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1.
R-藻红蛋白标记抗体荧光探针的高效制备及其在禽流感病毒检测中的应用 总被引：2，自引：0，他引：2
用适宜摩尔浓度的异型双功能交联剂SPDP将R-藻红蛋白与纯化的禽流感病毒H9亚型多克隆抗体交联,并经高效液相色谱纯化制备R-藻红蛋白标记抗体荧光探针.以溴化氰活化的琼脂糖微球为固相载体,采用双抗体夹心法建立固相免疫荧光检测法,以制备的R-藻红蛋白标记抗体荧光探针检测禽流感病毒H9尿囊毒.结果表明,阳性微球在蓝、绿光激发下发射桔黄色荧光,荧光明亮,无背景光干扰,特异性好,灵敏度高,可检测蛋白浓度为1.85×10-5 mg·mL-1的H9亚型尿囊毒.R-藻红蛋白标记探针的检测灵敏度高于FITC标记探针,R-藻红蛋白可替代FITC或与FITC等荧光染料一起用于多色荧光免疫检测. 相似文献
2.
将别藻蓝蛋白(Allophycocyanin,APC)与抗鸡IgG抗体交联制备荧光抗抗体,用于鸡疫病的间接荧光检测.首先采用羟基磷灰石层析和阴离子交换层析法高效制备APC,然后利用蛋白质交联技术高效制备荧光抗抗体.分别用摩尔比50:1、100:1的交联剂3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(SPDP)将APC、抗鸡IgG抗体衍生,衍生物以摩尔比1:1液相交联,经高压液相色谱(HPLC)纯化制备出APC标记的抗鸡IgG荧光抗抗体,最后对制备的荧光抗抗体从荧光特性、吸收光谱特性、抗体活性、稳定性及纯度等方面进行鉴定.结果表明,APC标记的抗鸡IgG荧光抗抗体交联效率达95%以上,纯度达电泳纯,红色荧光明亮,抗体活性高,4 ℃保存90 d荧光亮度和抗体活性稳定.研制的APC标记的抗鸡IgG荧光抗抗体可作为通用荧光抗抗体用于鸡传染性疾病的间接免疫荧光检测. 相似文献
3.
用戊二醛和EDC/sulfo-NHS分别活化表面修饰了氨基和羧基的微球,在2种微球上分别固定相等摩尔浓度的氨基标记的发卡DNA和未经修饰的人TNF α捕获抗体,结果表明戊二醛的交联效果优于EDC/sulfo-NHS。从而选择戊二醛为交联剂将Cy3标记的发卡DNA和未经修饰的藻红蛋白(RPE)分别固定到微米球表面并进行了荧光观察,再通过调整蛋白和DNA的比例将FAM标记的发卡DNA和RPE同时固定到微米球上并观察荧光,为实现用DNA序列编码的微米球上多种生物标志物酶联免疫吸附检测奠定了基础。用RPE为荧光标记物采用双抗体夹心法在微球上进行荧光免疫反应,为商品化诊断试剂的研究提供一定的参考。 相似文献
4.
拟南芥Ran2小GTP结合蛋白抗血清的制备及其FITC荧光标记 总被引：1，自引：1，他引：0
将原核表达、纯化的Ran2蛋白对新西兰兔进行免疫制备抗血清,ELISA测定其效价为1∶51 200。免疫印迹分析表明,原核表达、纯化的Ran2和拟南芥可溶性蛋白杂交带均在26 ku处。FITC荧光标记抗体检测Ran2绿色杂交带主要出现在细胞分裂间期的核膜上。 相似文献
5.
【目的】卡那霉素是一种在奶牛兽医临床常用药物,其在牛奶中的残留不容忽视。荧光微球作为一种新型的荧光示踪物,近年来在小分子快速检测方面呈现出独特的优势,试验开展了卡那霉素荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在为牛奶中卡那霉素药物的快速筛选提供新型有效的检测手段。【方法】采用戊二醛法和过碘酸钠法制备了两种卡那霉素的包被抗原（KANA-GA-OVA1、KANA-I2-OVA2）,抗卡那霉素的单克隆抗体通过蛋白G免疫亲和柱进行纯化后,采用碳二亚胺法与荧光微球进行了共价偶联,成功制备了抗体-荧光微球标记物。免疫层析试纸条方法采用微孔测定法。包被卡那霉素包被抗原的NC膜作为固相载体,荧光微球标记的单克隆抗体与样品混合,在微孔膜的毛细管作用下,包被抗原和待测样本中的药物来共同竞争有限的单克隆抗体,通过荧光测定包被抗原结合的抗体量来评价待测样本中卡那霉素药物的含量。【结果】灵敏度试验表明,微孔中加入0、6.25、12.5、25、50、100、200 µg·L-17个浓度梯度的标准品溶液,卡那霉素药物浓度的增加,试纸条T线的荧光强度逐渐减弱,呈现抑制状态,以无标准品抑制的荧光峰高值为F0值,相应浓度标准品抑制时的荧光峰高值为F值,以F/F0为纵坐标,以标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线。利用Originpro 8.0 软件拟合,曲线符合四参数方程,R2为0.9998,IC50值为24.8 µg·L-1,线性范围（以20%-80%抑制率对应的浓度计算）为9.5-100 µg·L-1,最低检出限（以10%抑制率对应的浓度计算）为5 µg·L-1。准确度和精密度试验表明,以25、50和100 µg·L-13个浓度添加水平,平均添加回收率为78.4%-92.7%,批内变异系数为10.8%-12.4%,符合残留检测的需求。特异性试验表明,试验建立的卡那霉素荧光微球免疫层析方法对其他常见的氨基糖苷类药物的交叉反应率均＜1%,说明方法特异性良好。【结论】所建立方法快速灵敏、简单有效,特异性好,具有推广价值。 相似文献
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以分离的猪萨佩罗病毒PSV Hu N1/2016株感染PK15细胞,制备抗原板,建立检测猪血清中PSV抗体的间接免疫荧光(IFA)方法。结果表明:一抗最佳稀释浓度为1∶300;FITC标记的羊抗猪荧光二抗最佳稀释浓度为1∶300。该方法特异性强,敏感度高,既能将PSV抗体与PRRSV、FMDV、PCV、CSFV抗体区分开,也可以检测到中和效价0.128的阳性血清。用该方法检测湖南省部分规模化猪场208份临床血清样品的总阳性率为68%,表明PSV在湖南省流行普遍,且其感染主要发生在保育阶段。 相似文献
7.
利用双功能试剂SPDP在蛋白质分子中引入巯基,结合2-巯醇吡啶分析方法,定量测定引入活性基团的比例,通过两步标记法,将珊瑚藻R-藻红蛋白标记到羊抗兔抗体上,简化了传统标记过程.参照Dot-ELISA方法,以硝酸纤维素膜为固相载体,将该方法应用于烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)的检测.结果表明,R-PE标记的荧光检测的灵敏度为2-10,与酶免疫的Dot-ELISA相比,尽管检测灵敏度较低,但快捷、经济.并对如何进一步提高藻红蛋白介导的免疫荧光分析方法的灵敏度作了讨论. 相似文献
8.
【目的】将高特异性的抗原-抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合,建立快速检测低浓度H5N1禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的免疫PCR方法。【方法】以pUC19为模板,采用5′端标记有生物素的引物进行PCR扩增,制备含有生物素的报告DNA分子。以金磁微球为固相吸附载体,通过亲和素-生物素的桥联作用,将含有生物素的报告DNA分子与生物素标记的抗AIVH5N1血凝素蛋白的检测抗体分子连接,H5N1AIV与检测抗体结合后,体外扩增报告DNA,间接放大低含量病毒信号,建立可有效检测微量H5N1AIV的免疫PCR方法。对建立的免疫PCR方法的最适报告DNA浓度、最适链亲和素工作浓度、灵敏度和特异性进行确定和评价。【结果】建立的免疫PCR方法最适报告DNA质量浓度为1ng/mL,最适链亲和素工作质量浓度为20ng/mL,该方法可成功检测到10-4EID50/mL的H5N1AIV,而且特异性良好。【结论】建立的以金磁微球为吸附载体的免疫PCR是一种灵敏度高、特异性好的检测微量H5N1AIV的方法。 相似文献
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用猪抗口蹄疫病毒IgG制备荧光抗体,检测口蹄疫病毒感染BHK-21细胞中的病毒抗原,结果表明,该方法可以检出口蹄疫病毒感染BHK-21细胞中的病毒抗原,荧光抗体的工作浓度确定为1：40,且这种荧光能被FMDV阳性血清特异性地抑制。用制备的荧光抗体检测感染口蹄疫病毒CS株和LB株的BHK～21细胞抹片和飞片,结果均为阳性,空白对照均为阴性。对于低代次的分离毒,即使感染细胞产生明显的CPE,采用反向间接血凝试验也不能检出收获细胞液中的病毒抗原,本试验弥补了这一缺陷。采用直接荧光抗体法可确定病毒在感染细胞中增殖的位置,可作为兽医临床诊断方法之一。 相似文献
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【目的】研究木瓜蛋白酶对条斑紫菜R-藻红蛋白的抗氧化性和肿瘤增殖抑制活性的影响。【方法】采用超声波破壁法提取条斑紫菜R-藻红蛋白,用DEAE柱层析法纯化后进行木瓜蛋白酶酶解,通过正交试验设计,以还原力A700为考察指标确定酶解反应的最佳工艺参数,进一步测定获得的R-藻红蛋白及其酶解物的还原力、清除羟自由基能力和对人肉瘤细胞U2O及人肝癌细胞HepG-2的肿瘤增殖抑制活性。【结果】R-藻红蛋白的最佳酶解工艺条件为：木瓜蛋白酶添加量25 000 U•g-1,pH 7.0,温度50℃,酶解时间4 h。在此条件下,R-藻红蛋白酶解物还原力为0.573,较未酶解的R-藻红蛋白提高了2.35倍;清除羟自由基能力为51.03%,较未酶解的R-藻红蛋白活性提高了3.22倍。随着浓度的增加,R-藻红蛋白及其酶解物对人肉瘤细胞U2O和人肝癌细胞HepG-2抑制生长作用增强。R-藻红蛋白对人肉瘤细胞U2O抑制作用的IC50值为2 431.32 μg•mL-1,其酶解物IC50值降低为1 271.46 μg•mL-1。R-藻红蛋白对肝癌细胞HepG-2抑制作用的IC50值为1 593.61 μg•mL-1,其酶解物IC50值降低为512.05 μg•mL-1。【结论】经木瓜蛋白酶酶解后,R-藻红蛋白酶解物具有较强的抗氧化和抑瘤活性。酶解技术可作为进一步提高R-藻红蛋白生物活性的有效手段。 相似文献
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Thyroxine-binding globulin: characterization of the binding site with a fluorescent dye as a probe 总被引：1，自引：0，他引：1
The fluorescent dye 1,8-anilinonaphthalenesulfonate competed with thyroxine for binding to thyroxine-binding globulin. Fluorescence analysis indicated that the dye bound to the globulin in a molar ratio of 1:1 and with an association constant (at 23 degrees C) of 4.19 x10(6)M(-1), and that thyroxine bound to the globulin in a molar ratio of 1:1 and with an association constant (at 23 degrees C) of 2.35x10(10)M(-1). Displacement of globulin-bound dye by thyroxine was shown by fluorescence quenching, and displacement of globulin-bound thyroxine by dye was demonstrated by ultrafiltration. 相似文献
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目的 利用近红外量子点表皮生长因子单克隆抗体荧光探针对由9,10-二甲基1,2苯并蒽（9,10-dimethylen-1,2-benzanthracene,DMBA）诱导建立的金黄地鼠颊黏膜癌变过程进行动态可视化荧光成像研究。方法 （1）用0.5%DMBA丙酮液诱导建立金黄地鼠颊黏膜癌变各期模型;（2）将水溶性近红外荧光量子点（QD800）表面功能性的修饰藕连表皮生长因子受体单克隆抗体（EGFR mAb）后,形成具有靶向功能性的QD800-EGFR mAb荧光探针;（3）将QD800-EGFR mAb经金黄地鼠各期癌变模型尾静脉注射入血液循环系统以靶向适配原理显示其颊黏膜动态癌变过程荧光图像。结果 （1）QD800-EGFR mAb能够通过血液循环系统与金黄地鼠颊黏膜癌变细胞上的EGFR特异性的靶向适配并荧光显影;（2）QD800-EGFR mAb显示的荧光图像随着金黄地鼠颊黏膜癌变程度的加深而增强,且能准确地显示癌灶的形状及浸润深度。结论 QD800-EGFR mAb通过与口腔癌不同癌变阶段癌细胞表面的EGFR靶向性适配结合来显示个体化荧光图像,可能对以后临床研究口腔癌的发生发展及转移规律发挥巨大的影响。 相似文献
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[目的]为了研究移植胁迫对枣苗叶片叶绿素a荧光参数的影响。[方法]移栽前对1年生灰枣嫁接苗进行不同程度的晾晒胁迫处理,试验分为蘸浆、晾晒0.5、1、1.52、d和留床苗(CK)6个处理,测定其叶绿素a荧光参数。[结果]结果表明:移植胁迫并没有改变灰枣叶绿素a荧光参数的日变化进程,却使枣树的初始荧光(Fo)、最大荧光(Fm)和可变荧光(Fv)升高,原初光能转化效率(Fv/Fm)和PSII潜在活性(Fv/Fo)及实际光化学量子效率(ΦPSII)降低,这些指标的升高或降低幅度随胁迫程度的增强而增大。[结论]该研究为苗木移栽的生产实践提供了理论依据。 相似文献
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Ca-GA合剂和磷浸种对水分胁迫条件下冬小麦萌发及幼苗叶绿素荧光参数的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
在干旱胁迫条件下 ,研究了钙赤合剂 (Ca -GA)和磷 (KH2 PO4 )浸种对冬小麦种子萌发及幼苗叶绿素荧光参数的影响。结果表明 :经Ca- GA处理和KH2 PO4 处理后的冬小麦种子萌发时α 淀粉酶活性显著升高 ,发芽势、发芽率均高于对照。幼苗的根冠比增大 ,叶片相对含水量增大。幼苗可变荧光 (Fv)、最大荧光 (Fm)、可变荧光与最大荧光比 (Fv/Fm)、可变荧光与初始荧光比 (Fv/Fo)、最大荧光与初始荧光比 (Fm/Fo)、光化学淬灭系数 (qP)在水分胁迫下降低幅度均小于对照 ;而初始荧光 (Fo)升高幅度小于对照 ,非光化学淬灭系数 (NPQ)升高幅度则大于对照 ,说明经Ca GA和KH2 PO4 处理可以减缓水分胁迫造成的光合电子传递、光合原初反应过程的抑制程度 ,提高光系统Ⅱ(PSⅡ)的电子传递和热耗散能力。实验结果表明 ,Ca- GA和KH2 PO4 浸种对促进冬小麦种子的萌发和提高幼苗的抗旱性有较大的帮助。 相似文献
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原子荧光法测定茶叶中的微量硒 总被引：1，自引：0，他引：1
采用氢化物发生—原子荧光光谱法测定了6种茶叶中的微量硒,即先用4体积HNO3+1体积HClO4混合酸消化茶叶样品,而后测定消化液中的硒含量。硒浓度在0～40.00μg/L范围内与荧光强度呈线性关系,线性方程为If=30.9649C+97.714,线性相关系数r=0.9998。样品6次测定结果的相对标准偏差为1.8%,加标回收率为98.4%～102.5%。 相似文献
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一个新的水稻黄化突变体的光合作用及叶绿素荧光特性研究 总被引：4，自引：1，他引：3
对水稻黄化自然突变体(安农标810S)及其野生型(安农810S)的叶绿素含量、光合速率、叶绿素荧光动力学参数及单株产量进行了比较分析,结果显示:突变体在整个生长发育阶段总叶绿素含量均显著低于野生型,但突变体与野生型各自所配的杂交F1代叶绿素含量没有差异;从叶绿素a/b的比值来看,突变体的比值明显大于野生型;从净光合速率来看,无论是在1 d中的不同时间段,还是在不同发育时期,突变体均高于野生型;在不同发育时期和1 d中的不同时间段,突变体的FV/Fm、FV′/Fm′、φPS2、ETR2及QP均大于野生型,突变体的QN低于野生型;突变体自交繁殖的单株产量高于野生型,且从各自所配的杂交后代F1来看,突变体有较强的配合力。 相似文献
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华东楠叶绿素的荧光特性 总被引：3，自引：0，他引：3
对不同季节华东楠叶片主要叶绿素荧光参数的日变化进行了测定.结果表明,华东楠叶绿素荧光参数在春季和秋季的日变化幅度较小.夏季8:00-18:00,F0、Fm、F'm、Fv、Fv／Fm、Fm/F0、Fv/F0呈现先降后升的规律,12:00左右出现最低值,而非光化学猝灭系数(NPQ)则呈现先升后降的规律,最高值出现在14:0... 相似文献