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建立了检测狗血浆中硝唑尼特主要代谢物替唑尼特浓度的高效液相色谱法,并用于药代动力学研究。该法采用Scienhome Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.02 mol/L磷酸盐缓冲液(pH值为2.5()505∶0)为流动相,流速为1.0 ml/min;紫外检测波长为360 nm;柱箱温度为30℃;进样量为30 lμ。结果表明:在0.1～12.5μg/ml的浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,相关系数为0.999 6(n=5;)最低检测浓度为0.02μg/ml;日内RSD<4.9%(n=6);日间RSD<5.7%(n=6);回收率为99.63%～112.7%。该法具有快速、简便、灵敏的特点,适用于硝唑尼特的药代动力学研究。 相似文献
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[目的]为了取得更好的PCR扩增效果,建立高效的PCR反应体系。[方法]首先通过6因素5水平的正交试验对连香树RAPD-PCR反应体系优化组合,然后不再改变该结果中的其他条件,而仅改变Taq酶的浓度及在反应体系中加入不同浓度的牛血清白蛋白（BSA）。[结果]在25组Taq酶和BSA浓度组合中,BSA改善连香树RAPD-PCR反应的最佳浓度为0.6μg/μl,Taq酶浓度可由1.0μg/μl减少至0.4μg/μl。最后优化得到的20.0μl连香树RAPD反应体系为：25mmol/LMg2＋2.0μl,dNTPs0.4μl,1U的TaqDNA酶1.0μl,10×Buffer缓冲液2.5μl,0.5OD引物0.8μl,约25ng模板0.6μl。[结论]BSA的适当加入减少了Taq酶的用量,在保证更好的试验效果前提下,节约了试验成本。 相似文献
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[目的]探索滤纸壳聚糖膜固定乙酰胆碱酯酶(AChE)的最佳条件。[方法]以滤纸壳聚糖膜为载体,戊二醛为交联剂,牛血清白蛋白(BSA)为保护剂,进行AChE的固定。并对固定化酶的理化性质进行研究。[结果]固定AChE的最佳条件为将50μl 150 U/mlAChE液,50μl 5%(V/V)戊二醛溶液,100μl 1%(W/W)BSA,pH 8.0的0.2 mol/L的PBS缓冲液配制成1 ml酶液,滤纸壳聚糖膜浸于该酶液4℃固定8 h。固定化酶的最适反应温度为37℃,最适pH为8.0,能够重复利用4次以上。[结论]该研究为利用AChE快速检测蔬菜水果中有机磷农药残留提供了理论依据。 相似文献
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通过不同菌龄、酶液、缓冲液?稳定剂系统、酶解时间、再生培养基组合等条件对木霉T25、T55原生质体制备和再生的影响研究,结果表明,木霉T25、T55原生质体制备和再生的最适条件为:崩溃酶13 mg/mL,0.2 mol/L磷酸缓冲液(PBS),pH5.8和0.6 mol/L NaC l组成的缓冲液稳定系统,木霉T25菌龄为20 h,木霉T55菌龄为26 h的菌丝体在30℃下,酶解3h后,可分别获得原生质体数量9.0×106个/mL、6.33×106个/mL,两菌的再生培养基都是以加入0.5%酵母膏和0.5%泛酸钙的改良Czapek与NaC l的组合培养基,T25与T55的再生率分别为1.150%和0.785%。 相似文献
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[目的]探索可食用的猪血浆蛋白粉的制备方法。[方法]采用酶解法水解猪血浆,利用活性炭对酶解液脱色,制备猪血浆蛋白粉。比较在不同脱色条件下活性炭的脱色效果,以确定最佳脱色工艺条件。[结果]活性炭对猪血浆酶解液的脱色率为90.60%。脱色温度对血浆酶解液的脱色效果影响显著,而活性炭用量和脱色时间对脱色效果无显著影响,它们对脱色效果的影响顺序为:脱色温度>活性炭用量>脱色时间。利用活性炭对猪血浆酶解液进行脱色的最佳工艺条件为:活性炭用量为4.00%,脱色时间为30 min,脱色温度为50℃。[结论]该试验制得的血浆蛋白粉呈淡黄色粉末状、无腥味、无杂质、蛋白质含量为68.25%、室温下在水中的溶解度达92.35%,可广泛应用于食品行业。 相似文献
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兔的血浆样品经过β-葡萄糖醛酸酶和硫酸酯酶酶解、提取、C18固相萃取小柱富集净化后,在Agilent SB-C18柱(250mm×4.6 mm,5μm)上,以甲醇-0.4%磷酸(55∶45)为流动相,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为360 nm,对山奈素进行测定的结果表明,血浆样品的最佳酶解条件为:β-葡萄糖醛酸酶和硫酸酯酶的终用量分别为400和20 U.mL-1,酶解时间为2h;血浆中山奈素含量的线性范围为0.019-0.608μg.mL-1,方法回收率为80.23%-84.27%,日内和日间精密度的RSD分别≤7.32%、10.17%.可见,本试验建立的高效液相色谱测定方法可以准确、灵敏地测定兔血浆中山奈素的含量,适用于山奈素血药含量检测和药代动力学研究. 相似文献
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[目的]测定白花除虫菊四倍体株系与二倍体对照株系试管苗和田间叶片中SOD、POD及APX酶的活性,为选育抗性强的白花除虫菊优良四倍体品种提供理论依据。[方法]先加入预冷的提取缓冲液（pH=7.5,0.05 mol/L Tris-Hcl缓冲液）冷冻离心提取叶片中的各酶液。蛋白含量和SOD活性的测定按南京建成生物工程研究所试剂盒说明书操作。POD总活力测定：100μl酶液用Tris-HCl（pH=7.0）溶液稀释至1 ml,准确加入0.1%的愈创木酚1 ml,30℃水浴10 min后,立即测定溶液在470 nm处的吸光度,然后准确加入0.08%的H_2O_2 100μl,充分混匀,反应2 min时立即测定溶液在470 nm处的吸光度,求出反应前后的吸光度差值。酶的比活力用ΔOD_（470）/（mg·min）表示。APX活性测定：3 ml反应液中含50.0mmol/L PBS（pH=7.0）,0.1 mmol/L EDTA,0.1 mmol/LH2O2,0.5 mmol/LASA,最后加入100μl酶液。在室温下记录10 s,30 s时290 nm处吸光度的变化。酶活单位定义为每小时氧化1μmol ASA的酶量为一个酶活单位。[结果]四倍体株系与二倍体对照株系比较,其保护酶系统中各种抗氧化酶的活性都能得到普遍提高,并且各株系的田间样品与试管苗样品的各抗氧化酶活性呈正相关,因此可以应用组织培养技术在育种的初期试管苗阶段进行早期筛选,缩短选育时间,节约人力物力。[结论]试管苗期间各株系的抗氧化酶活性可以作为筛选抗病抗逆性强的白花除虫菊优良株系的参考指标。 相似文献
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[目的]建立和优化藤三七稳定ISSR-PCR反应体系和扩增程序。[方法]采用5因素4水平的正交试验和单因子梯度优化相结合的方法。[结果]适用于藤三七的25μl ISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度分别为:10×buffer 2.5μl,dNTPs 0.15 mmol/L,Mg2+2.0mmol/L,Taq酶1.0 U,引物0.5μmol/L,DNA 100 ng。[结论]对于藤三七ISSR-PCR试验,一次正交试验完全可以建立满足要求的ISSR-PCR体系。 相似文献
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[目的]优化SSR技术鉴定玉米品种真实性反应体系。[方法]对SSR技术参数（PCR反应体系、退火温度和电泳时间）进行了优化,并对辽宁省主推的10个玉米品种进行了鉴定。[结果]最优PCR反应体系为：灭菌超纯水14.60μl,10×Buffer（Mg2＋）2.00μl,dNTPs1.20μl,Taq酶0.20μl,正、反向引物各0.50μl及DNA原液1.00μl。退火温度和电泳时间对PCR扩增结果的影响较大,所选的引物不同,在同一条件下呈现理想电泳条带所需的最佳退火温度和电泳时间不同。[结论]该体系应用于杂交玉米品种的真实性快速鉴定是可行的。 相似文献
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SSR技术鉴定玉米品种真实性反应体系的优化研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]优化SSR技术鉴定玉米品种真实性反应体系。[方法]对SSR技术参数（PCR反应体系、退火温度和电泳时间）进行了优化,并对辽宁省主推的10个玉米品种进行了鉴定。[结果]最优PCR反应体系为：灭菌超纯水14.60μl,10×Buffer（Mg2＋）2.00μl,dNTPs 1.20μl,Taq酶0.20μl,正、反向引物各0.50μl及DNA原液1.00μl。退火温度和电泳时间对PCR扩增结果的影响较大,所选的引物不同,在同一条件下呈现理想电泳条带所需的最佳退火温度和电泳时间不同。[结论]该体系应用于杂交玉米品种的真实性快速鉴定是可行的。 相似文献
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[目的]为研究木霉SQR-T037对茄子幼苗的促生效应。[方法]以"种都墨茄"为试验材料,采用盆栽土培的方法,设无机肥CK、有机肥OF、哈茨木霉SQR-T037菌液灌根3个处理。[结果]木霉SQR-T037菌液灌根处理相对于无机肥CK和有机肥OF处理能在0.05水平显著提高茄子生物量,但对茄子叶片的叶绿素SPAD值和POD活性无明显影响;SQR-T037菌液灌根处理对茄子根系的生长无明显的促进作用,但对茄子幼苗的根系活力有一定的促进作用;SQR-T037菌液灌根处理能在0.05水平显著增加茄子幼苗的干物量积累。[结论]木霉SQR-T037对茄子苗期的生长具有显著的促生效应。 相似文献
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[目的]为利用ISSR标记研究萱草的遗传多样性和和辅助育种奠定基础。[方法]从萱草中提取基因组DNA,建立萱草的ISSR-PCR反应体系,并通过正交试验对其进行优化。[结果]萱草的最佳ISSR-PCR反应体系为:ddH2O16.8μl、2.5 mmol/LdNTP2.0μl、10×buffer 2.5μl、10μmol/LPrimer0.3μl、50 ng/LDNA3μl、Taq酶1 U,总体积25μl。萱草的最佳ISSR扩增反应程序为:94℃变性5 min,94℃变性45 s、48.3℃退火1 min、72℃延伸2 min,共38个循环,最后72℃延伸7 min。该反应程序下进行的ISSR扩增,扩增产物最多,银染的效果最好。[结论]该研究建立了萱草ISSR-PCR的最佳反应体系和反应程序,通过ISSR扩增可获得清晰、稳定的条带。 相似文献
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干旱胁迫对防风叶片保护酶活性、渗透调节物质含量及药材品质的影响 总被引：1，自引：1，他引：1
【目的】探讨干旱条件下防风Saposhnikovia divaricata保护酶系统与防风适应干旱的生理机制。【方法】以1年生防风为材料,设置3个梯度的水分供给,包括充分供水对照(CK)、轻度干旱胁迫(LD)和重度干旱胁迫(SD)处理,研究干旱胁迫对防风叶片保护酶活性、渗透调节物质含量及2种色原酮(升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷)总含量的影响。【结果】试验初期,不同处理下超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性和脯氨酸含量均呈增加趋势,在中期达到最高值后开始呈现下降趋势。不同处理下丙二醛含量在整个试验期持续上升。试验初期,各处理2种色原酮总含量均迅速增加,LD和SD处理在试验中期达到峰值,随后开始下降,而CK处理在试验中期和后期平缓上升。LD和SD处理的3种酶活性、渗透调节物质含量及2种色原酮总含量变化幅度大于CK,且LD和SD处理各项指标的峰值均大于CK的相应数值。各水分处理下CAT活性、2种色原酮总含量分别与SOD活性显著相关。【结论】在防风栽培过程中,适当施加干旱胁迫可促进叶片保护酶活性、渗透调节物质含量的提高,有利于防风植株健壮生长并最终提高2种色原酮的含量。 相似文献
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乙烯及1-MCP处理对不同开花指数牡丹切花开放衰老进程和水分平衡的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
[目的]研究乙烯及1-MCP对不同开放阶段‘洛阳红’牡丹切花开放及衰老进程中切花品质及水分平衡的影响。[方法]以开花指数为1、2、3级的‘洛阳红’牡丹切花为试材,测定了其开放及衰老进程中花径增大率、开花指数、水分平衡及瓶插寿命对不同处理的响应。[结果]采用10.0μl/L外源乙烯处理6 h加快了切花的开放进程,缩短了切花的瓶插寿命及最佳观赏期持续时间,而采用1.0μl/L1-MCP处理6 h则延缓了切花的开放进程,延长了切花的瓶插寿命,但抑制了切花的正常开放。对水分平衡值的研究表明,水分平衡值的动态变化是影响‘洛阳红’牡丹切花衰老的重要因素,1-MCP处理改善了切花的水分平衡,使水分平衡值为0的时间延后。[结论]1-MCP主要通过延缓‘洛阳红’牡丹切花的开放进程来延长切花的瓶插寿命。 相似文献
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[目的]研究生物磁效应对蛹虫草（Cordyceps militaris）液体发酵培养的影响.[方法]利用场强为0.10T、0.25 T、0.40T恒定磁场,以流速为1 m/s,分别对普通水进行9次处理,串联（SC）磁场处理3次的磁处理水,用于液体培养蛹虫草,研究了生物磁效应对蛹虫草胞外蛋白酶、淀粉酶、多酚氧化酶、虫草素、虫草酸、多糖含量及菌丝干重的影响,并且对胞外酶活性与以上指标相关性进行了分析.[结果]0.40 T处理能显著促进蛹虫草胞外蛋白酶和多酚氧化酶活性,提高菌丝干重及虫草酸含量,相比对照组,其酶活高峰分别提高了38.98％和16.75％,菌丝干重和虫草酸分别提高了27.12％和22.93％;0.10 T处理可显著提高胞外淀粉酶活性和多糖含量,相比对照组,酶活高峰提高了34.94％,多糖含量提高了18.32％;0.25 T处理有利于虫草素的积累,比对照组提高了16.49％.相关性分析结果表明,胞外蛋白酶活性与菌丝干重、虫草酸含量在0.05水平呈显著正相关,为关键酶.[结论]不同场强处理的磁化水均能显著提高蛹虫草液体培养胞外酶活性、菌丝干重及主要药用成分含量,但影响规律存在一定的差异性,可为发酵生产蛹虫草药用成分提供理论依据和参考. 相似文献