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p53基因与肿瘤形成 总被引：3，自引：0，他引：3
肿瘤抑制基因的研究已经成为继癌基因之后肿瘤遗传学、分子生物学领域的前沿和热点,尤其是抑癌基因p53越来越被人们重视。研究表明正常的p53,又称野生型p53,在细胞损伤后的修复过程中发挥重要作用。正常p53的功能像"分子警察"一样监视着基因组DNA的完整性。在细胞发生DNA损伤时,p53蛋白能使细胞分裂终止在G1/S期,以使细胞有足够的时间修复损伤,恢复正常状态。若不能修复,野生型p53还能启动细胞的凋亡过程从而引发细胞的程序性死亡,阻止具有癌变倾向的突变细胞产生。而突变型p53基因会导致肿瘤的发生,大多数肿瘤与p53的突变有关。文章着重阐述了p53的表达与突变、p53的稳定调节及p53的转录调控等。 相似文献
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乳腺肿瘤细胞的增殖及其预后具有一定相关性.Ki67、PCNA是最常用的衡量肿瘤增殖指数(Proliferation Index)的标记物[1].Ki67是一种非组蛋白核蛋白质,分子质量在345～395 kD之间,表达于细胞周期的G1、S、G2和M期,但在静止期不存在[2-3].Ki67蛋白半衰期很短,在有丝分裂后很快消失.有研究表明,Ki67蛋白的高表达与肿瘤的转移、预后密切相关.PCNA是一种分子量为36kD的蛋白质,为DNA聚合酶δ的辅助蛋白[4].PCNA在细胞周期的G1晚期开始升高,在S期达到最大值,由于PCNA与细胞DNA合成关系密切,在细胞增殖的启动上起重要作用,所以被作为反映细胞增殖状态指标[5],也成为近年来肿瘤研究的热点. 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(4):111-115
为研究二甲双胍对犬乳腺肿瘤细胞增殖和细胞周期的影响,以犬乳腺肿瘤CHMm和CHMp为模型,采用终浓度为0、5、10、20、40mmol/L二甲双胍对其进行干预,应用CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布比例,再通过Western blot检测细胞周期相关蛋白cyclin D1和p27的表达情况。二甲双胍作用48 h后,与对照组比较,CHMm细胞试验各组的成活率显著降低(P0.05),而CHMp细胞除了5 mmol/L组(P0.05),其他试验各组的成活率也显著低于对照组(P0.05),并且均呈现一定的浓度依赖性。流式细胞仪分析细胞分布比例发现,CHMm的G0/G1期细胞比例从(38.7±5.89)%增加到(70.36±5.78)%,CHMp的G0/G1期细胞比例也从(37.03±4.23)%增加到(54.92±4.67)%。随着二甲双胍作用浓度的增加,CHMm和CHMp细胞内cyclin D1表达量呈现减少的趋势,而p27表达量呈现上升的趋势。研究结果表明,二甲双胍可以抑制犬乳腺肿瘤细胞体外增殖能力,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,并下调cyclin D1和上调p27细胞周期相关蛋白表达量,从而为犬乳腺肿瘤治疗提供一定的理论基础。 相似文献
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端粒酶和细胞衰老 总被引：3，自引：1，他引：2
端粒是真核细胞染色体末端的一种特殊结构 ,由端粒 DNA和端粒蛋白质组成。端粒DNA是富含 G的高度保守的重复核苷酸序列 ,人和其他哺乳动物的端粒 DNA序列均由 5′-3′,方向 (TTAGGG) n 反复串联组成 ,它参与 DNA复制 ,对维持染色体的稳定和完全复制有重要作用。正常动物细胞 DNA的端粒随着细胞分裂而缩短 ,当缩短到一定长度时细胞将停止增殖并死亡。细胞中的端粒酶在正常细胞不表达 ,只在生殖细胞、干细胞和肿瘤细胞中表达。文章介绍了细胞衰老的细胞生物学机制、端粒酶和细胞衰老的关系 ,讨论了端粒酶和克隆动物的早衰现象的关系 相似文献
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研究“肿瘤消”的抗肿瘤活性和作用,为临床用药提供依据。通过 MTT 法检测“肿瘤消”对多种肿瘤细胞株和正常细胞存活率的影响;采用 Hoechst 染色法和 DNA 片段化分析对“肿瘤消”诱导 MDCC-MSBl 细胞凋亡的作用进行检测;Western blot 检测“肿瘤消”诱导 MDCC-MSBl 细胞凋亡相关蛋白因子表达情况。MTT 法检测结果显示,“肿瘤消”对 MDCC-MSBl、C6、SP2／0和 A549细胞的增殖具有明显抑制作用,对293A 细胞增殖无显著影响;Hoechst 染色和 DNA 片段化分析均证实“肿瘤消”能诱导 MDCC-MSBl细胞凋亡;Western blot 检测发现“肿瘤消”诱导 MDCC-MSBl 细胞凋亡与凋亡因子 caspase 3、caspase 8和caspase 9的活化有关。证实“肿瘤消”具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。 相似文献
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三氧化二砷诱导鸡MD肿瘤细胞凋亡及对细胞内钙离子浓度的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为探讨As2O3诱导MD肿瘤细胞株凋亡的机制,采用MTT法检测As2O3对MDCC-MSB1的抑制作用.采用荧光显微镜观察细胞形态学变化,DNA Ladder法检测细胞凋亡,Fura-2/AM负载双波长荧光分光光度计检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)变化,观察A2O3对鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1的影响.结果显示:As2O3能抑制鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1的生长,呈剂量依赖关系(P<0.05或P<0.01);在荧光显微镜下可见As2O3作用后MDCC-MSB1细胞呈现典型的凋亡特征,并出现典型的DNA Ladder,双波长荧光分光光度计检测结果显示:As2O3作用后的MDCC-MSB1细胞内[Ca2 ]i升高(P<0.05或P<0.01),呈剂量依赖关系.As2O3能明显抑制鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1细胞的生长,并诱导其发生凋亡,细胞内[Ca2 ]i高可能是其诱导细胞凋亡的机制之一. 相似文献
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《中国兽医学报》2015,(4):620-625
以H2O2建立Chang liver细胞损伤模型,设空白对照组、损伤模型组、黄芪甲苷保护组、毛蕊异黄酮葡糖苷保护组、芒柄花素保护组和阳性对照组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、微板法、流式细胞术、DNA Ladder检测等方法测定细胞存活率、细胞外液转氨酶活性、周期分布及凋亡情况。结果显示H2O2的诱导使Chang liver细胞存活率降低、活性升高、发生G0/G1期阻滞及细胞外液转氨酶、细胞凋亡率的升高,3种成分对细胞的预处理均可显著或极显著的升高细胞存活率、缓解G0/G1期的阻滞现象、并降低细胞外液转氨酶活性及细胞凋亡率(P0.05或P0.01)。表明黄芪主要成分(黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡糖苷和芒柄花素)对H2O2诱导的Chang liver细胞凋亡均有一定的抑制作用。 相似文献
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以体外培养的小鼠睾丸间质细胞系TM3 为材料,加入不同质量浓度的钼酸钠溶液（0,10,20,40,80,160mg/L）染毒培养,分别在干预4,8,12,24,48h采用MTT法检测细胞的增殖。干预48h后,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤的变化。结果表明：与对照组相比,不同剂量钼酸钠作用24h后,睾丸间质细胞的增殖活性均受到抑制;不同质量浓度的钼酸钠作用48h后,细胞周期阻滞于G0/G1期,20mg/L及其以上剂量组G0/G1期细胞百分率与对照组相比显著升高（P〈0.05或P〈0.01）;与对照组相比,各剂量组TM3 小鼠睾丸间质细胞凋亡率显著升高,差异极显著（P〈0.01）;细胞尾部DNA含量及细胞尾长随着钼剂量的增加呈不同程度的增加,且存在着剂量—效应关系。结论说明钼能够引起睾丸间质细胞周期的紊乱,并诱导睾丸间质细胞发生DNA损伤和凋亡。 相似文献
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通过贝鲁特反应和还原、脱羧反应在体外合成制备3-甲基喹噁啉-2-羧酸,并进行理化鉴定和抗菌活性测试;通过MTT方法研究3-甲基喹噁啉-2-羧酸对多种细胞的生长抑制作用,利用单细胞电泳研究其对细胞DNA的损伤作用,利用流式细胞术研究其对细胞周期的改变。结果显示,体外成功合成制备出3-甲基喹噁啉-2-羧酸,而3-甲基喹噁啉-2-羧酸几乎没有抗菌效果,对多种细胞的生长抑制作用较弱,在剂量检测范围内细胞抑制率不到30%,但在一定剂量下能导致细胞DNA损伤,主要表现为尾长和尾部DNA含量显著升高;并且3-甲基喹噁啉-2-羧酸也能改变Chang细胞的细胞周期,表现为S期阻滞。结果表明,3-甲基喹噁啉-2-羧酸具有一定的细胞毒性。 相似文献
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为了研究人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及其对细胞凋亡、p53蛋白表达和Caspase-3活性的影响,试验采用MTT方法检测细胞的生长抑制率、DNA片段化试验检测细胞凋亡、流式细胞术测定细胞周期、Western-blot检测p53蛋白表达、Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性.结果表明:人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的抑制呈现时间和剂量依赖性,有73%的Hela细胞停滞在G0～G1期;Western-blot检测结果显示人乳铁蛋白可以上调p53蛋白的表达; 人乳铁蛋白作用48 h后Caspase-3的活性是0小时时的5.5倍,二者差异极显著(P<0.01).结果说明人乳铁蛋白能显著抑制宫颈癌Hela细胞生长,其抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡、调控细胞周期、上调p53表达、活化Caspase-3有关. 相似文献
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目的 采用RNA干扰技术沉默过氧化物酶Ⅰ(peroxiredoxin Ⅰ,PrxⅠ)基因,观察乳腺癌MCF-7细胞对X线敏感性变化,探讨其作用机制.方法 将Prx ⅠshRNA真核表达载体pGPU6-Prx Ⅰ和阴性对照质粒pGPU6-HK转染入乳腺癌MCF-7细胞中,经G418稳定筛选后RT-PCR和Western blot检测PrxⅠ表达变化.6 MV X线照射6 Gy后48 h,流式细胞术检测细胞的活性氧水平、细胞周期和细胞凋亡;MTT法测定细胞增殖能力;克隆形成实验观察克隆形成率,计算Do、N、Dq、SF2及放射增敏比(sensitive enhancement ratio,SER)等放射生物学参数,Western blot法检测Rad51及γ-H2 AX蛋白变化.结果 获得2个稳定转染细胞株:pGPU6-HK和pGPU6-Prx Ⅰ.RT-PCR和Western bolt检测显示pGPU6-Prx Ⅰ组中Prx Ⅰ mRNA和蛋白表达均明显抑制.6 Gy的X线照射48 h后,pGPU6-Prx Ⅰ及联合照射(ionizing radiation,IR)组细胞中的活性氧水平、G1期细胞和细胞凋亡明显增加,而细胞增殖能力和S期细胞明显降低,Western blot分析表明Rad51蛋白表达降低,而γ-H2 AX蛋白表达升高(P＜0.05),以pGPU6-Prx Ⅰ+IR组变化最显著,其Rad51蛋白表达下降了79.3%,而γ-H2AX蛋白表达升高了3.7倍.pGPU6-PrxⅠ组细胞的Do、N、Dq和SF2值分别为1.354、3.106、1.547和0.504,均低于pGPU6-HK组,SF2时的SER为1.353.结论 下调PrxⅠ基因表达可提高乳腺癌MCF-7细胞的放射敏感性,其作用机制与细胞内活性氧清除能力减弱、DNA双链断裂增加及DNA损伤后修复能力降低有关.PrxⅠ可能是1个理想的肿瘤放射增敏分子靶点. 相似文献
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使用含桑蚕血球细胞(主要是颗粒细胞和浆细胞)的离体培养系,经各种刺激物诱导后,对蛋白激酶C(下称PKC)和蛋白激酶A(PKA,需cAMP型)的活性进行了试验。血球细胞经大肠杆菌中的类脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、离子霉素、霍乱弧菌产生的霍乱毒素或笨基乙酸汞(杀菌剂)(4β—phorbor 12—myristate 13 acetate)(PMA)处理后便可清楚地检测到PKC的活性,而没有上述刺激物诱导时,其活性情况没试验过。结果表明,不仅LPS而且Ca~(2+)和一种G蛋白均可能参与了PKC活性诱导的信号转导。同样用LPS、dcAMP、离子霉素或霍乱毒素处理血球细胞,对PKA的活性进行了类似的检测,而不经处理的对照细胞没有PKA活性,而且LPS、cAMP、Ca~(2+)和G蛋白很可能也参与了PKA活性诱导过程中的信号转导。用抗兔脑PKC—α的单克隆抗体进行蛋白质印迹分析,结果以LPS处理的血球细胞样品中有一种与单抗有交叉反应的90KDa蛋白质,而未经LPS处理的对照样品不存在这种蛋白。桑蚕血球细胞内的PKC和PKA被细菌感染后的LPS激活后,可以诱导自身防御反应,例如抗菌蛋白基因的表达。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2015,(9)
CTSB、CTSS和caspase 3对细胞凋亡具有重要作用,其活性和蛋白表达量可反映细胞内、外环境对卵母细胞的凋亡刺激。本研究利用双夹心ELISA方法测定绵羊卵母细胞内CTSB、CTSS和caspase 3在IVM 0、8、16、24 h的活性与蛋白表达量,研究其在IVM过程中的变化、与卵母细胞质量的相关性及E-64对其产生的影响。结果表明:质量差组卵母细胞内CTSB、CTSS和caspase 3活性与CTSB蛋白表达量均极显著高于正常质量组(P0.01);CTSB、CTSS活性和蛋白表达量在IVM过程中无显著变化(P0.05),caspase 3活性呈现先降低后升高的趋势,蛋白表达量无显著变化(P0.05);5μmol/L和10μmol/L E-64显著或极显著降低了CTSB、CTSS和caspase 3活性(P0.05 or P0.01),10μmol/L E-64显著提高了CTSB蛋白表达量(P0.05)。结果显示,CTSB、CTSS和caspase 3的活性及CTSB蛋白表达量与卵母细胞质量呈负相关,E-64可降低CTSB、CTSS和caspase 3活性,并提高CTSB蛋白表达量。 相似文献
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动物冷暴露过程中,肝脏因发生氧化应激而受损.利用不同浓度过氧化氢(H2O2)作用BRL-3A细胞,根据细胞存活率确定500 μmol/L H2O2作用细胞3h为施加条件,然后通过检测蛋白质羰基含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性,探讨在细胞水平上建立冷暴露大鼠肝脏损伤模型.结果显示,H2O2处理组细胞存活率下降,蛋白质羰基含量升高,SOD、GSH-Px和CAT活性均降低.与对照组相比,其存活率、细胞内蛋白质羰基含量和CAT活性,均差异极显著(P＜0.01),细胞内SOD和GSH-Px活性,差异显著(P＜0.05).结果表明,500 μmol/L H2O2作用于BRL-3A细胞可导致氧化应激的发生,其相关指标与大鼠冷暴露后肝脏受损指标改变趋势类似,利用BRL-3A细胞建立冷暴露引起的肝脏氧化损伤模型,为进一步探讨冷应激对肝脏损伤的机制奠定基础. 相似文献
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研究了三氧化二砷（As2O3）对诱导鸡马立克氏病（MD）肿瘤细胞株MDCC—MSB1细胞凋亡相关基因Fas、Caspase-3 mRNA表达及Caspase-3活性的影响，进而探讨了AS2O3诱导MD肿瘤细胞株凋亡的机制。以体外培养MDCC-MSB1为研究对象，经终浓度分别为0、2、4和8μmol／L的As2O3作用48h后，采用荧光显微镜观察细胞的形态学变化，DNA Ladder法检测细胞凋亡情况，RT-PCR方法检测Fas、Caspase-3 mRNA的表达水平，试剂盒比色法检测Caspase-3活性的变化。结果表明，AS2O3能引起典型的凋亡形态学变化，并出现典型的DNA Ladder，同时Fas、Caspase-3 mRNA的表达水平和Caspase-3活性均增加，组间差异均极显著（P〈0．01），呈现剂量依赖性。证实As2O3诱导鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1细胞凋亡是通过增加Fas、Caspase-3 mRNA的表达和提高Caspase-3活性来实现的。 相似文献
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以不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎症损伤,探讨血管紧张素转化酶2(ACE 2)的变化及与AngⅡ的相互作用。研究包括:ELISA检测细胞上清中细胞炎性因子的分泌或释放;Western blot检测细胞ACE 2和ACE的蛋白表达变化,并进行相关性分析;添加ACE 2活性蛋白对AngⅡ诱导损伤的保护作用。结果显示:1)AngⅡ处理MAC-T,细胞上清中促炎因子TNF-α、IL-6、IL-8含量显著(P0.05)或极显著(P0.01)增加,抗炎因子IL-10含量显著降低(P0.05);2)不同浓度AngⅡ处理细胞后,ACE 2蛋白表达均有降低,10~(-6) mol·L~(-1) AngⅡ处理后显著降低(P0.05);ACE蛋白表达结果相反;ACE 2与AngⅡ浓度之间存在显著负相关;3)添加外源性ACE 2活性蛋白,细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-8浓度均有一定程度的下降,IL-10浓度升高。本研究表明ACE 2/ACE轴的失衡是AngⅡ诱导细胞炎性损伤的主要原因。高水平AngⅡ可激活炎症因子促进炎症反应,是促进炎症反应的主要介质,ACE 2可以通过降解AngⅡ,抑制其对炎症反应的上调效应。 相似文献
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氧化应激与DNA损伤 总被引：2，自引：0，他引：2
人和动物机体细胞在遭受氮氧化合物、钙和病原体等体内外环境的刺激后,氧化和抗氧化系统之间的平衡被破坏,从而促进细胞内活性氧分子(ROS)的大量产生和积累,最终导致机体产生氧化应激。氧化应激可以导致DNA链断裂、DNA位点突变、DNA双链畸变和原癌基因与肿瘤抑制基因突变等形式的DNA损伤;同时,DNA也在遭受脱嘌呤和脱嘧啶、X射线、紫外线、烷化剂和嵌入剂等体内外物理或化学因素的刺激下造成DNA损伤,DNA损伤也能诱导机体产生氧化应激。本文主要对氧化应激与DNA损伤之间的联系作一综述,以期为后续的相关研究提供参考。 相似文献