副溶血性弧菌的检测研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘小青  李日升  黄静敏  陈晶  兰全学 《安徽农业科学》2017,45(32):79-80,88

[目的]对toxR进行副溶血性弧菌特异性检测,探讨toxR靶基因能否准确检测副溶血性弧菌,从而消除其他研究者对该基因特异性的疑虑。[方法]采用SN/T1870—2016中副溶血性弧菌toxR的引物探针对副溶血性弧菌和其亲缘关系接近的弧菌标准菌株进行检测。[结果]采用实时荧光PCR方法证实该引物探针只能扩增出副溶血性弧菌,其他弧菌诸如溶藻弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌等未得到扩增。[结论]证实SN/T1870—2016中toxR的引物探针特异性高。该研究可为各检测机构提供数据支持,为副溶血性弧菌的检测与研究奠定更为坚实的基础。  相似文献   

实时荧光PCR法快速检测地中海实蝇的研究     

李京  张祥林  罗明  李亚伟  王翀  张小菊 《新疆农业科学》2016,53(6):1107

[目的]设计用于扩增地中海实蝇的特异性引物,建立快速、灵敏检测地中海实蝇的实时荧光PCR方法.[方法]采用实蝇科昆虫线粒体DNA COI基因的通用引物扩增地中海实蝇以及其它三种供试实蝇的DNA片段,经测序、比对分析,设计出扩增地中海实蝇的特异性引物,用SYBR Green实时荧光PCR方法验证该引物的特异性与灵敏度.[结果]设计的引物对DZH-F/DZH-R能特异性检测出地中海实蝇,扩增产物的溶解曲线峰值Tm为79.2.该对引物检测地中海实蝇的灵敏度为10-3 ng/μL.[结论]所建立的SYBRGreen实时荧光PCR方法检测地中海实蝇特异性强、灵敏度高.  相似文献   

转基因大豆MON87751品系特异性实时荧光定量PCR检测方法建立     

刘二龙  郑冠津  王毅谦  李志勇  魏霜  关丽军  卢丽  蒋湘  刘金华  王振华 《安徽农业科学》2022,50(4):102-105

[目的]为完善我国转基因检测方法体系,建立转基因大豆MON87751品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction, PCR)检测方法。[方法]根据MON87751的3′端邻接区序列设计特异性引物和探针,建立MON87751品系特异性实时荧光PCR检测方法,并测定该方法的灵敏度、特异性及可重复性。[结果]灵敏度测试显示,其定量下限为40拷贝;重复性试验显示其相对标准偏差在可接受范围内。[结论]该研究建立的MON87751品系特异性实时荧光PCR检测方法特异性良好,灵敏度高,有良好的可重复性,适合对转基因大豆MON87751品系进行检测鉴定。  相似文献   

马铃薯疮痂病的实时定量PCR检测方法     

邓宽平  丁海兵  雷尊国 《浙江农业科学》2012,1(11):0-1546

应用实时定量PCR技术对马铃薯疮痂病进行检测,在Nec1、TxtAB致病基因上进行引物探针的设计,在Nec1基因上筛选获得最佳探针引物。本方法重复性好,特异性强,灵敏度高,可实现准确定量。  相似文献   

实时荧光PCR检测瓜类蔓枯病菌的方法研究     

王翀  张小菊  张祥林  张伟  张瑜  李亚伟  孙燕飞 《新疆农业科学》2015,52(8):1472

[目的]建立瓜蔓枯病菌(Didy mella bryoniae)的实时荧光PCR方法,为瓜蔓枯病菌快速分子检测奠定基础.[方法]通过Genebank网上已公布序列,选取瓜蔓枯病菌beta-tubulin(tub2)基因作为目的基因,设计了特异性引物和Taq Man探针,并对该引物和探针的反应条件进行优化.[结果]采用研究所设计的引物和探针对瓜上的其他菌株及近似菌株进行检测,该引物和探针可高度灵敏地检测到瓜蔓枯病菌.采用实时荧光PCR方法,25μL体系中只要有8.9 pg的核酸量就可以被检测到,检测灵敏度达到356 fg/μL,比普通PCR灵敏度高10倍.[结论]采用研究所设计的引物和探针对田间采集的病株和未知样品的检测,验证了引物和Taq Man探针的特异性.  相似文献   

基于实时荧光PCR技术的食品中致敏原的检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

董薇  曹际娟  郑秋月  吴元华 《沈阳农业大学学报》2009,40(2)

采用实时荧光PCR技术检测食品中致敏原芝麻成分.结果表明:采用芝麻管家基因2Salbumin mRNA基因的特异性检测引物和探针进行检测时,26种样品经实时PCR扩增,只有白芝麻和黑芝麻产生阳性的荧光信号,其余样品均不产生荧光信号.灵敏度试验结果表明,该方法对芝麻致敏原基因的检测灵敏度较高,可达到1mg·kg-1,符合痕量检测要求.  相似文献   

马达加斯加龙树实时荧光定量PCR鉴定方法的研究     

李井干  吴晶  伏建国  杨晓军  张明哲 《安徽农业科学》2022,(12):168-170

[目的]通过设计特异性引物与荧光探针,建立马达加斯加龙树（Didierea madagascariensis）实时荧光定量PCR鉴定方法。[方法]提取26份龙树科植物基因组,并用内源基因检测DNA质量;根据GenBank中已发表的马达加斯加龙树的PEPC基因序列,设计特异性引物与荧光探针,通过检测26份供试样本,检测该方法的特异性;将样品DNA进行10倍梯度稀释,以检测实时荧光定量PCR方法的灵敏度。[结果]只有3份马达加斯加龙树样本出现典型的扩增曲线,其他23份龙树科植物无典型的扩增曲线;核酸原液与10^-1～10^-4倍稀释液样本均能够得到典型扩增曲线,标准曲线的决定系数（R²）为0.995,检测限量为5.2×10^-3 ng/μL。[结论]该方法特异性强、灵敏度高,可有效地应用于马达加斯加龙树的鉴定。  相似文献   

一种牛肉检测的荧光实时定量方法研究     

马建荣  余永红  何远财  张雅慧  谭杰峰  崔水龙  许锦涛 《安徽农业科学》2022,50(3):198-200

[目的]开发一种用于牛源性成分检测的荧光实时定量检测方法。[方法]通过序列比对后,以牛源性线粒体DNA中cytb基因为模板,设计特异性的引物和探针,并以不同来源的DNA为模板,分析引物和探针的特异性。对牛源性DNA进行梯度稀释后,分析不同浓度下扩增曲线,分析检测方法的灵敏度。以牛源性DNA稀释液为模板,进行10个平行扩增试验,分析检测方法的精密度。[结果]该研究所用的引物和探针对牛源性DNA具有明显的扩增曲线,而对非牛源性(鸡、鸭、猪、人)DNA模板不进行扩增。灵敏度分析结果显示,该检测方法对浓度仅为24.4 pg/μL牛源性DNA模板仍进行阳性扩增。精密度分析显示,10个平行试验扩增曲线相似,Ct值的标准差(SD)仅为0.41,精密度(CV)也仅为1.6%。[结论]该研究开发的牛肉成分检测的荧光实时定量方法特异性高,仅对牛源性DNA发生扩增。同时该方法灵敏度也很好,检出限为24.4 pg/μL,精密度也很高,重复性良好,适用于市场上肉制品中牛源性成分的检测。  相似文献   

实时荧光定量PCR法检测抗虫棉Bt基因拷贝数方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

闫喜中  张锐  孟志刚  孙国清  周涛  郭三堆 《安徽农业科学》2008,36(26)

[目的]建立并完善Taqman实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法。[方法]通过Bt基因序列,利用软件Primer5.0设计引物和探针,然后利用10倍系列稀释含有目的基因的质粒pG4AB,进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线。[结果]抗虫基因拷贝数与Ct值的关系为Ct=-3.549 632X+43.783 512,相关系数R2为0.997 867。[结论]实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法具有特异性好、灵敏度高的特点。  相似文献   

实时荧光定量PCR法测定禽蛋中沙门氏菌   总被引：1，自引：0，他引：1  

张波  汪永信 《现代农业科技》2012,(10):333-335,337

为建立禽蛋中沙门氏菌的荧光PCR法检测方法,根据invA基因序列设计实时荧光定量PCR引物和探针,常规方法提取菌体DNA,以55℃为退火温度进行荧光PCR扩增,并进行方法学考察。结果表明:阳性对照品和沙门氏菌为模板的样品有明显扩增曲线,其他菌株为模板的样品无扩增曲线,特异性、灵敏度和重现性考察提示实时荧光定量PCR方法符合检测方法学要求。实时荧光定量PCR法的应用,提高了禽蛋制品中沙门氏菌检测的灵敏度、缩短了检测时间、简化了检测流程。  相似文献