番茄乙烯形成酶基因的克隆及其反义基因的表达载体构建     

李广存  毕玉平 《山东农业科学》1999,(3):8-11

从成熟的番茄果实中提取总ＲＮＡ,进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增合成乙烯形成酶ｃＤＮＡ,并将其克隆至载体Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ的ＥｃｏＲＶ位点,经限制酶谱分析,构建亚克隆进行全序列测定和序列分析。将所克隆基因以反义基因的形式定向重组到载体ｐＳＰＲＯＫ上,同时将带有完整启动子和终止子的标记基因ＢＡＲ基因引入ｐＳＰＲＯＫ中,最终获得表达乙烯形成酶反义基因和ＢＡＲ基因的植物表达载体ｐＢＡＲ－ＥＦＥ。  相似文献   

微量板杂交法和斑点杂交法检测菊花矮化类病毒的比较     

王明霞 《福建农业大学学报(自然科学版)》1996,25(1):56-60

利用狄高辛（ＤＩＧ）标记制备菊花矮化类病毒（ＣＳＶ）特异性探针，由反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）进行ＣＳＶ ＲＮＡ的反转录和ｃＤＮＡ的扩增，然后比较２种核酸杂交方法－微量板杂交和斑点杂交检测ＣＳＶ的灵敏度。本研究结果表明，３０ｍｇ干燥样本抽提的ＣＳＶ ＲＮＡ被稀释４００倍，取４μＬ（约７５０ｐｇ样本抽提的ＲＮＡ）经ＲＴ－ＰＣＲ，其产物再用１０×ＳＳＣ稀释１００倍，采用微量板杂交仍可很容易得到  相似文献   

甜樱桃病毒病的ELISA检测研究   总被引：28，自引：0，他引：28  

阮小凤  杨勇 《山东农业大学学报(自然科学版)》1998,29(3):277-282

对陕西省甜樱桃病毒病发生情况进行了ＥＬＩＳＡ检测研究。查明了李属坏死环斑病毒（ＰＮＲＳＶ）、李矮缩病毒（ＰＤＶ）、苹果褪绿叶斑病毒（ＣＬＳＶ）和苹果花叶病毒（ＡｐＭＶ）在甜樱桃上的感染情况,即ＰＮＲＳＶ的感染率最高,ＣＬＳＶ和ＡｐＭＶ的发生也比较普遍,ＰＤＶ的感染率较少。老园的病毒感染率及混合感染类型比幼园高且复杂,说明病毒在樱桃园内可以相互传播。在较老的栽培园中,ＰＮＲＳＶ、ＰＤＶ、ＣＬＳＶ和ＡｐＭＶ的总感染率高达６４．５％。  相似文献   

应用RT-PCR和RFLP分析肾型鸡传染性支气管炎病毒基因型   总被引：8，自引：2，他引：6  

何永强  周继勇  于涟  杜青云 《浙江农业学报》2000,12(3):117-120

对来自浙江省３个不同地区的肾型鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ－ＪＤ,ＤＱ,ＨＹ）和参考株Ｈ１２０,通过蛋白酶Ｋ－ＳＤＳ处理、酚－氯仿法抽提基因组ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增得到了预期为１．７２ｋｂ的Ｓ１蛋白基因ｃＤＮＡ,用限制性内切酶ＨａｅⅢ,ＰｓｔＩ,Ｋｓｐ６３２１对Ｓ１基因ｃＤＮＡ进行ＲＦＬＰ分析。结果表明ＪＤ,ＤＱ,ＨＹ毒株的ＲＦＬＰ带型相同,但与经典的肾型ＩＢＶ代表株（即Ｔ株、Ｇｒａｙ株、Ｈｏ  相似文献   

猪生殖和呼吸综合征中国分离株ORF5基因的克隆及序列分析     

赵耘  陈博文 《中国农业大学学报》1999,4(C00):77-82

本研究利用对应于ＰＲＲＳＶＡＴＣＣＶＲ－２３３２株及ＬＶ株ＯＲＦ５基因保守序列的１对均为２５个碱基的引物１００５ＰＳ、１００６ＰＲ对ＰＲＲＳＶ中国分离株Ｂ１３进行ＲＴ－ＰＣＲ,扩增出了包括完整ＯＲＦ５基因的ＤＮＡ片段,片段长约７３０ｂｐ。将此片段定向克隆入ｐＵＣ１８载体的ＥｃｏＲＩ和ｓｔＩ位点之间,获得了Ｂ１３ＯＲＦ５基因与ｐＵＣ１８载体的重组质粒。通过ＥｃｏｒＩ／ＰｓｔＩ、ＥｃｏｒＩ／ＨｉｎｄⅢ  相似文献   

大麦黄矮病毒缺失复制酶基因植物表达载体的构建及转基因小麦的 …   总被引：2，自引：0，他引：2  

田苗英  吴茂森 《中国农业科学》1999,32(5):49-54

以大麦黄矮病毒ＧＰＶ株系的ＲＮＡ为模板,采用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,扩增出１１３４ｂｐ的缺失复制酶基因。将扩增的片段克隆到ｐＵＣ１９的Ｓｍａｌ位点上并进行了序列测定,获得正向插入的重组质粒ｐＵＣ１９Ｄ。以Ｋｐｎｌ从Ｘｂａｌ从ｐＵＣ１９Ｄ上切下此基因并插入质粒ｐＥｍｕ－ｍｃｓ－Ｎ得到植物表达载体ｐＰＰＩ８。应用花粉管通道法转化普通小麦品种陇鉴１２７、陕１６０和晋麦４７,通过卡那酶  相似文献   

RT-PCR方法检测烟草环斑病毒的研究   总被引：14，自引：1，他引：14  

孔宝华  蔡红  陈海如  唐慧  沐咏民  刘进元 《云南农业大学学报(自然科学版)》2001,16(1):13-15

 根据烟草环斑病毒（TRSV）外壳蛋白基因非编序列设计的引物P1,P2,用感病及健康组织总RNA为模板,进行cDNA 合成和PCR试验,感病组织中扩增出了600 bp的目的片段,而健康组织中无此扩增带。摸索各项实验条件,建立了RT-PCR检测烟草环斑病毒（TRSV）的方法。  相似文献   

新城疫病毒Ulster株血凝素-神经氨酸酶基因的克隆与鉴定     

刘伟忠  姜焱  吴艳涛  彭大新  张如宽  刘秀梵 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》1997,(3)

新城疫病毒Ｕｌｓｔｅｒ株经ＳＰＦ鸡胚增殖和超速离心纯化后，以酚－ＳＤＳ法提取其基因组ＲＮＡ，作为反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的模板。根据其已发表的Ｆ和ＨＮ基因核苷酸序列，合成一个长为３０ｍｅｒ的寡核苷酸（位于Ｆ基因内）和一对分别长为２８、３０ｍｅｒ的寡核苷酸（位于ＨＮ基因两侧）分别作为反转录引物和ＰＣＲ引物。扩增反应产物经琼脂糖凝胶电泳分析，出现一条长为１．９３ｋｂ的特异性条带，与预期相符。并将此特异性条带克隆入质粒载体ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（＋）中，并经限制性核酸内切酶分析（ＲＥＡ）。ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＥＡ结果证实其为新城疫病毒Ｕｌｓｔｅｒ株的血凝素－神经氨酸酶基因。  相似文献   

益生地衣芽孢杆菌天门冬氨酸激酶Ⅱ基因的PCR扩增及序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

吕道俊  何明清 《四川农业大学学报》1999,17(4):411-417,

通过聚合酶链反应（ＰＣＲ） 扩增得到了益生地衣芽孢杆菌Ｈ８８ － ３ 株天门冬氨酸激酶（Ａｓｐａｒ ｔｏｋｉｎａｓｅ,ＡＫ） Ⅱ基因,并用ＡＢＩＰＲＩＳＭＴＭ ３７７ ＤＮＡＳｅｑｕｅｎｃｅｒ 进行序列测定,所得核苷酸序列及推导的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌ＶＢ２１７ 株进行了比较,结果它们的同源性非常高。  相似文献   

黄瓜花叶病毒亚组研究进展   总被引：17，自引：0，他引：17  

徐平东  谢联辉 《福建农业大学学报(自然科学版)》1998,27(1):82-91

综述了黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）亚组研究的进展,根据寄主反应,血清学关系,病毒外壳蛋白肽链图谱分析,ｄｓＲＮＡ分析,核酸杂交,ＲＴ－ＰＣＲ产物酶解分析及核酸序列分析等方法,可将现有ＣＭＶ株系成分离物区分成２个亚组,尤其是利用单克隆抗体,核酸杂交、ＰＣＲ及核酸序列分析,能准确地将不同亚组的分离物区分开。从已知序列的ＣＭＶ株系分析,不同亚组株系的核苷酸序列同源率各ＲＮＡ组分仅为５８％￣７５％,同亚组株系的  相似文献