基因组中。[结论]为魔芋抗病品种的转基因培育,丰富其种质资源,寻找抗病新途径提供理论依据和试验基础。 相似文献
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以盐芥[Thellungiella halophila(C.A.Mey.)O.E.Schulz]为材料,利用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导的转化方法,获得T-DNA插入突变群体,构建了一个具有5 000株抗Basta/Kan的盐芥T-DNA插入突变体库,其中有若干个株系有明显的表型改变,包括花期的改变、株型矮小、叶片形状改变等。并优化了建库的各因素,确定了最佳的盐芥栽培技术及转化体系,盐芥春化温度及时间为4℃、30 d,转化用菌液浓度OD600≈2.0,侵染时间2 min,暗培养1 d,Kan筛选浓度50 mg/L,除草剂(Basta)筛选浓度为稀释1 500倍;这些因素可为根癌农杆菌介导的盐芥转基因、突变体构建等基因组学研究提供强有力的技术平台。 相似文献
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《南京农业大学学报》2016,(1)
[目的]为了进一步研究黄瓜基因的功能,本文构建了黄瓜T-DNA插入突变体库。[方法]以黄瓜栽培品种‘长春密刺’子叶节为转化外植体,通过农杆菌介导的遗传转化方法,将T-DNA插入突变载体pROK2后转化黄瓜;通过筛选压力梯度试验,确定遗传转化体系最适合的卡那霉素(Kan)筛选浓度;使用PCR检测和斑点杂交方法鉴定T0和T1代转化植株;以‘长春密刺’植株为对照,统计T1代植株表型。[结果]确定100 mg·L-1为最适合的Kan抗性芽筛选浓度。T0代植株PCR检测结果初步证明,pROK2成功整合到14S1和14S2两个T0代株系基因组中。14S1自交后获得55个T1代单株,对其进行PCR检测,发现其中12个单株均扩增出了35S和NPT-Ⅱ片段。以Dig标记的35S和NPT-Ⅱ为探针,对这12个单株及随机从剩余T1代中选取的11个单株进行斑点杂交检测,得到了2个含有35S和NPT-Ⅱ杂交信号的单株:14S1-27和14S1-34。性状调查统计显示:T1代植株在生长各阶段相对于野生型无明显突变表型。[结论]pROK2重组质粒成功整合到了14S1株系的基因组中。对14S1自交后代的PCR检测和斑点杂交检测结果进一步证明了14S1为转化植株,确定14S1为插入突变体。结合T-DNA插入位点鉴定技术可进一步开展相关基因分离及功能研究工作。 相似文献
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[目的]以英国薰衣草叶片为材料,创建稳定高效的农杆菌介导薰衣草的遗传转化体系.[方法]未经预培养的英国薰衣草叶片,在OD600=0.4的根癌农杆菌菌液中浸染10 min,共培养1d后,在Cef抑菌浓度为300 mg/L、Kan筛选浓度为30 mg/L的选择培养基上诱导芽分化,抗性芽在Kan浓度为10 mg/L生根培养基上诱导生根.[结果]对筛选得到的65株抗性苗进行PCR检测,获得2株阳性植株,转化率达到3.00;.[结论]建立了稳定高效的农杆菌介导英国薰衣草的遗传转化体系. 相似文献
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《（《农业科学与技术》）编辑部》2008,(2)
[Objective] The aim of this study is to obtain transgenic Lilium longiflorum Thumb. [Method] A two-step method of explant and the T-DNA integration technique were employed to transform Lilium longiflorum via Agrobacterium mediated method. [Result] The best infection effect appeared under the OD600 value of Agrobacterium within 0.6-0.8,the addition of 250 mg/L AS could increase the transformation efficiency. The optimal concentration of G418 for screening is 50 mg/L. Some putative transgenic plants of Lilium longiflorum with resistance to G418 showed positive in PCR,preliminarily proving that T-DNA gene had integrated into the genome of lily. [Conclusion] The study may lay a foundation for breeding excellent lily varieties through T-DNA integration technique. 相似文献
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LI Gang LIU Ju-hua TAN Guang-lan XU Bi-yu JIN Zhi-qiang Institute of Tropical Bioscience Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences Haikou 《（《农业科学与技术》）编辑部》2008,(2)
[Objective] The aim of this study is to obtain transgenic Lilium longiflorum Thumb. [Method] A two-step method of explant and the T-DNA integration technique were employed to transform Lilium longiflorum via Agrobacterium mediated method. [Result] The best infection effect appeared under the OD600 value of Agrobacterium within 0.6-0.8,the addition of 250 mg/L AS could increase the transformation efficiency. The optimal concentration of G418 for screening is 50 mg/L. Some putative transgenic plants of Lilium longiflorum with resistance to G418 showed positive in PCR,preliminarily proving that T-DNA gene had integrated into the genome of lily. [Conclusion] The study may lay a foundation for breeding excellent lily varieties through T-DNA integration technique. 相似文献
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[Objective] The aim of this study is to obtain transgenic Lilium longiflorum Thumb. [Method] A two-step method of explant and the T-DNA integration technique were employed to transform Lilium longiflorum via Agrobacterium mediated method. [Result] The best infection effect appeared under the OD600 value of Agrobacterium within 0.6 -0.8, the addition of 250 mg/L AS could increase the transformation efficiency. The optimal concentration of G418 for screening is 50 mg/L. Some putative transgenic plants of Lilium longiflorum with resistance to G418 showed positive in PCR, preliminarily pro-ring that T-DNA gene had integrated into the genome of lily. [Conclusion] The study may lay a foundation for breeding excellent lily varieties through T-DNA integration technique. 相似文献
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[目的]解决麝香百合种球的扩繁问题。[方法]根据不同的种球大小和重量,设20个级别处理,研究麝香百合种球大小对鳞茎生长的影响。[结果]结果表明,百合种球大小在50~65 g的处理对鳞茎鲜重、干重、直径和鳞片数量的增加效果明显;鳞茎直径、鲜重和干重与百合种球大小之间存在明显相关,其回归关系式分别为:Y1=40.117 0-22.946 9X1+3.854 5X12,Y2=-12.611 2+0.879 5X2-0.002 059X22和Y3=-10.365 6+2.685 1X3-0.018 91X32。[结论]该研究为麝香百合种球的进一步研究提供依据。 相似文献
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百合遗传转化高频直接分化受体系统的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
以东方百合西伯利亚和索蚌为试材,通过对鳞片分化成苗、小叶离体再生、生根和抗生素敏感性试验等研究,建立了稳定、高效的以无菌苗叶片为外植体的高频直接分化基因转移受体系统。在含有BA2mg/L+ZT1mg/L的MS培养基上,对供试品种无菌苗小叶片进行离体分化培养,再生率达100%,其适宜的生根培养基为MS+NAA0.75mg/L。同时,对小叶片外植体再生体系的抗生素及除草剂筛选浓度进行试验,结果显示:小叶片对G418和PPT较敏感,适宜的G418筛选浓度为80mg/L,PPT筛选浓度为1.75mg/L;而羧苄青霉素适宜浓度范围较宽,为300～400mg/L。 相似文献
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[目的]优化作物耐旱性鉴定的指标体系,探索对龙牙百合进行耐旱性评价的有效方法。[方法]利用不同强度干旱条件对龙牙百合进行胁迫,通过测定几种与植物抗逆性有关的生理指标研究它们在干旱胁迫下的变化规律。[结果]轻度胁迫下,丙二醛含量有所上升,脯氨酸含量变化较小,SOD总活性增加较快。中度胁迫下,丙二醛含量的总体变化趋势为先升后降;脯氨酸含量总体升高,在接近重度胁迫时达到胁迫期间的最高水平。重度胁迫下,丙二醛含量缓慢上升,脯氨酸含量快速下降。致死性胁迫下,丙二醛含量先升后降,脯氨酸含量变化较小。中度、重度及致死性胁迫下,SOD总活性基本维持在较高水平。在整个胁迫过程中,叶绿素含量的变化与胁迫强度呈负相关关系。[结论]只有采用多项指标综合评价才能较准确地反映植物的抗旱特性。 相似文献