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河田鸡和艾维菌肉鸡的睾丸,经硫酸铵分级沉淀、DEAE-32离子交换柱层析,获得比活力为54．84U·rag～,纯化倍数为8．86的河田鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）制剂．艾维菌肉鸡睾丸NAGase经SephacryS-300凝胶过滤层析柱进一步纯化,获得比活力为171．50U·mg-1,纯化倍数为19．8倍的NAGase制剂．以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（pNP-NAG）为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学．结果表明：河田鸡和艾维菌肉鸡睾丸NAGase的最适pH分别为5．6、5．7,最适温度分别为55、50℃;NAGase分别在pH为3．0—9．2、4．0-9．2及温度为10-60、10-30℃下能保持稳定;NAGase酶促反应动力学均符合米氏双曲线方程,测得米氏常数（k）分别为0．223、0．319mmol·L-1,最大反应速度（k）分别为9．438、6．238μmol·L-1·min-1;NAGase催化pNP-NAG反应的活化能分别为85．74、73．47kJ·mol-1． 相似文献
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山麻鸭睾丸和肝脏中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离提取及其性质的比较 总被引：3，自引：3，他引：0
山麻鸭的睾丸和肝脏经硫酸铵分级沉淀分离、DEAE-32离子交换柱层析,获得的肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC3.2.1.52)比活力为85.30 U.mg-1,纯化倍数为10.48.睾丸NAGase再进一步通过Sephacryl S-300凝胶过滤纯化,获得的NAGase比活力为5537.00 U.mg-1,纯化倍数为59.20.睾丸NAGase经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,出现单一蛋白带,测定等电点pI为5.05.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物研究酶催化底物水解的反应动力学.结果表明:山麻鸭睾丸和肝脏NAGase的最适pH分别为5.70和5.60,酶在pH为3.00-8.43时较稳定,而pH>8.43时很快失活;酶的最适温度分别为45和60℃,当温度为80℃时酶完全失活.睾丸NAGase在40℃下处理30 min,酶活力保持稳定;而肝脏NAGase在30℃下处理30 min,酶活力保持稳定,酶催化pNP-NAG水解反应遵循米氏方程,睾丸和肝脏NAGase水解pNP-NAG的Km分别为0.17和0.21 mmol.L-1,Vm分别为8.82和7.25μmol.L-1.min-1,活化能分别为57.57和79.47 kJ.mol-1. 相似文献
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山麻鸭的睾丸和肝脏经硫酸铵分级沉淀分离、DEAE-32离子交换柱层析,获得的肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase,EC3．2．1．52）比活力为85．30U·mg-1,纯化倍数为10．48．睾丸NAGase再进一步通过Sephacryl S-300凝胶过滤纯化,获得的NAGase比活力为5537．00U·mg-1,纯化倍数为59．20．睾丸NAGase经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,出现单一蛋白带,测定等电点p,为5．05．以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（pNP—NAG）为底物研究酶催化底物水解的反应动力学．结果表明：山麻鸭睾丸和肝脏NAGase的最适pH分别为5．70和5．60,酶在pH为3．00—8．43时较稳定,而pH〉8．43时很快失活;酶的最适温度分别为45和60℃,当温度为80℃时酶完全失活．睾丸NAGase在40℃下处理30min,酶活力保持稳定;而肝脏NAGase在30℃下处理30min,酶活力保持稳定,酶催化pNP．NAG水解反应遵循米氏方程,睾丸和肝脏NAGase水解pNP-NAG的K分别为0．17和0．21mmol·L-1,k分别为8．82和7．25p．mol·L-1·min-1,活化能分别为57．57和79．47kJ·mol-1． 相似文献
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猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的纯化与酶学性质研究 总被引：6，自引：0，他引：6
【目的】分离纯化猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂,研究其理化性质。【方法】采用硫酸铵沉淀分级分离、DEAE-32阴离子交换柱层析、Sephadex G-100分子筛柱层析和CM-52阳离子交换柱层析方法,分离纯化猪精液的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶分子量测定;采用聚丙烯酰胺等电聚焦圆盘电泳法测定酶的等电点。【结果】经分离纯化获得比活力为17 606.15 U•mg-1、纯化倍数为270.53倍的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂。酶催化对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖（pNP-NAG）水解的最适pH为5.5,最适温度为50℃。该酶在pH 3.0～8.9区域较稳定;在45℃以下处理30 min,酶活力保持稳定。酶分子中亚基的分子量为58.03 kD,等电点为9.42。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为1.94 mmol•L-1,最大反应速度Vm为27.53 µmol•L-1•min-1。酶催化pNP-NAG反应的活化能为88.73 kJ•mol-1。【结论】本试验选用的分离纯化的方法是可行的。 相似文献
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对罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)在全氟己酸中水解pNP-NAG活力的影响进行了研究.结果表明,全氟己酸对NAGase具有可逆抑制,IC_(50)为0.29 mg·mL~(-1).应用Lineweaver-Burk双倒数法可知,全氟己酸对NAGase的抑制类型为竞争型抑制,与自由酶结合的抑制平衡常数(K_I)为0.18 mg·mL~(-1).采用底物反应的动力学方法建立全氟己酸对NAGase的抑制动力学模型,其微观速度常数可以在全氟己酸对NAGase的底物反应中求出. 相似文献
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为制备免疫原以测量个体生长和繁殖过程中所释放的几丁质酶,从大型潘（Daphniamagna）体内提纯了N．乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（EC3．2．1．52）,经硫酸铵沉淀分级分离、DEAESephadex A-25阴离子交换柱层析和SephadexG-150分子筛柱层析纯化等步骤,酶的纯化倍数为20．09。纯酶比活力为2243380U·mg^-1。酶分子中各亚基的分子量分别为128,99和71Ku。根据测试,酶促反应的米氏常数为0．300mmol·L～,最大反应速度为0．072um01．mg^-1·min^-1。酶催化底物分解的最适pH为7．0,最适反应温度为45℃;酶在值4．2-7．8的范围内活性处于高位;在不高于35℃的温度下处理30min,酶活性下降不明显。至于从大型潘培养液中获得的NAGase,其催化底物分解的最适pH值为7．4,最适反应温度为40℃,该酶在pH值4．6-7．8的范围内活性处于高位,在不高于40℃下处理30min,酶活性下降不明显。这显示被提纯的酶和培养液中分离的酶在温度、pH以及热稳定性和酸碱稳定性方面均具有较高程度的相似性,有可能属于相同分子型。 相似文献
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《福建农林大学学报(自然科学版)》2020,(3)
探究PUGNAc对罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)的抑制作用.通过建立PUGNAc对NAGase的抑制动力学模型,表明PUGNAc对NAGase的抑制是一种缓慢的、可逆的反应,IC_(50)为0.18μmol·L~(-1),抑制类型为混合性;与自由酶结合的抑制平衡常数K_I为0.110μmol·L~(-1),K_(IS)为0.827μmol·L~(-1);微观速率常数k_(+0)大于k′_(+0),表明游离酶分子比抑制剂存在下的酶—底物复合物更脆弱,从而推测底物的存在对PUGNAc抑制下的NAGase起着保护作用. 相似文献
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醇、醛类有机物对中华绒螯蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响 总被引：1，自引：1，他引：1
以甲醇、乙醇、异丙醇、甲醛和戊二醛为效应物,研究它们对中华绒螯蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明:戊二醛对NAGase活力影响不大;低浓度的甲醇和乙醇对NAGase有激活作用;高浓度的甲醇、乙醇、异丙醇和甲醛对NAGase的作用为可逆抑制.甲醇、乙醇、异丙醇对NAGase表现出竞争性抑制,抑制常数(KI)分别为3.663、0.360和0.480 mol.L-1;甲醛表现为非竞争性抑制类型,其KI为0.288 mol.L-1. 相似文献
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亚硫酸钠、过氧化氢和尿素对河蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
以亚硫酸钠(Na2SO3)、过氧化氢(H2O2)和尿素为效应物,研究它们对河蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明,Na2SO3、H2O2和尿素对酶活力有不同程度的抑制作用.Na2SO3和H2O2对酶的抑制均表现为可逆反竞争性类型,它们对游离酶的抑制常数(KI)分别为254.00和136.78 mmol.L-1;尿素对酶的抑制表现为可逆的混合型抑制,它对游离酶的KI和对酶—底物复合物的抑制常数(KIS)分别为379.02和1182.00 mmol.L-1. 相似文献
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以D-果糖、葡萄糖、D-甘露糖和N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)为效应物,研究它们对猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC3.3.1.52)活力的影响及抑制机理.结果表明:在特定浓度范围内,低浓度的葡萄糖对NAGase活力表现为激活作用,而D-果糖、D-甘露糖和NAG对酶活力均表现为抑制作用,抑制程度从高到低依次为D-甘露糖、NAG、D-果糖;D-甘露糖表现为可逆的竞争型抑制,抑制常数KI为18.36 mmol·L-1;NAG表现为可逆的混合型抑制,抑制常数KI和KIS分别为16.98和55.26 mmol·L-1. 相似文献
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[目的] Rhodococcus sp.T1是一株高效的精恶唑禾草灵(FE)降解菌株,T1菌株可以断裂FE的酯键将其转化为精恶唑禾草灵酸(FA).对T1菌株胞内精恶唑禾草灵酯酶的酶学性质进行研究并对其进行分离纯化,以期为生物修复精恶唑禾草灵污染提供更多的理论依据.[方法]以酯酶的通用底物乙酸-1-萘酯作为定量测定胞内酯酶活力的底物,分析温度和pH值对酯酶活力和稳定性的影响,同时探讨金属离子对酯酶活力的影响;通过硫酸铵沉淀、疏水层析、DEAE离子交换层析和Superdex-200凝胶层析柱组合技术对精恶唑禾草灵酯酶进行分离纯化,计算了纯化过程中酯酶的比活力、纯化倍数和回收率.[结果]胞内酯酶最适反应pH值为8.0,在pH 4.0～ 10.0内处理24h活性稳定;最适反应温度为42℃,在温度50℃以下处理30 min活性稳定;1.0 mmol· L-1 Ag+对酯酶活力有强烈的抑制作用.纯化后的酯酶比活力从0.058 U· mg-1提高到21.5 U·mg-1,纯化倍数为369.5倍,回收率为3％.纯化后的粗酶经SDS-PAGE电泳后至少有4条明显的蛋白条带,通过酶谱确定精恶唑禾草灵酯酶条带的相对分子质量为42.3× 103.[结论]精恶唑禾草灵酯酶具有较好的酸碱稳定性和热稳定性,在精恶唑禾草灵污染土壤修复中可能具有较好的应用潜力. 相似文献
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茉莉花粗酶液酶解β-D-葡萄糖苷活性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以pNPG为底物,测定茉莉花中具有β-D-葡萄糖苷酶活性的粗酶液活性.最适反应条件为总反应体积1 mL,反应时间20 min,底物pNPG体积200 μL,浓度50 mmol·L-1,最适pH值6.0,最适反应温度50℃;并以此条件,研究茉莉花开放过程中粗酶液酶解β-D-葡葡糖苷的活性变化,结果表明该酶液随着茉莉花的开放,酶活性逐渐增高,直至萎蔫失水后,活性才降低. 相似文献
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液态发酵培养假海源菌ZJCN121,粗酶液经过丙酮沉淀和Sephadex G-100柱层析分离纯化得到回收率为13.5%,纯化倍数为21.8,比活为20.59 IU·mg-1的电泳纯岩藻多糖酶。采用SDS-PAGE电泳和EIF-PAGE电泳,分别测得酶的相对分子质量为60.2 kDa、等电点为4.3。该酶的最适反应温度为50℃,最适pH为6.5。其催化Fucus vesiculosus岩藻多糖的Km为5.87 mg·mL-1,Vmax为6.11 g·L-1·min-1。Ca2+、Ba2+对酶稍有激活作用,Fe2+、Cu2+则强烈抑制酶活,Mn2+、K+、Zn2+也在一定程度上抑制酶活性,Mg2+对酶的作用效果不明显。 相似文献
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为控制马铃薯在贮藏和加工过程发生的酶促褐变,对马铃薯多酚氧化酶进行分离纯化,并研究其酶学特性。采用缓冲液提取、低温离心得到马铃薯多酚氧化酶(PPO)粗酶液,粗酶液经硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25分子凝胶柱层析脱盐处理、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析分离纯化得到马铃薯PPO,进一步对其部分酶学特性进行研究。结果显示：纯化后的马铃薯PPO其比活力为283.0 U·mg-1,回收率为16.8%,纯化倍数为18.6倍;该酶最适反应温度为30℃,最适反应pH为6.5;以邻苯二酚为底物时,最适底物浓度为50 mmol·L-1。该酶对焦性没食子酸、间苯二酚的底物亲和性较强,对4-甲基儿茶酚、咖啡酸、没食子酸、对苯二酚、邻苯二酚、绿原酸的底物亲和性较低,对N-BOC-酪胺、愈创木酚亲和性很低。 相似文献
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人胎盘谷胱甘肽S-转移酶的快速分离纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
将人胎盘组织粗匀浆、超速离心、GSH-Sepharose6B亲和纯化,再经DEAE52纤维素离子交换层析,分离纯化了人胎盘谷胱甘肽S-转移酶(GST-π).纯化的酶比活力为66.94 μmol*min-1*mg-1,纯化倍数为515倍,人GST-π的最适pH值为7.5;冷冻干燥后,在-20℃可保存1年.体外实验表明,酶在37℃保温90 min,酶活性下降80%. 相似文献
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滁菊在采收后极易因酶促褐变导致其品质下降,故以滁菊鲜花为原材料,针对影响其品质劣变的多酚氧化酶展开研究,明确其三相分离纯化工艺以及酶学特性.考察了硫酸铵浓度、pH值、提取液与叔丁醇体积比、提取时间等工艺参数对滁菊多酚氧化酶纯化效果的影响,结果表明三相分离纯化滁菊多酚氧化酶的较佳工艺参数为:硫酸铵质量浓度0.4 g·mL-1,pH值6.0,粗提液与叔丁醇的体积比为1∶1.5;按照此工艺条件对纯化后滁菊中多酚氧化酶的酶学特性进行了分析,滁菊多酚氧化酶最适pH值为6.50,最适反应温度为30℃;以邻苯二酚为滁菊多酚氧化酶反应底物时,底物最适浓度为0.35 mol·L-1,酶促反应米氏常数为0.1749 mol·L-1. 相似文献
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为探寻环保低耗的柴油生产工艺,以乌桕梓酸化油为原料,利用固定化细菌A007脂肪酶催化甘油三脂的水解反应和固定化南极假丝酵母脂肪酶催化游离脂肪酸的酯化反应将其转化为生物柴油.结果表明,水解反应的最适条件为温度30℃、底物浓度60%(wt)、酶用量100 U/g,在此条件下反应12 h后甘油三脂水解率可达94%;酯化反应的最适底物摩尔比(甲醇/FFA)为5∶1,在30℃、酶用量为100 U/g的反应条件下,通过"酯化-脱水-再酯化"可使FFA的总酯化率达到98%以上.该工艺可操作性强,具有较好的应用价值. 相似文献
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热稳定性过氧化氢酶高产菌的筛选、鉴定及酶学性质研究 总被引：2，自引：0，他引：2
从无锡惠山采集的土样中分离获得一株过氧化氢酶产量较高的菌株SYBC-01,根据其形态、生理生化特性和16S rDNA序列分析,鉴定该菌为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)。初步试验表明,该菌产过氧化氢酶酶活达293.88 U/mg细胞,所产过氧化氢酶的最适反应pH 7,最适反应温度70℃,在pH6~10范围内较稳定,60℃以下热温度性较好,表观Km值为23.71 mmol.L-1,Vmax为34 672 U.mg-1蛋白。 相似文献
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采用Ni-NTA亲和层析法对基因重组菌中的羟基阿特拉津脱乙胺基水解酶(AtzB)进行分离纯化,并对该酶的典型酶学性质进行研究.纯化处理后,AtzB的纯度提高15倍,酶活回收率高达15.2％.酶学性质研究表明,AtzB的最适反应温度为40℃;最适反应pH为9.0.在最适反应条件下,AtzB对底物最大反应速率Vmax为3.17μmol·L-1·min-1,米氏常数Km为0.45 mmol·L-1.反应缓冲液中Cu(Ⅱ)对酶活力有相对较强的抑制作用(P＜0.05),Zn(Ⅱ)对酶活力影响相对较小(P＜0.05),而Co(Ⅱ)、Cr(Ⅲ)、Ca(Ⅱ)和Ni(Ⅱ)则对酶活力基本没有影响.盐度对AtzB活力影响较大,当缓冲液中NaCl浓度达到1 mol·L-1时,AtzB完全失活. 相似文献
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依次经粗提、丙酮沉淀和Sepharose Cl-4B柱层析等步骤对菜豆(Phaseolus vulgarisL.)多胺氧化酶进行了分离提纯.结果表明,纯化倍数为115.9,产率达43.90%.进一步分析该酶的部分催化性质表明,其最适底物为腐胺(Put),其次是尸胺(Cad);另外该酶对亚精胺(Spd)和精胺(Spm)也有一定的催化作用;该酶以Put和Cad为底物时的最适pH值均为7.0,以Spd和Spm为底物时的最适pH值为6.7. 相似文献