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【研究目的】建立可在临床上检测鸡传染性支气管炎抗体的检测IBV抗体的间接ELISA方法;【方法】以表达的重组IBV NP 蛋白为包被抗原,将之包被于聚苯乙烯酶标板上,以封闭液进行封闭,然后加待检血清在37℃作用1h,洗涤后加酶标兔抗鸡IgG抗体,在37℃作用1h,加底物显色,终止反应后测定OD值;【结果】抗原包被浓度为1.45mg/ml,待检血清最佳稀释度为1:40,酶标二抗最佳工作浓度为1:1000,确定阳性判定标准为OD450≥0.314。NP-ELISA与AIV H9、H5、H7、IBD、ND、EDS76 的标准阳性血清不发生交叉反应,具有良好的特异性;【结论】NP-ELISA具有特异性强、灵敏度高、重复性好、方便快速的特点,可用于临床IB抗体的检测。 相似文献
2.
目的 用B.melitensis 16M提纯的LPS和O链抗原作为检测抗原，研制出针对B.melitensis 16M的单克隆抗体（McAb），将其标记胶体金，建立一种诊断布病的胶体金免疫层析方法。方法 B.melitensis 16M全菌免疫Balb/C小鼠，采用杂交瘤细胞技术制备McAb，测定免疫球蛋白亚类及亲和力。用HiTrap Protein G HP亲和层析纯化抗体并用胶体金标记，建立胶体金免疫层析方法。选择最佳反应模式组装成试纸条，对其特异性、敏感性、稳定性、阳性病料试验。结果 筛选出能稳定分泌抗B.melitensis 16M的种特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株2D10、3C6、1E10，单抗亚类分别为IgG2a、IgG1，亲和常数（k）介于1×10-8~2.6×10-10。根据配对实验，以3C6为最佳包被抗体，2D10为最佳金标抗体。抗体IgG标记浓度为30μg/ml时，检测效果最佳。同时，与B.melitensis 16M多抗IgG作为包被抗体、2D10为金标抗体的检测体系对比，两种包被方法组装的试纸条最低检出量为5.0×103CFU/ml，且不与其它菌发生交叉反应，保持期≥100d。以荧光定量PCR为参照，试纸条检测80份阳性病料，检检出率为100%。结论 建立的胶体金免疫层析方法检测B.melitensis 16M快速、简便、可靠，有望开发成为布病快速诊断试剂盒。 相似文献
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鸭病毒性肝炎间接血凝诊断抗原的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
【研究目的】建立一种便于检测鸭病毒性肝炎抗体的方法。【研究方法】将纯化的鸭病毒性肝炎I型病毒(DHV-I)致敏双醛化红细胞,制备检测DHV抗体的间接血凝诊断抗原。【研究结果】使用该抗原对9种常见的禽传染病阳性血清、15只随机抽样的非免疫鸭血清进行检测,抗体均为阴性;检测被鸭病毒性肝炎I型病毒阻断后的阳性血清,抗体为阴性;用不同批次的诊断抗原检测同一血清样品结果显示一致;敏感性是琼脂扩散试验的32～64倍;对15只随机抽样的免疫鸭进行检测,阳性率达93%。【结论】该方法敏感性较高、特异性强、重复性好,可用于疫苗免疫后抗体水平的检测及鸭病毒性肝炎的流行病学调查。 相似文献
4.
【目的】制备马铃薯Y病毒脉坏死株系（PVY^N）多克隆抗体,建立间接ELISA法用于检测PVY^N病毒。【方法】依据PVY^N的CP基因序列设计引物,利用RT-PCR方法获得CP基因并连接构建到原核表达载体,进行原核表达,以纯化的重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,获得PVY^N的抗血清并纯化。【结果】测序结果与其他已知序列比较,PVYNCP基因的核苷酸同源性95%,推断氨基酸的同源性达98%。以纯化蛋白为抗原进行免疫,成功获得了PVY^N外壳蛋白抗血清,纯化后的IgG采用间接ELISA法检测抗原,抗体效价达1：500,使用该抗体稀释度检测感染植株,结果呈阳性。【研究结论】通过分子生物学途径获得了PVY^N的多克隆抗体,建立的间接ELISA方法可以用于PVY^N的病毒检测。 相似文献
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【目的】建立一种便于检测副猪嗜血杆菌抗体的方法。【方法】将分离纯化的副猪嗜血杆菌5型超声裂解后,致敏双醛处理的健康绵羊红细胞,制成副猪嗜血杆菌5型间接血凝诊断液,检测该诊断液的活力及特异性。【结果】该诊断液特异性强,仅与副猪嗜血杆菌5型阳性血清发生凝集反应。活力也比较高,达到1:512以上,可以用其进行副猪嗜血杆菌疫苗免疫后抗体检测。【结论】该间接血凝诊断液成功制备为广大兽医化验人员提供一种简单、快速、经济的检测副猪嗜血杆菌抗体的方法,为副猪嗜血杆菌病的诊断和防治提供一种有效的手段 相似文献
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为了检测柔嫩艾美耳球虫感染鸡血清中特异性抗体水平,原核表达纯化EtMIC4-N蛋白,采用免疫印迹法确定其反应原性,再以纯化后的蛋白为包被抗原,以生物素标记的羊抗鸡IgG为二抗,以HRP结合链霉亲和素为酶标抗体,建立了检测柔嫩艾美耳球虫抗体的BAS-ELISA方法。经检测,EtMIC4-N蛋白最佳包被浓度为7μg/mL,最适封闭液为1%BSA,最佳血清稀释度为1:80,二抗稀释度为1:100000,酶标抗体稀释度为1:100000,最适显色时间为15min,组内和组间变异系数均小于10%。通过动物感染试验验证,结果表明建立的BAS-ELISA可以用于检测柔嫩艾美耳球虫特异性抗体的检测,并且具有简便,快速,灵敏,成本低等特点。 相似文献
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【研究目的】人工合成氯霉素抗原及氯霉素多克隆抗体的制备,比较氯霉素人工抗原免疫血清效价。【方法】采用重氮化法,分别以BSA、OVA为载体蛋白合成CAP-BSA,CAP-OVA两种完全抗原,并对两种合成抗原的免疫效果进行比较。分别以这两种抗原作为免疫抗原用弗氏佐剂乳化后免疫新西兰大白兔,免疫四次后,心脏采血,分离血清,再用两种抗原分别作为包被原对兔血清进行间接竞争ELISA分析。【结果】大白兔经免疫后产生了抗氯霉素特异性抗体,两种抗原得到的抗体效价均达到1:8100,氯霉素最低检出限为9ng/mL。【结论】综合比较认为,CAP-OVA作为免疫原,CAP-BSA用作包被原是比较理想的实验方案,可用于制备氯霉素抗体和研制生产氯霉素酶联免疫试剂盒。 相似文献
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应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测食品和饲料中赭曲霉毒素A的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗赭曲霉毒素A单克隆抗体,将标记的胶体金抗体喷涂于玻璃纤维上,赭曲霉毒素A偶联抗原OTA-OVA和二抗兔抗鼠IgG分别喷涂于硝酸纤维膜上,作为检测线和质控线,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装成试纸条并装卡。测试结果表明,赭曲霉毒素A快速检测试纸条的灵敏度为5ng/mL,检测时间为10min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。该法使用简单方便,非常适合现场快速检测赭曲霉毒素A。 相似文献
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摘 要：【研究目的】克隆并分析兔CCR10基因;【方法】基于电子延伸序列,设计1对克隆引物,兔盲肠黏膜组织提取总RNA,进行RT-PCR,将PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coli JM109感受态细胞、检测阳性克隆、测序并进行序列分析。【结果】克隆的兔CCR10 基因长为723bp,编码由241个氨基酸残基组成的CCR10前体蛋白,三级结构预测表明CCR10具有一个多克隆免疫球蛋白区（PIG-X）。克隆的兔CCR10基因与绵羊、人的同源性分别为89.6%、89.9%,推导的氨基酸序列与绵羊、人的同源性分别为94.2%、93.8%,结构特征与绵羊、人的相一致。【结论】克隆了兔CCR10基因并注册GenBank (Accession. EU348829)。 相似文献
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稻瘟病菌一假定α-甘露糖苷酶多克隆抗体的制备及应用 总被引：1，自引：1，他引：0
摘要：【研究目的】为检测α-甘露糖苷酶的表达及其可能的功能,制备了稻瘟病菌一假定α-甘露糖苷酶多克隆抗体,并探索其可能应用。【方法】将与-His标签融合的过量表达一假定α-甘露糖苷酶蛋白的稻瘟病菌转化子,在液体完全培养基中培养,收集其上清液,经Ni2+-NTA亲和柱纯化后,得到可溶的融合蛋白α-甘露糖苷酶-His。【结果】纯化后的融合蛋白免疫新西兰兔,得到抗α-甘露糖苷酶蛋白的多克隆抗体,ELISA检测结果表明抗体效价达1：51200,特异性高。利用该多克隆抗体以ELISA方法检测并Western验证分析稻瘟病菌30个田间菌株培养液α-甘露糖苷酶的表达量。【结论】不同菌株α-甘露糖苷酶表达量有明显差异。进一步分析表明,菌株70-15接种水稻后,不同时期α-甘露糖苷酶的表达量差异明显。菌株间致病型等生物学和生理学差异可能与α-甘露糖苷酶表达的差异有关。 相似文献
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为了实现在马铃薯种薯生产田现场同时快速检测马铃薯X（PVX）和Y病毒（PVY）,利用胶体金标记和免疫层析技术研制了PVX-PVY双重检测试纸条。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,在波长526nm处有最大吸收值,金颗粒直径约25nm。同时标记PVX和PVY兔多克隆抗体,将抗体标记物喷射于玻璃纤维纸上,作为金标垫。将PVX和PVY抗体分别划线于硝酸纤维素膜上作为检测线,将羊抗兔抗体划线于硝酸纤维素膜上作为质控线,制备胶体金试纸条。结果表明,研制的双重试纸条能够在2min之内同时检出PVX和PVY。PVX病汁液检测稀释限度可达106倍（W/V）,PVY可达105倍（W/V）,其中对PVX检测更灵敏。用其他4种常见病毒（PVS、PLRV、PVA和PVM）检测,未出现交叉反应。在田间采集马铃薯叶片,分别利用试纸条与DAS-ELISA检测,结果一致性非常高。由此可知,该试纸条具有操作简便、反应快捷的特点,特别适用于田间及口岸一线对于马铃薯X和Y病毒的同时检测。 相似文献
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二氟沙星单克隆抗体的研制及其免疫学特性的鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
采用改进的碳二亚胺法,将半抗原二氟沙星(DIF)与载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,,制备得到二氟沙星全抗原DIF-BSA和DIF-OVA。采用紫外（UV）,凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定; 用BSA-DIF免疫 BALB/C小鼠, 间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术制备二氟沙星单克隆抗体（DIFmAb）,并对其效价、亲和力和特异性等进行鉴定。结果表明,BSA与DIF偶联成功,分子结合比为1：4.7,筛选出1H10、2F12、4D8共3株敏感特异的杂交瘤细胞, 间接ELISA效价细胞培养上清分别为1:5.12×102、1：3.2×101、1：2.56×102,腹水效价分别为1：2.56×105、1：1.28×105、1：6.4×104。同种亚型分别为IgG1、IgG1、IgG2a,亲和常数（Ka）分别为2.94×1010 L/moL、1.72×1010 L/moL和1.35×1010 L/moL.亲和力最高的1H10对DIF的IC50为1.64ng/ml,单抗与其他氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应。通过试验获得高效价、敏感、特异的mAb,适用于动物性食品中DIF的残留检测的免疫学试验 相似文献
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以蜘蛛杀虫肽与Bt-toxinC肽融合蛋白基因(bgt基因)的表达产物的定量分析为研究目标,采用原核表达及纯化出融合蛋白His-BGT作为抗原进行兔免疫,得到相应的抗血清,采用ELISA法检测效价在1:10000以上,并对抗血清进行了免疫亲和层析,获得了高纯度的IgG,Westernblot检测具有较好的特异性。采用过碘酸钠法将抗体标记辣根过氧化物酶(HRP),得到第二抗体即酶标抗体,标记率在85%以上。建立起检测BGT杀虫蛋白的快速、灵敏的方法。应用该检测方法,分析了不同转基因白桦(BetulaplatyphyllaSuk.)株系中BGT蛋白含量占叶片可溶性总蛋白含量的0.05%～0.3%,并利用Westernblot验证了此方法是可靠的。说明抗体夹心BGT-ELISA方法能够定量分析转基因植株中BGT蛋白的含量,为转bgt基因植物的检测和应用奠定了基础。 相似文献
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新型植物生长调节剂对烟草花叶病的控制作用 总被引：2，自引：0，他引：2
【研究目的】为开发和创制新的烟草病毒病控制药剂提供依据，从而指导烤烟生产中花叶病的防治问题；【方法】试验设芸苔素内酯400倍，8 %宁南霉素水剂800倍与清水对照(cK)3个处理，3次重复，随机区组设计；【结果】在重庆市黔江烟区，用植物生长调节剂——芸苔素内酯和宁南霉素两种生物药剂进行了防治烟草花叶病毒病侵染烟草的田间试验，结果表明：两种药剂对烟草花叶病均具有比较好的控制效果，相对防效均在70%左右，且对烟草生长具有一定的促进作用。【结论】芸苔素内酯不但能发挥其生长调节剂的功能——促进烟草生长，而且也是防治烟草花叶病的较为理想的药剂。 相似文献
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【研究目的】本研究旨在通过细胞学鉴定判断小麦属2个种间杂种的真实性,了解其亲本的染色体组及倍数性;【方法】本试验采用了常规染色体组型分析方法;【结果】分析和报道了小麦属2个种间杂种及其3个亲本的核型,根据核型分析的有关参数,阐明了两个杂种1894×Ps5、新7×Ps5及其亲本新7、1894和Ps5的核型特征,其核型分别为：新7(2n=6x=42)：2M+12sm+28m(2SAT)(2B),1894(2n=6x=42)：2M+20sm+18m(2SAT)+2st(2B),Ps5(2n=4x=28)：2M+12sm(2SAT)+12m+2st(2B),1894×Ps5(2n=5x=35)：2M+19m+12sm+2st(2B),新7×Ps5(2n=5x=35)：1M+21m+13sm(2B);【结论】由此鉴定了2个杂种的真实性--均为真杂种,并确认了亲本新7和1894的第一套和第二套染色体均分别为A组和B组,倍数性均为6x,它们的第三套染色体属什么染色体组有待进一步研究。 相似文献
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大花蕙兰与春剑杂交原球茎增殖及分化研究 总被引：4，自引：1，他引：3
【研究目的】对大花蕙兰品种‘绿宝石’与春剑杂交原球茎增殖与分化进行研究。【方法】设置不同培养基、6-BA 和 NAA以及不同添加物对杂交兰原球茎增殖分化的进行探讨。【结果】KC培养基为最佳培养基;6-BA对原球茎的增殖影响不大, NAA对增殖影响较明显当浓度为0.2mg/L原球茎增殖效果最好;KC+6-BA2.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L对原球茎的分化效果最好;【结论】在培养基中加15mL/L香蕉汁最有利于杂交兰原球茎的增殖。 相似文献
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人工合成小麦与普通小麦杂交后代衍生群体的Rht8基因分析 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】四倍体小麦与节节麦杂交培育的人工合成小麦已广泛应用于国内外小麦品种改良。通过研究人工合成小麦与普通小麦杂交后代的Rht8基因型,有助于提高分子标记育种效率,也有助于Rht8 基因型的多态性研究,并为人工合成小麦在中国小麦品种改良和分子标记育种中的应用提供依据和方法;【方法】以引自CIMMYT的人工合成小麦分别与中国四川成都平原主栽普通小麦品种杂交、回交的BC2F2:6后代群体中选育的113份优良高代系和川麦38、川麦42、川麦43和川麦47育成品种为材料,采用特异引物的PCR 扩增和改进的聚丙烯酰胺凝胶电泳对其Rht8基因型进行了研究;【结果】在以syn768、Syn769、Syn780和Syn786人工合成小麦为亲本的117份后代衍生群体检测材料中,Rht8基因型频率为77.78%。从每一个人工合成小麦形成的小的后代衍生群体看,Rht8基因型频率各不相同。以syn768为亲本的后代衍生群体,Rht8基因型频率最高,为96.70%;在以syn769为亲本而育成的优良高代系和川麦38、川麦42与川麦43育成品种中,Rht8基因型频率最低,为71.64%;以Syn780为亲本的后代衍生群体中,Rht8基因型频率为73.68%,分离比率约为3:1;以Syn786为亲本育成的材料只有川麦47,该品种不含有Rht8该基因;【结论】不论父本或母本的Rht8的基因型状况如何,它们所产生的杂交后代材料Rht8基因的遗传是随机的。 相似文献