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对猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N)作为ELISA抗原进行了研究,将编码PRRSVN蛋白的基因0RF7cDNA插入杆状病毒表达载体pBlueBacHis2A,通过同源重组获得了重组杆状病毒ORF7-AcMNPV,感染昆虫细胞SF9表达了N蛋白,占细胞总蛋白的7.07%,纯化后作为抗原建立了间接ELISA,与IDEXX公司的ELISA诊断试剂盒有96%的符合率,与IFA有100%的符合率。试验证实:PRRSVN蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测PRRSV抗体的良好抗原。 相似文献
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建立了一种阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪血清中猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒(PorcinereproductiveandrespiratorysyndromeVirus,PRRSV)抗体并与欧洲广泛使用的血清学诊断试验-免疫过氧化物酶单层试验加以比较。当使用野外血清和实验感染PRRSV后早期采集的血清试验时发现,阻断ELISA是特异性的,而且比IPMA更敏感,没有遇到的在IPMA或间接EL 相似文献
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斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立 总被引:6,自引:0,他引:6
首次建立了斑点-酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV,美洲株)抗体的方法。特异性鉴定表明,PRRSV不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应;与美国进口的PRRSV抗体ELISA诊断试验盒检测结果比较,35份猪血清的阴、阳性检出总符合率为82.9%(29/35),其中Dot-ELISA的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率。 相似文献
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检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA方法的建立 总被引:19,自引:0,他引:19
本试验通过差速离心法和非线性蔗糖密度梯度离心法纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。经三氯-三氟乙烷处理后,作为ELISA试验的标准抗原,并建立了检测PRRSV抗体ELISA方法。该方法与IFA、IPMA和国外同类商品化试剂盒进行了对比试验,表明该方法具有敏感性高、特异性好的特点,是一种快速准确检测PRRSV抗体的方法。间接ELISA方法在敏感性上要优于IFA和IPMA》 相似文献
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建立了一种阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪血清中猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒(PorcinereproductiveandrespiratorysyndromeVirus,PRRSV)抗体并与欧洲广泛使用的血清学诊断试验一免疫过氧化物酶单层试验(Immunoperoxidasemonolayerassay,IPMA)加以比较。当使用野外血清和实验感染PRRSV后早期采集的血清试验时发现,阻断ELISA是特异性的,而且比IPMA更敏感。没有遇到在IPMA或间接ELISA中所见的底色深的问题。 相似文献
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猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较 总被引:7,自引:0,他引:7
在我国吉林省某地猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)抗体阳性猪群的4头2日龄弱仔猪实质脏器中分离到2株PRRSV。间接荧光抗体试验(IFA)结果表明,PRRSV(LV.VR-2332)抗血清与2个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株(LV.VR-2332)也呈阳性反应;而分离株与HCV、PrV、PPV、TGEV、PEDV和HEV无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到2株地方性PRRSV。进一步用六种PRRSV单抗(A~F)进行IFA试验,结果2个分离株与VR-2332的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。 相似文献
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禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究 总被引:48,自引:1,他引:47
用表达禽流感病毒(AIV)核蛋白基因的杆状病毒感染Sf9昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术(rNP-ELISA)。其抗原最适包被量为0.6μg/孔,等检血清最适稀释度为1:200,酶标抗体使用浓度为1:1000。根据对140份SPF鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为OD均为阴性;检测A型AIV15个不同亚型(H1 ̄H15)毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种AIV的SPF鸡第3天即能检出抗体,到第162天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在2.9% ̄7.2%和3.4% ̄9.8%之间。对3138份鸡血清进行监测,rNP-ELISA与全病毒间接ELISA与全病毒间接ELISA(AIV-ELISA)、琼脂扩散 相似文献
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应用重组猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白为抗原建立I—ELISA检?… 总被引:2,自引:0,他引:2
用重组杆状病毒表达的钎生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白作为抗原,建立了诊断猪生殖和呼吸综合征(PRRS)的I-ELISA,与IDEXX公司试剂盒检测结果的符合率为97.3%,与间接 光抗体试验9IFA)的符合率为100%。用该方法的检测国内猪血清85份,阳性率为18.8%;能检出PRRS疫苗免疫猪6d的血清抗体,;与猪瘟、伪狂犬病、猪巴氏杆菌病、猪霉形体病阳性血清无交叉反应。 相似文献
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对实验小鼠感染小鼠肺炎病毒(PVM)用间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)进行检测,其敏感性、特异性、重复性和稳定性的达到满意效果。结果显示,用PVM接种BHK21细胞经初、高、超差速离心浓缩制备的抗原,与仙台病毒,小鼠肝炎 呼肠孤病毒3型的免疫小鼠血清抗体不产生交叉反应,阻断抑制率大于50%;I-ELISA与HI对50份小鼠血清检测其阳性检出率分别为30%和20%;将制备的检测抗的在-20℃保 相似文献
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快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用 总被引:9,自引:2,他引:7
以抗鸡新城疫病毒(NDV)单抗夹心ELISA试验为基础,在6000,建立了PEG-ELISA法,使用此法检测临诊样品,与单抗夹心ELISA相比,时间缩短70分钟且提高了OD490值,易于识别。结果表明,PEG-ELISAI法具有实际应用价值。PEG能加强抗原-抗体反应的速率和强度,这种效应在固相夹心ELISA第二步表现尤其明显。PEG的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ELISA试验可能具有 相似文献
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猪生殖—呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧,美PRRSV … 总被引:2,自引:0,他引:2
在我国吉林省某地猪生殖呼吸道综合征病毒(PRRSV)抗体阳性猪群的4头2日龄弱仔猪实质脏器中分离到2株PRRSV,间接荧光抗体试验(IFA)结果表明,PRRSV(LV.VR-2332)抗血清与2个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株(LV.VR-2332)也呈阳性反应,而分离株与HCV,PrV,PPV,TGEV,PEDV和HEV无交叉抗原,以上试验证明,我们已成功地分离到2株地方性PR 相似文献
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应用本瓜蛋白酶消化法,从马立克氏病病毒(MDV)人工感染鸡的淋巴细胞瘤表面提取马立克氏病相关肿瘤表面抗原(MATSA)。所获得的抗原与从肿瘤细胞表面洗脱的抗MATSA抗体在ELISA中呈阳性反应。将这种抗原与白油佐剂乳化,给20日龄鸡肌注免疫3次,应用间接ELISA对被免疫鸡的MATSA抗体进行了监测。结果表明,免疫前正常鸡的血清中无MATSA抗体存在,而用这种抗原免疫后10天即可形成抗体应答,E 相似文献
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间接酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸系统综合征血清抗体的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究建立了检测猪生殖与呼吸系统综合征(PRRS)血清抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),其抗原包被浓度为2μg/ml,血清最适稀释度为1∶100。试验结果表明:ELISA的敏感性高于间接免疫荧光抗体试验(IFA),是一种切实可行的诊断方法。 相似文献
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银加强胶体金技术检测猪细小病毒的研究 总被引:18,自引:1,他引:17
本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒(PPV)抗原的银加强胶体金检测法(SECGA),并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化PPV抗原的最低检出量为0.3125ng/点,其敏感性分别为间接Dot-ELISA和HA的8倍和1000倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明SECGA具有较高的特异性。20份样本SECGA的检测结果与病毒分离和鉴定结果完全相符。SECGA和间接Dot-ELISA对77份样本检测的阳性率分别为83.1%和80.5%,其阳性符合率为96.9%。研究结果表明本法具有经济、敏感性、特异性强等优点,可用于PPV感染的特异诊断。为胶体金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究奠定基础。 相似文献
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间接Dot-ELISA检测猪细小病毒抗原的研究 总被引:4,自引:1,他引:3
本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)用于检测PPV抗原对纯化PPV抗原的最低检出量为2.5ng/点。PPV阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明,该方法对PPV抗原的检测具有特异性。以该方法检测PPV人工感染兔样本和自然染猪样本,PPV抗原的阳性检出率分别为肾样本100%(17/17)、81.82%(91/11),肝样本100%(16/16)、56.52%(13/23)。20份随机样本的间接Dot-ELISA检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。 相似文献
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Dot—ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究 总被引:10,自引:3,他引:7
用差速离心法提纯PRRS病毒,利用NC膜作为载体,在国内外首次成功建立了检测PRRS血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)。抗原包被浓度为100μg/ml,被检血清工作浓度为1:10,酶标兔抗猪IgG工作浓度为1:600。对72份北京地区猪血清分别用Dot-ELISA和IF检测,Dot-ELISA检测阳性率为33.3%,IF检测阳履率为30.6%,与IF符合率较高,对部分待检血清检测 相似文献
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