对转蚕丝芯蛋白轻链基因棉花的分析   总被引：5，自引：0，他引：5  

上官小霞  王凌健  李燕娥  梁运生  吴霞 《作物学报》2007,33(5):697-702

利用根癌农杆菌介导转化法,将棉纤维特异表达启动子GAE6-3A驱动的蚕丝芯蛋白轻链基因（FBN）转入陆地棉R15中。T₀代转基因再生株FNB基因PCR检测阳性率达70%。随机选取4个转基因株系T₁代材料的Southern杂交显示,3个为双拷贝插入、1个为单拷贝插入;Northern分析结果证实FBN基因在转基因棉纤维中表达。转基因后代的纯合选育主要以田间卡那霉素检测结合实验室内GUS组织化学检测进行,其中4个株系已获得了T₃代转基因材料,其他若干个转化子也获得T₁代和T₂代的不同材料。对6个转基因棉花株系后代纤维检测结果表明,蚕丝芯蛋白轻链基因对棉花纤维品质的影响主要体现于对纤维强度的改良。H18、H32、H34株系转基因棉花后代纤维强度较对照显著提高,其中H18纤维强度提高12.3%。  相似文献   

转兔角蛋白基因改良棉纤维品质研究   总被引：10，自引：5，他引：10  

张震林  刘正銮  周宝良  陈松  张香桂 《棉花学报》2004,16(2):72-76

通过花粉管通道转基因技术,将E6启动子驱动的兔角蛋白基因导入高产棉花品种苏棉16号。所用转基因表达载体还含有选择标记基因NPTⅡ(卡那霉素抗性基因)及Gus报告基因。对转化体后代的检测结果表明,T1代有2.1%呈现Gus阳性,在Gus阳性株中84.6%具有卡那霉素抗性。用依据E6启动子序列和兔角蛋白基因序列设计的两对引物,对经过上述筛选的植株进行PCR检测,多次重复,最终确定3株结果稳定的转兔角蛋白基因棉株。从品质分析结果看,这3个株系成熟棉纤维的品质部分得到改良,尤其比强度有较大幅度提高,与转基因受体相比平均提高6.3cN·tex 1。  相似文献   

35S启动子甲基化引起棉花转基因沉默   总被引：5，自引：2，他引：3  

王海海  吴慎杰  李飞飞  陈天子  蒋彦婕  琚铭  赵君  吕艳辉  张天真  郭旺珍 《棉花学报》2008,20(4):274-280

 用带PBI121质粒的农杆菌LBA4404菌株转化泗棉3号胚性愈伤组织,获得的再生植株进一步对gus和nptⅡ基因进行PCR跟踪检测,共得到97株阳性转基因植株。GUS组织化学检测发现,97株转基因幼苗中有10株GUS检测阴性,嫁接后,只成活一株。利用来源于同一愈伤系的GUS检测阳性植株作为对照,对这一GUS检测阴性的植株进行gus基因沉默机理研究。Southern分析表明,该GUS检测阴性植株与GUS检测阳性植株有相同拷贝数。GUS组织化学检测和RT-PCR分析显示,gus基因在GUS检测阴性植株中没有表达,而nptⅡ基因在这两株转基因棉花中都表达。用限制性内切酶-PCR法分析35S启动子区甲基化发现：GUS检测阴性植株35S启动子区TATA box的HapII/MspI酶切位点发生甲基化,而GUS检测阳性植株该位点没有甲基化。以上研究表明,这株gus沉默的转基因棉花可能是由于其35S启动子区甲基化引起的。  相似文献   

南瓜韧皮部特异性启动子在转基因棉花中的表达     

罗晓丽  陈晓英  肖娟丽  张安红  王志安  田颖川  吴家和 《棉花学报》2007,19(6):431-435

以自行构建的重组南瓜韧皮部特异启动子dENP构建了植物表达载体pBII2.利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA44O4介导转化棉花(Gossypium hirsutum L.)品种珂字312,共获得转pBII2和对照pBI121的抗卡那霉素棉花再生植株243株,筛选出172株为转基因阳性植株.Southern blot分析确证外源Gus基因插入拷贝数在1个或2个以上.对这些转基因棉花植株进行Gus染色结果表明dENP和CaMV35S启动子一样均能驱动Gus基因的表达,前者仅在棉花的韧皮部内特异表达,而CaMV35S启动子驱动的Gus基因为组成性表达.Gus酶活力测定结果进一步表明dENP和CaMV35S启动子驱动Gus基因表达水平相当,但是转pBII2棉花植株的Gus富集在韧皮部组织.证明了dENP启动子驱动的外源基因在棉花中具有韧皮部特异而高效表达的特征,从而可用于棉花抗病、抗蚜虫转基因研究.  相似文献   

棉花种子特异表达α球蛋白A基因启动子的功能分析     

王芳  魏琦超  张锐  孙国清  陈全家  石书兵  曲延英  郭三堆 《棉花学报》2016,28(3):189-198

研究植物种子特异启动子具有重要的理论和实际意义。本文研究了棉花α球蛋白A基因启动子,该启动子序列全长为1640 bp,作用元件分析表明该区域除了具有核心调控序列外,还含有多个与组织特异性相关的顺式作用元件。设计其5'端构建4个不同长度的缺失、融合GUS基因的表达载体,并通过蘸花法分别转化拟南芥。转基因拟南芥GUS表达分析结果表明,该启动子能驱动GUS基因在胚、露白的种子、子叶期的幼苗中表达,而二叶期的幼苗、根、茎、莲座叶、茎生叶和花苞组织则没有表达,说明棉花α球蛋白A基因启动子是一个种子特异性启动子。208 bp长度的启动子足以维持其种子特异表达功能,而且在启动子的-684和-208区域之间可能存在负调控元件或负调控区域。分析棉花α球蛋白A基因启动子是一个种子特异性启动子,其基本启动子区域不长于208 bp。  相似文献   

中棉(Gossypium arboreum)光诱导基因Gacab启动子在转基因烟草中的功能缺失分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

王旭静  李为民  唐巧玲  贾士荣  王志兴 《作物学报》2009,35(6)

分离了金华中棉(Gossypiun arboreum var.jinhua)光诱导基因cab 5'上游的调控序列1 009 bp,并对其功能进行了分析,证明获得的这一DNA片段具有驱动光诱导表达的功能.为了进一步分离具有最大转录活性的最小光诱导启动子,根据光诱导表达调控元件所在的位置,构建了Gacab P和197 bp、504 bp、779 bp的5'端缺失体,并将这些缺失体分别与gus(uid A)基因融合,构建植物表达载体.用农杆菌介导法转化烟草,获得转基因烟草.GUS组织化学分析表明,转基因烟草的T1代种子在光下培养时,只有Gacab P驱动gus基因在转基因烟草的叶片表达,其他3个启动子驱动gus基因在转基因烟草的整个植株中均有表达;当转基因烟草的T1代种子在暗中萌发及培养时,GacabP驱动gus基因在转基因烟草中无表达,其他3个启动子驱动gus基因在转基因烟草的整个植株中均有表达.GUS定量分析表明,-504～-1 bp的启动子缺失体启动活性最高,比CaMV35S启动子高0.6倍.上述结果表明只有全长的Gacab启动子具有光诱导和绿色组织特异表达特性,且-504～-1 bp的启动子缺失体启动活性最高.  相似文献   

一个棉花纤维伸长期优势表达启动子pGhFLA1的克隆与鉴定     

胡海燕  刘迪秋  李允静  李阳  涂礼莉 《作物学报》2017,43(6):849-854

棉花纤维是研究单细胞生长发育的良好模式细胞,寻找在棉花纤维发育时期优势表达的启动子,对于棉花纤维发育的功能基因组研究非常重要。本试验对发掘到的一个在纤维伸长期优势表达基因GhFLA1的启动子进行克隆,并将该启动子融合GUS转化棉花和烟草。转基因棉花的GUS蛋白染色表明,在0~20 DPA(days post anthesis)的纤维中检测到GUS蛋白,同时在柱头、雄蕊、萼片、胚根、子叶和根中也检测到GUS蛋白,但在花瓣、叶片和苞叶中没有检测到。同时GUS定量检测结果显示,pGhFLA1驱动GUS蛋白积累的高峰是在20 DPA的纤维中,其驱动GUS表达的能力是Ca MV 35S::GUS的22倍。转基因烟草组织化学染色显示pGhFLA1可以驱动GUS在叶片及叶片的表皮毛中优势表达,同时在子房、柱头、花药、苞叶、花柄基部、花瓣、种子等生殖器官上也存在GUS蛋白。启动子pGhFLA1在棉花纤维和烟草叶片的表皮毛中优势表达,可用于棉花纤维功能基因组研究,在改良纤维品质育种中具有潜在的应用价值。  相似文献   

花椰菜花叶病毒（CaMV）35S启动子在转基因棉花中的表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

焦改丽  孟钊红  聂安全  南芝润  张换样  李俊峰  王娇娟  赵俊侠  李燕娥  郭三堆 《作物学报》2004,30(11):1135-1139

利用GUS作为报告基因，通过GUS组织化学定位法检测棉花转化愈伤组织、体细胞胚，R0代棉花根、茎、叶、花器官以及正在发育的胚GUS基因表达情况，详细阐述了CaMV 35S启动子在棉花细胞中的表达轮廓。结果表明，在愈伤组织细胞有丝分裂和增殖过程中GUS基因能稳定表达并遗传给后代细胞；在根、茎、叶细胞中检测到GUS表达活性。在  相似文献   

中棉(Gossypium arboreum)光锈导基因Gacab启动子在转基因烟草中的功能缺失分析     

王旭静  李为民  唐巧玲  贾士荣  王志兴 《作物学报》2009,35(6):1006-1012

分离了金华中棉(Gossypiun arboreum var. jinhua)光诱导基因cab 5'上游的调控序列1 009 bp,并对其功能进行了分析,证明获得的这一DNA片段具有驱动光诱导表达的功能。为了进一步分离具有最大转录活性的最小光诱导启动子,根据光诱导表达调控元件所在的位置,构建了Gacab P和197 bp、504 bp、779 bp的5'端缺失体,并将这些缺失体分别与gus (uid A)基因融合,构建植物表达载体。用农杆菌介导法转化烟草,获得转基因烟草。GUS组织化学分析表明,转基因烟草的T1代种子在光下培养时,只有Gacab P驱动gus基因在转基因烟草的叶片表达,其他3个启动子驱动gus基因在转基因烟草的整个植株中均有表达;当转基因烟草的T1代种子在暗中萌发及培养时,Gacab P驱动gus基因在转基因烟草中无表达,其他3个启动子驱动gus基因在转基因烟草的整个植株中均有表达。GUS定量分析表明,–504 ~ –1 bp的启动子缺失体启动活性最高,比CaMV35S启动子高0.6倍。上述结果表明只有全长的Gacab启动子具有光诱导和绿色组织特异表达特性,且–504 ~ –1 bp的启动子缺失体启动活性最高。  相似文献   

棉花GhTCP2基因启动子分离及其在幼嫩组织的表达分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

邢进  刘伟娜  赵琳琳  赵金凤  张文会  赵宝华  李学勇 《棉花学报》2013,25(3):197-204

 采用Genome walking的方法分离了GhTCP2基因的启动子区,应用在线分析软件PLACE对该启动子序列进行分析,发现含有多个与细胞周期、细胞分裂素、生长素相关的顺式作用元件。构建了GhTCP2基因启动子驱动报告基因GUS的植物表达载体并转化了模式植物拟南芥。转基因拟南芥的组织化学染色显示,GUS基因主要在根尖、幼叶、顶芽、侧芽和花蕾中表达。这说明棉花GhTCP2基因启动子可以驱动目的基因在植物的幼嫩组织表达,该启动子有望在植物抗虫基因工程中应用。  相似文献   

Greenhouse evaluation and inheritance analysis of transgenic cotton expressing <Emphasis Type="Italic">PTM3</Emphasis>, a MADS-box gene of Aspen     

Esakky Ramachandran  Suchit Ashish John  Gerard Abraham  Partha Sarathi Bhattacharya 《Journal of Crop Science and Biotechnology》2011,14(4):275-279

The PTM3 (MADS-box) gene characterized from flower of Aspen was ectopically expressed in cotton and was found to result in desirable agronomic traits. Among several transgenic lines, the PTM3 cotton event-10 was found to flower significantly earlier than the control and yield better [Ramachandran et al. (2011)]. We report our findings on performance based on greenhouse evaluation and inheritance of PTM3 cotton event-10. The T₁ progeny of event-10 were grown in pots under RBD design. The progeny were confirmed by kanamycin imbibition test, PCR, and GUS assay which showed the segregation of transgene at about 3:1 ratio. GUS assay was performed with pollen from all transgenic plants; plants that expressed gus in all pollen versus those that showed segregation for expression were found to be at a ratio of 1:2. Similar to observations made in the T₀ generation of event-10, the agronomic evaluation of T₁ progeny exhibited, on an average, earliness of 13 days in flowering, 13.5 days in crop maturity, and 22% of yield enhancement. The T₂ progeny of homozygous lines were grown on field soil in the greenhouse under strip trial design to see the effect as observed from potted plants of T₁ progeny. Inheritance of transgene cassette to T₂ progeny was confirmed by the same tests used to analyze T₁ progeny. As exhibited by T₀ and T₁ progenies, the T₂ progeny also showed earliness of 8 days in flowering, 12 days in crop maturity, and 17% of yield enhancement. The data generated from the progeny over two generations confirms that the PTM3 cotton event-10 is superior in agronomic characters as compared to non-transgenic cotton and is of interest for breeding shorter duration varieties with improved yield.  相似文献   

用核基质结合区(SAR)序列提高小麦最小表达框转基因表达的稳定性     

苏瑞波  陈明  徐兆师  李连城  马庆  马有志 《作物学报》2014,40(1):63-71

采用最小表达框技术转化植物可以规避由骨架序列引起的安全风险。核基质结合区序列SAR (scaffold attachment region)可作为边界元件与核基质结合阻挡转基因片段邻近染色质区的作用与影响, 提高外源基因稳定性。本研究在最小表达框序列两端添加SAR序列, 提高小麦最小表达框转基因表达的稳定性, 提高转化基因的表达效率。首先, 以GUS为目的基因构建带有SAR序列的最小表达框, 以科农199为受体进行基因枪转化, 同时以不加SAR序列的最小表达框片段为对照。带有SAR序列的最小表达框片段共轰击857个幼胚, T₀代获得40株再生植株, PCR检测到16株阳性植株, 转化效率为1.87%; 对这16个阳性单株进行GUS染色, 15株显色; 从来自4个T₀阳性植株的18个T₁代植株中随机选取18株进行PCR和GUS染色检测, 有15株表现为阳性。不带SAR序列的对照片段轰击1012个幼胚, 获得31株再生植株, 其中5株PCR阳性, 转化效率0.49%, 这5个阳性植株中仅2株为GUS染色阳性; 来自于5个T₀代PCR阳性株系的10个T₁代单株中没有发现PCR和GUS染色阳性株。表明SAR序列可以提高基因枪转基因效率和目的基因表达稳定性。为了创制抗旱转基因小麦, 以来自大豆的抗旱相关转录因子基因GmDREB3为目的基因, Bar基因为筛选标记基因, 转化受体小麦济麦22, 共轰击6045个幼胚, 获得再生植株130株, PCR检测阳性植株30株, 转化效率为0.50%; 随机选取6株PCR阳性植株进行RT-PCR分析, 其中5株可检测到外源基因的转录。进一步对这5株RT-PCR阳性植株插入片段完整性进行分析, 其中4株插入片段基本完整。通过real-time PCR分析, 发现T₀代6个RT-PCR阳性植株的外源GmDREB3的拷贝数为1~3个。以上结果证明, 在最小表达框两端加上SAR序列后可以提高小麦最小表达框转基因表达的稳定性。  相似文献   

运用农杆菌介导法将PTA和反义Wx双基因导入水稻的研究     

邹良平  起登凤  李平  王世全  李双成  江洪 《中国农学通报》2005,21(3):64-64

利用根癌农杆菌将含多基因(hyg选择标记基因、反义Wx 基因、PTA基因、GFP和GUS报告基因)的pCAMBIA1304载体导入水稻品种(501R、中花9号和日本晴)的幼胚愈伤组织,分别在含35mg/L、45mg/L和65mg/L潮霉素浓度的筛选培养基上筛选获得抗性愈伤。后经PCR检测,从415株T0代再生植株中选出92株(其中501R、中花9号和日本晴分别为4株、43株和45株)。对这些转基因后代植株进行Southern blotting分析表明：hpt、反义Wx 和 PTA基因已经整合进植物基因组中,绝大多数转基因植株后代的表型正常。成熟种子直链淀粉含量分析表明,部分转基因植株的T1代种子中的直链淀粉含量有部分程度的下降,最低的已下降至6.3%,与对照相比下降了9.8%。  相似文献   

利用农杆菌介导法将反义Wx基因导入水稻的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

邹良平  起登凤  李平  王世全  李双成  江洪 《分子植物育种》2004,2(6):765-770

利用根癌农杆菌将含多基因(hpt选择标记基因、反义Wx基因、GFP和GUS报告基因)的pCAMBIA1304载体导入水稻品种(501R、中花9号和日本晴)的幼胚愈伤组织,分别在含35mg/L、45mg/L和65mg/L潮霉素浓度的筛选培养基上筛选获得抗性愈伤。后经PCR检测,从415株T0代再生植株中选出92株(其中501R、中花9号和日本晴分别为4株、43株和45株)。对这些转基因后代植株进行Southern blotting分析表明：hpt、反义Wx基因已经整合进植物基因组中。绝大多数转基因植株后代的表型正常。成熟种子直链淀粉含量分析表明,部分转基因植株的T1代种子中的直链淀粉含量有不同程度的下降,最低的已下降至6．3％,与对照相比下降了9．8％。  相似文献   

关键因子对棉花利用农杆菌介导法导入外源基因的影响   总被引：7，自引：0，他引：7  

李宝平  赵俊侠  石跃进  郭三堆  桑瑜  齐宏立  焦改丽  陈志贤 《作物学报》2001,27(1):80-84

用5～6d的棉花无菌苗下胚轴切段与农杆菌共培,将Bt基因和tfdA基因导入棉花。菌株质粒中GUS基因为标记基因,NPTⅡ基因为选择基因。在含有0.1mg/L2,4-D和0.1mg/LKT的MS培养基上共培48h,转移到添加头孢霉素500mg/L、卡那霉素50mg/L培养基中诱导和筛选抗性愈伤组织。70～80d时,进行GUS检测,选择GUS阳性愈伤组织,经体细胞胚  相似文献   

农杆菌介导的植酸酶基因转化棉花的研究     

郭彩菊王省芬  张桂寅迟吉娜吴立强  李志坤马峙英 《中国农学通报》2009,25(20):68-71

摘要：本研究采用农杆菌介导的方法,将外源植酸酶(Phy)基因导入棉花品种的胚性愈伤组织中,经培养获得再生植株。PCR检测证明植酸酶基因已经插入到棉花基因组中,晋棉14和陕724的转化效率分别为33%和8.3%。此外,本研究还对影响农杆菌侵染棉花胚性愈伤转化效率的因素,如卡那霉素浓度、胚性愈伤组织生长状态、受体材料的基因型等进行了较为系统的比较研究,旨在建立一种转化效率高、稳定性好的棉花农杆菌遗传转化体系。  相似文献   

Transgenic barley by particle bombardment. Inheritance of the transferred gene and characteristics of transgenic barley plants     

Anneli Ritala  Reino Aikasalo  Kristian Aspegren  Marjatta Salmenkallio-Marttila  Satu Akerman  Leena Mannonen  Ulrika Kurtén  Riitta Puupponen-Pimiä  Teemu H. Teeri  Veli Kauppinen 《Euphytica》1955,85(1-3):81-88

Summary Transgenic barley plants (Hordeum vulgare L. cv. Kymppi) were obtained by particle bombardment of various tissues. Immature embryos and microspore-derived cultures were bombarded with gold particles coated with plasmid DNA carrying the gene coding for neomycin phosphotransferase II (NPTII), together with plasmid DNA containing the gene for -glucuronidase (GUS).Bombarded immature embryos were grown to plants without selection and NPTII activity was screened in small plantlets. One plant proved to be transgenic (T₀). This chimeric plant passed the transferred nptII gene to its T₁ progeny. The presence of the nptII gene was demonstrated by the PCR technique and enzyme activity was analyzed by an NPTII gel assay. Four T₀ spikes and 15 T₁ offspring were transgenic. The integration and inheritance was confirmed by Southern blot hybridization. Transgenic T₂ and T₃ plants were produced by isolating embryos from green grains of transgenic T₁ and T₂ plants, respectively and growing them to plants. After selfing, the ratio of transgenic to non-transgenic T₂ offspring was shown to follow the rule of Mendelian inheritance. The general performance of transgenic plants was normal and no reduction in fertility was observed.Microspore-derived cultures were bombarded one and four weeks after microspore isolation. After bombardment, cultures were grown either with or without antibiotic selection (geneticin ^R or kanamycin). When cultures were grown without selection and regenerated plants were transferred to kanamycin selection in rooting phase, one out of a total of about 1500 plants survived. This plant both carried and expressed the transferred nptII gene. The integration was confirmed by Southern blot hybridization. This plant was not fertile.  相似文献   

利用卡那霉素间接鉴定法进行大规模的棉花转基因育种技术   总被引：16，自引：0，他引：16  

孙敬  唐灿明  袁小玲  朱协飞  张天真 《棉花学报》2000,12(5)

:( 1 )将脱脂棉撕成小条沾取 0 .0 5%的卡那霉素溶液 ,粘附于棉花植株倒 2新生叶上。 5d后所有沾有卡那霉素溶液的感虫棉株的叶片均出现明显的黄色斑块 ,而转 Bt基因抗虫棉的叶片仍为正常绿色 ,无任何症状。 ( 2 )转 Bt基因抗虫棉种子接种于加有 1 0 0 0 mg· l- 1卡那霉素的 MS培养基中。四天后 ,抗虫棉子叶均表现为正常绿色 ,而常规品种子叶全为黄色 ,表明卡那霉素间接鉴定法是鉴定转 Bt基因抗虫棉的简便而又准确的方法  相似文献