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1.
本试验旨在研究基于不同地区取样点土壤成分条件下,木质素降解菌的生长特性,并为筛选出降解农作物秸秆中木质素的优势菌奠定基础。通过对扬州、南京、临沂、潍坊和连云港地区5个取样点的土壤成分测定,并利用选择培养基和马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)-RB亮蓝与PDA-Bavendamm平板显色反应鉴定不同土壤中木质素降解菌生长量及其木质素降解酶特性,依据各取样点菌株的生长特性最终选择优势菌株。结果表明,扬州取样点土壤中木质素降解菌密度[(5.67±0.58)105g-1]极显著高于另外4个取样点(P<0.01),所获得的木质素降解菌的产酶特性亦优于其他取样点。可知,5个取样点土壤中木质素降解菌密度存在明显差异,并与土壤中总有机碳含量呈强正相关(r=0.84,P<0.01)。 相似文献
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本试验旨在研究基于不同地区取样点土壤成分条件下,木质素降解菌的生长特性,并为筛选出降解农作物秸秆中木质素的优势菌奠定基础.通过对扬州、南京、临沂、潍坊和连云港地区5个取样点的土壤成分测定,并利用选择培养基和马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)-RB亮蓝与PDA-Bavendamm平板显色反应鉴定不同土壤中木质素降解菌生长量及其木质素降解酶特性,依据各取样点菌株的生长特性最终选择优势菌株.结果表明,扬州取样点土壤中木质素降解菌密度[(5.67±0.58) 105g-1]极显著高于另外4个取样点(P＜0.01),所获得的木质素降解菌的产酶特性亦优于其他取样点.可知,5个取样点土壤中木质素降解菌密度存在明显差异,并与土壤中总有机碳含量呈强正相关(r=0.84,P＜0.01). 相似文献
3.
通过选择性培养基、PDA—RB平板显色和PDA-Bavendamm平板显色反应从土壤样品中反复筛选获得5株产木质素降解酶能力较强的菌株,经鉴定为白腐菌属。小麦秸秆降解试验显示,菌株P3对秸秆中木质素的降解率最高,培养15d后达到11．47％,其次为菌株P5,降解率为8．12％,为进一步的研究奠定了基础。 相似文献
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《上海畜牧兽医通讯》2010,(2)
通过选择性培养基、PDA—RB平板显色和PDA—Bavendamm平板显色反应从土壤样品中反复筛选获得5株产木质素降解酶能力较强的菌株,经鉴定为白腐菌属。小麦秸秆降解试验显示,菌株P3对秸秆中木质素的降解率最高,培养15d后达到11.47%,其次为菌株P5,降解率为8.12%,为进一步的研究奠定了基础。 相似文献
5.
《动物营养学报》2020,(3)
本试验旨在构建含内切葡聚糖酶基因的重组乳酸杆菌,研究其对秸秆植物性饲料的降解效果,为后期构建高效分解纤维素的工程菌奠定基础。从桑天牛(Apriona germari)体内分离出枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),克隆其内切葡聚糖酶基因,通过酶切连接的方式将目的基因片段与启动子P_(32)、信号肽SP_(lp0373)、乳酸杆菌载体pLEM-415共同构建了内切葡聚糖酶分泌表达重组质粒pLEM-P_(32)SPNqm,并对重组乳酸菌酶学性质和其在秸秆饲料中的降解能力进行测定。结果表明:从枯草芽孢杆菌中克隆出的目的基因大小为1 490 bp,构建的重组乳酸杆菌其表达产物的蛋白大小约54 ku。进一步测定发现,重组乳酸杆菌产酶最适温度和时间分别为37℃、24 h,在最佳条件下其羧甲基纤维素酶(CMCase)活性为2.06 U/mL。酶促反应最适温度和pH分别为60℃、6.0。在50～70℃、弱酸性条件下该酶的稳定性较好。金属离子Na~+、K~+、Mn~(2+)对酶促反应有促进作用,而Mg~(2+)、Cu~(2+)对酶活性抑制作用较大。重组乳酸杆菌发酵粗饲料,对玉米秸秆、苜蓿秸秆、小麦秸秆均发挥了一定的降解作用,中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维相对降解率分别为10.42%、21.12%,4.99%、7.85%,4.57%、9.53%。综上,本试验构建的重组乳酸杆菌对常见的秸秆植物性饲料均有一定的降解能力。 相似文献
6.
《畜牧与兽医》2015,(10):35-40
为筛选产漆酶的木质素降解菌,采用愈创木酚平板法和RB亮蓝平板法进行菌株筛选,利用16S r DNA序列分析对菌株进行鉴定,通过液体发酵培养对漆酶活性和木质素降解能力进行研究。将漆酶基因cot A克隆到表达载体p ET-32a(+)上获得重组质粒p ET-32a(+)-Cot A并转化到BL21中进行表达,通过酶活测定将表达条件进行优化。结果:从白蚁肠道中成功筛选出1株产漆酶的木质素降解菌,鉴定为枯草芽胞杆菌。漆酶的最适酶活温度为60℃,最适酶活p H为3.5~4.0;0.2 mmol/L Cu2+可诱导菌株漆酶的产生,缩短了产酶时间并提高了酶活性。菌株木质素降解率在液体发酵培养24 h后达到了17.1%。漆酶基因大小为1 542 bp,表达的重组蛋白为85 ku,属于有活性的可溶性蛋白。在IPTG浓度为1mmol/L、Cu2+浓度为0.3mmol/L、诱导时间为9 h的条件下,漆酶蛋白活性可达到113.10 U/L。研究表明,本试验成功筛选出1株降解木质素能力较强的枯草芽胞杆菌,获得可分泌较高活性漆酶的重组菌,为木质素酶在畜牧业生产实践上的应用奠定了基础。 相似文献
7.
【目的】 在黑曲霉（A.niger）中重组表达灵芝L菌漆酶基因，并对其发酵条件进行优化，旨在获得一株高产灵芝漆酶的黑曲霉基因工程菌。【方法】 从灵芝L菌克隆漆酶基因Lac-L，并根据黑曲霉密码子偏好性进行优化。选用黑曲霉糖化酶启动子（PglaA）、信号肽及终止子为表达原件，以米曲霉pyrG基因为筛选标记，构建漆酶表达盒，采用聚乙二醇-CaCl2法将其转化至黑曲霉X1（ΔpyrG）原生质体中。对转化子进行PCR验证及固态发酵酶活测定，筛选高产漆酶重组菌株，并对阳性转化子固态发酵培养基碳源、无机与有机氮源比例、Cu2+浓度及发酵时间进行优化。【结果】 经尿嘧啶缺陷及含2，2'-联氮-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2，2'-azinobis （3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid ammonium salt），ABTS）培养基筛选获得25株重组漆酶转化子，酶活复筛获得灵芝漆酶异源表达6号重组菌株，发酵72 h酶活可达3 532.6 U/kg，宿主菌株的酶活仅为58.37 U/kg。重组6号菌优化后的最适固态发酵条件为：以麸皮为基础培养基，添加2%麦芽糖、2%（NH4）2SO4、0.25 g/L CuSO4，发酵60 h时重组菌株产漆酶活力最高，达到6 255.47 U/kg。【结论】 在黑曲霉中成功实现灵芝L菌漆酶基因Lac-L的异源表达。 相似文献
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白腐真菌对稻草秸秆生物降解的研究 总被引：7，自引：1，他引：6
试验对白腐菌TK-X-03在固态培养条件下稻草秸秆的生物降解进行了研究。通过正交试验,确定葡萄糖、(NH4)2SO4和MnSO4的最适添加量分别为3%、0.015%、0.05%。稻草降解过程中赖锰过氧化物酶(MnP)、木质素过氧化物酶(LiP)、漆酶(Laccase)、纤维素酶和木聚糖酶的酶活在培养的第6、7、9、10和15d达到最高值,分别为1.06U/g、8.71U/g、0.054U/g、400U/g和0.26U/g。培养25d后,稻草秸秆中纤维素、半纤维素和木质素的降解率依次为25.1%、29.8%和55.1%。 相似文献
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《动物营养学报》2020,(7)
本试验旨在探究菌酶复合制剂发酵玉米秸秆的最佳发酵条件及发酵效果。运用均匀设计试验,以中性洗涤纤维降解率、酸性洗涤纤维降解率为目的指标,对黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)接种量、纤维素酶和木聚糖酶添加量及发酵天数4个因素进行筛选,并对发酵效果进行评价和比较分析。结果表明:菌酶复合制剂发酵玉米秸秆的干物质、粗蛋白质含量显著高于未发酵秸秆(P0.05),酸性洗涤木质素、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量显著低于未发酵秸秆(P0.05)。本研究所获得的最佳发酵条件为:纤维素酶添加量0.2 g/kg,木聚糖酶添加量0.1 g/kg,黄孢原毛平革菌接种量20%,发酵天数19 d;在此条件下,玉米秸秆的中性洗涤纤维降解率和酸性洗涤纤维降解率分别达到了23.47%和20.13%。 相似文献
10.
我国每年小麦秸秆产量达2亿吨,其开发利用的难点在于木质素的降解,云芝、灵芝、香菇、朱红栓菌等食用菌中含有高效的木质素降解酶,为了有效开发利用小麦秸秆,本实验对云芝菌等降解小麦秸秆木质素的产酶能力进行研究。方法:本文以云芝、灵芝、香菇、平菇、鸡腿菇、猴头菇为研究对象分别降解小麦秸秆,在温度23~25℃、湿度58%~60%的最佳条件下扩大培养,离心提取以上6种菌种的粗酶液,采用考马斯亮蓝法、用分光光度法等对粗酶液的蛋白质含量和酶活性质进行研究。结果:得到线性方程Y=6.659X+0.3312,相关系数R~2=0.9904,发现6种菌种在培养的过程中蛋白质含量逐渐增加,且在第10天含量都趋于稳定。云芝产锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(Lac)效果最佳,第7天时,MnP的酶活最高为313330U/L,Lac的酶活最高为2230U/L。结论:可以用云芝菌的高效产MnP和Lac能力,开发利用小麦秸秆木质素资源。 相似文献
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淀粉液化芽孢杆菌β-1,3-1,4葡聚糖酶基因的克隆和表达 总被引：6，自引：0，他引：6
提取淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amyrlolique faciens)基因组，通过PCR克隆了该菌的β-1，3-1，4葡聚糖酶基因全长。结果显示，该基因全长843 bp，ORF为717 bp，编码239个氨基酸，计算相对分子质量为26800，等电点为6．07。经Blast分析，该序列与基因库中的淀粉液化芽孢杆菌(M15674)同源性最高(97％)。该基因已被GenBank接受(AY205562，1)。用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切目的片段和表达栽体pET-30a( )后相连接，构建了重组表达栽体pETamy，并导入BL21细菌中表达，酶学特性表明：SDS-PAGE电泳在26000左右有表达蛋白带，该工程菌总酶活达90．74U／mL，是出发菌的3倍，最适温度在60℃左右，pH值在4～10之间。该工程菌可作为酶活高的理想材料，用以构建耐热性好和酶活高的杂合基因工程菌。 相似文献
13.
《饲料研究》2017,(16)
我国作为粮食消费大国,每年产生秸秆7亿t左右。秸秆作为饲料资源化利用,不仅可降低秸秆对环境的污染,还能缓解人畜争粮矛盾。利用秸秆作为饲料的关键是如何降解秸秆木质素,并提高秸秆的消化率。木质素过氧化物酶是降解木质素的主要酶之一,研究通过正交试验和单因素试验优化青霉产木质素过氧化物酶的最适条件。结果显示,最适培养基组成为藜芦醇9.00%、麦芽糖0.20%、酵母膏0.15%、(NH_4)2SO_40.30%、FeSO_4 0.17%、CuSO_4 0.04%、MnSO_4 0.06%、MgSO_4 0.12%、维生素B10.06%和甘氨酸0.001%。在此条件下,木质素过氧化物酶活性为1 360 U/L。通过发酵条件优化,确定最优培养条件为装液量90 mL、摇床转速120 r/min、培养温度28℃及初始pH 4.5,木质素过氧化物酶的活性最高可达到1 801 U/L。 相似文献
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表达产气荚膜梭菌α—β融合蛋白基因工程菌株的构建 总被引：3，自引：1，他引：2
用PCR从含产气荚膜俊菌α毒素基因的质粒pXETA1中护增出α毒素基因，用NcoI和BamHI双酶切该α毒素基因，回收0.95kb的α毒素基因片段，再用NcoI和BamHI双酶切含产气荚膜梭菌β毒素基因质粒pXETB2，与上述回收的α毒素基因片段连接，转化至受体菌BL21（DE3）中。经NcoI、BamHI、NotI酶切反应鉴定和核苷酸序列分析证实，获得了理想重组质粒pXCPAB2，该重组质粒含有α-β融合基因。重组菌株BL21（DE3）（pXCPAB2）经IPTG诱导后，其表达产物经ELISA检测和SDS-PAGE分析，结果表明重组菌株可以高效表达α-β融合蛋白，该融合蛋白占菌体总蛋白的22.14%。用从IPTG诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原免疫小鼠，免疫小鼠至少能抵抗2MLD的C型产气荚膜梭菌的攻击。这表明构建的工程菌株BL21（DE3）（pXCPAB2)可以作为预防仔猪红痢基因工程菌苗的候选株。 相似文献
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本试验旨在通过分离鉴定白芥子诱导的芥子碱降解菌，并对其核心功能酶漆酶进行酶活测定，建立芥子碱的生物降解方法，为探寻白芥子等十字花科类非粮饲料资源的高效利用提供技术支撑。本试验以藏香鸡为模型，在基础日粮中添加20%白芥子饲喂28 d进行芥子碱降解菌体内诱导。分别采集鸡空肠、回肠、盲肠内容物在不同培养基中分离筛选芥子碱降解菌，对筛选出的优势菌进行形态学和分子生物学鉴定，测定该菌株的芥子碱降解效果和漆酶活性。结果表明：（1）在鸡盲肠中筛选出9株目标菌，筛出率明显高于空肠和回肠，并进一步选出1株芥子碱降解优势菌SDB2(Sinapine-degrading bacteria 2)。（2）经鉴定，SDB2菌株属于变形菌门；γ-变形菌纲；肠杆菌目；肠杆菌科；大肠埃希菌。（3）芥子碱浓度与SDB2菌株培养时间存在极显著的线性回归关系（P <0.01），芥子碱浓度随培养时间增加而降低，培养72 h的芥子碱降解率可达50%。（4）漆酶活力与SDB2菌株培养时间存在极显著的线性回归关系（P <0.01），漆酶活力随培养时间增加而降低。（5）漆酶活力与芥子碱浓度存在极显著的线性回归关系（P &l... 相似文献
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不同配伍生物制剂对水稻秸秆青贮品质及饲喂价值的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为研究不同配伍生物制剂对水稻秸秆青贮发酵品质、营养价值及饲喂价值的影响，筛选高效青贮生物添加剂，探索实用的水稻秸秆饲料转化技术，以水稻品种龙粳31秸秆为试验材料，生物制剂共设置 15 个处理，其中4 个酶制剂处理组，1 个菌制剂处理组，9 个酶菌混合处理组。青贮60 d后，对水稻秸秆青贮饲料品质指标进行测定，并计算饲喂价值。结果表明：水稻秸秆青贮饲料各处理组及对照组感官评定均达到了优级|MCL2处理组（木聚糖酶1 g/3 kg、果胶酶1 g/3 kg、β-葡聚糖酶1 g/3 kg、乳杆菌3 g/3 kg、纤维素酶1 g/3 kg）pH、氨态氮占总氮百分比最低，分别为3.63、8.58%，乳酸含量最高，为4.14% DM（P ＜ 0.05）|酶制剂处理组及酶菌混合处理组水稻秸秆青贮饲料中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）及纤维素含量显著降低，其中MCL2处理组NDF、ADF、纤维素含量最低，分别为53.06% DM、31.84% DM、21.76% DM|酶制剂、酶菌复合处理组水稻秸秆青贮饲料饲喂价值指标总可消化养分（TDN）、可消化干物质（DDM）、干物质采食量（DDI）、相对饲喂价值（RFV）、相对饲喂质量（RFQ）显著高于对照组及乳杆菌处理组（P ＜ 0.05）。生物制剂可改善水稻秸秆青贮饲料的发酵品质，提高营养物质的保存量，提高秸秆饲喂价值，从而提高水稻秸秆的可利用率，其中MCL2处理组效果最佳|酶制剂、乳杆菌、酶菌复合处理均对纤维素、半纤维素、DNF、ADF、木质素具有明显的降解作用，且酶菌复合处理添加效果优于酶制剂、乳杆菌。
[关键词] 水稻秸秆|生物制剂|青贮发酵|饲喂价值 相似文献
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试验旨在拟从腐朽木材和腐质土壤中获得1种高效的纤维素酶生产菌，利用紫外线诱变技术对其进行改造。采用刚果红染色法和酶活性试验，筛选出2株纤维素酶产率较高的菌（菌株HS5、菌株1）。经形态学和分子鉴定，菌株HS5为黄曲霉（Aspergillus flavus），菌株1为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）。在固体产酶培养基中，以水稻秸秆为唯一的碳源，28℃培养4 d后，HS5滤纸酶（FPA）的酶活为306 U/g，羟甲基化纤维素（CMC）的酶活为592.2 U/g；菌株1的FPA酶活为214.2 U/g,CMC酶活为523.8 U/g，表现出了较好的降解纤维素的能力。紫外诱变处理得到产酶能力提高的突变菌株为UR-07和URM-13。与原始菌株相比，UR-07的FPA和CMC酶活分别比原始菌株HS5提高了15.86%、16.68%,URM-13的FPA和CMC酶活比菌株分别提高了26.94%、19.03%。研究表明，经紫外诱变后，产纤维素酶真菌的产酶能力有所提升且具有较好的遗传稳定性，两株菌株在纤维素酶的生产和纤维素类物质降解菌剂的研究中具有较高的潜力。 相似文献
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为了观察捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌不同分离株在不同培养基中的形态学特性及生长情况,将少孢节丛孢菌分离株DH 066和F 107接种于10g/L麸皮琼脂(WBA)培养基、10g/L玉米粉琼脂(CMA)培养基、20g/L葡萄糖离子琼脂(DIA)培养基和20g/L葡萄糖琼脂(DA)培养基中,置于25℃恒温箱培养,观察不同分离株在不同培养基中的形态学特性并测定其产孢量。对2个分离株在6种不同培养基中菌丝生长长度每天进行定时测量。结果表明,该菌在4种培养基中的特征为分生孢子梨形至倒卵形,1个分隔,偶见2个分隔,分生孢子梗无色,直立,分隔,偶见分枝,分生孢子在10g/L WBA产量最大。此外,对2个分离株在不同培养基中生长速度研究表明,该菌在10g/L麸皮自来水琼脂(WBWA)培养基和10g/L玉米粉自来水琼脂(CMWA)培养基中生长最快。 相似文献
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本试验旨在探究不同酶制剂组合对水稻秸秆青贮品质和体外瘤胃发酵特性的影响。试验以水稻秸秆为青贮原料，添加不同酶制剂组合，共设4个组：对照组（CK组，不添加任何酶制剂）、C组（添加1.0 g/kg纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶复合酶制剂）、PL组（添加0.5 g/kg果胶酶+1.0 g/kg漆酶）、CPL组（添加1.0 g/kg纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶复合酶制剂+0.5 g/kg果胶酶+1.0 g/kg漆酶），每组5个重复。青贮60 d后开包取样，分析其青贮品质和体外瘤胃发酵特性。结果表明：1）水稻秸秆青贮后，PL组的干物质含量显著高于CK、C、CPL组（P<0.05）;CPL组的粗脂肪含量、相对饲用价值、总可消化养分显著高于CK组（P<0.05），中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量显著低于CK组（P<0.05）。2）体外发酵24 h后，C、PL、CPL组24 h累积产气量、慢速降解部分产气量和潜在产气量显著高于CK组（P<0.05），快速部分产气量显著低于CK组（P<0.05）;PL、CPL组的慢速降解部分的产气速率显著高于CK、C组（P<0.0... 相似文献