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1.
为检测以LRP6受体为激活开关的Wnt-β-catenin信号通路与PrP106-126毒性多肽引起的神经元损伤之间的相互关系,并研究该信号通路与神经保护性蛋白REST的相关性,从而进一步阐明Wnt-LRP6-REST对毒性多肽引起的神经元损伤的影响。利用Wnt信号通路的激活剂Licl、抑制剂DKK1或PrP106-126毒性多肽刺激原代神经元,通过免疫印迹检测神经保护性蛋白REST及Wnt信号通路下游相关蛋白的变化情况,通过激光共聚焦观察REST与Wnt信号通路正相关蛋白β-catenin的共定位情况。分别构建LRP6的过表达质粒pCMV-C-HALRP和干扰质粒pGPH1/GFP/Neo-LRP6-Rat shRNA-1和shRNA-2,将已经构建好的质粒转染进入原代神经元。通过免疫印迹检测PrP106-126毒性多肽对Wnt信号通路标志性蛋白(β-catenin及GSK3β)的影响,检测LRP6的过表达或干扰对REST或Wnt信号通路下游蛋白的影响。通过免疫荧光观察LRP6对由毒性多肽诱导的神经纤维损伤的影响,用流式细胞仪检测相应的细胞活力。由LRP6受体激活的Wnt-β-catenin信号通路在一定程度上正向调控神经保护性蛋白REST的表达,LRP6在信号调节的过程中起到了关键作用,并且LRP6对由PrP106-126毒性多肽引起的神经元损伤有缓解作用,LRP6的过表达增加了神经元细胞的活力,起到了神经保护作用。 相似文献
2.
朊蛋白多肽PrP 106-126对小鼠成神经瘤细胞N2a的毒性研究 总被引：1，自引：1，他引：0
采用Annexin V-FITC/PI双重染色的流式细胞检测和细胞凋亡的形态学观察,探讨了朊蛋白多肽PrP106-126对小鼠成神经瘤细胞系N2a细胞的毒性作用.结果表明:15、25和50μmol/L浓度的PrP 106-126作用于N2a细胞24 h均引起了细胞明显的形态学变化,提高了细胞凋亡率(P＜0.05),且浓度越大,凋亡效果越明显;在浓度为25μmol/L时,PrP 106-126作用N2a细胞48 h引起的毒性作用明显大于24 h,而100μmol/L PrP 106-126作用N2a细胞12 h并未引起细胞凋亡(P＞0.05).试验还表明PrP 106-126对神经细胞产生的毒性是淀粉样纤维物质作用细胞逐渐造成的结果. 相似文献
3.
为了研究异荭草苷(Isoorientin, ISO)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及其机制,将对数生长期的RAW264.7细胞随机分为对照组、模型组(LPS 1μg·mL-1)和异荭草苷(ISO 2.5～40μg·mL-1+LPS)给药组。各组细胞培养24 h后,MTT法检测ISO对RAW 264.7细胞毒性,Griess法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)的含量,ELISA法检测细胞培养液中TNF-α的含量,q RT-PCR方法检测环氧合酶2(COX-2)m RNA的表达水平,蛋白质印迹分析法测定细胞中COX-2、JNK、p-JNK、p38、p-p38、FoxO1和FoxO3蛋白的表达。结果表明,与LPS模型组比较,ISO显著抑制LPS诱导的TNF-α(P<0.001)和NO(P<0.01)的产生,且未见其细胞毒性。此外,ISO以剂量依赖的方式显著抑制RAW 264.7细胞COX-2基因(P<0.001)和蛋白(P<0.05)的表达。蛋白质印迹分析显示... 相似文献
4.
目的：研究黄连素对软脂酸诱导人脐静脉内皮细胞（ HUVECs）损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制.方法采用500μmol/L软脂酸培养HUVECs 24 h,建立内皮细胞损伤模型,MTT法观察黄连素对细胞存活率的影响;检测细胞培养上清液中一氧化氮（ NO）含量;RT-PCR法检测内皮型一氧化氮合酶（ eNOS） mRNA水平;Western blot方法检测eNOS和磷酸化eNOS蛋白的表达.结果与对照组比较,软脂酸组细胞存活率降低（ P〈0.05）,培养液中NO含量下降（P〈0.05）,细胞内eNOS mRNA水平、eNOS及磷酸化eNOS蛋白表达水平均显著下降（P〈0.01,P〈0.05）.与软脂酸组比较,黄连素组细胞存活率增加,培养液中NO含量明显提高（P〈0.05）,细胞内eNOS mRNA水平和磷酸化蛋白表达水平均显著提高（P〈0.01,P〈0.05）.结论黄连素对软脂酸引起的血管内皮细胞损伤有显著的保护作用,并可能与上调eNOS、促进NO生成有关. 相似文献
5.
目的 用黄芩苷干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,观察黄芩苷对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 用qRT-PCR检测miR-126的表达变化,Western-blot检测Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、p-p38和p53的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 miR-126在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达比正常乳腺细胞低,黄芩苷干预乳腺癌细胞后miR-126上调最为明显（P<0.05）。用miR-126 mimics、miR-126 inhibitors转染乳腺癌细胞,Western-blot显示黄芩苷及miR-126 mimics作用于人乳腺癌细胞后Bcl-2表达水平下降,Caspase-9和Caspase-3的裂解产物、p-p38、p53表达增加,差异有统计学意义（P<0.05）。MTT法显示黄芩苷和miR-126 均可抑制乳腺癌细胞的增殖,流式细胞术显示黄芩苷与miR-126 mimics促进癌细胞凋亡。结论 黄芩苷可以抑制乳腺癌细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与通过上调miR-126调节凋亡相关基因有关。 相似文献
6.
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2017,(3)
通过CCK-8法检测齐墩果酸对巨噬细胞增殖的影响;采用Griess试剂检测细胞培养液中NO含量,通过Western Blot法分析iNOS蛋白表达和MAPK通路p38,ERK和JNK蛋白表达和磷酸化状态,研究齐墩果酸对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响,探讨齐墩果酸抗感染作用及机制。结果表明:齐墩果酸(100.0μmol·L~(-1))明显抑制巨噬细胞增殖(P0.05);12.5~100.0μmol·L~(-1)的齐墩果酸能够显著抑制脂多糖诱导巨噬细胞分泌NO(P0.01),并能显著抑制LPS诱导iNOS蛋白的表达;LPS作用后能够激活ERK通路,抑制p38和JNK通路磷酸化,齐墩果酸作用后,能显著抑制ERK磷酸化,促进JNK和p38蛋白的磷酸化。证明齐墩果酸能显著降低脂多糖诱导巨噬细胞分泌NO,通过抑制iNOS的表达和双向调控MAPK通路蛋白磷酸化达到抗感染作用。 相似文献
7.
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2017,(1)
通过ELISA测定犬新孢子虫感染对小胶质细胞中细胞因子TNF-α、iNOS、IL-10和Arg-1的影响,鉴定小胶质细胞的活性;用Western blot检测分析犬新孢子虫对小胶质细胞中PPARγ/NF-κB信号通路的影响;探讨犬新孢子虫感染对小胶质细胞活性的影响及机制。结果表明:犬新孢子虫感染5d后,小胶质细胞中IL-10和Arg-1的表达显著升高(P0.01),TNF-α和iNOS的表达显著降低(P0.01)。PPARγ抑制剂GW9662预处理后,结果则与其相反。同时,犬新孢子虫感染后,能够上调PPARγ的活性,降低p65的磷酸化水平。犬新孢子虫感染能够激活PPARγ/NF-κB信号通路诱导小胶质细胞活性的变化。 相似文献
8.
为分析细胞核转录因子κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路在丝状支原体山羊亚种(Mmc)感染山羊肺泡上皮细胞中的分子作用机制,将Mmc感染细胞,于4 h、8 h、12 h和24 h收集细胞,利用实时定量PCR检测NF-κBp65 mRNA的表达水平。采用不同浓度的NF-κB抑制剂BAY11-7082与细胞孵育1 h,然后用Mmc感染细胞,于24 h收集细胞,利用实时定量PCR检测白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达水平,用试剂盒检测Caspase-3活性、H2O2和NO浓度变化,利用平板计数检测Mmc对细胞的致病力变化。结果显示,Mmc于8 h、12 h和24 h等3个时间点显著提高细胞NF-κBp65 mRNA表达水平(P0.01);Mmc显著提高细胞IL-8 mRNA水平、TNF-αmRNA水平、Caspase-3的活性、H2O2和NO浓度(P0.01),而BAY11-7082(浓度为5μmol/L和10μmol/L)能够显著降低Mmc介导的细胞IL-8 mRNA水平、TNF-αmRNA水平、Caspase-3的活性、H2O2和NO浓度的升高(P0.05),且可显著降低细胞中Mmc存活量(P0.05)。综上可知,NF-κB信号通路在Mmc致病机制中发挥重要作用。 相似文献
9.
探讨线粒体凋亡途径在硫酸黏菌素诱导PC12细胞凋亡中作用。取对数生长期PC12细胞,用含0、62.5、125、250μg.mL-1硫酸黏菌素DMEM培养液,作用24 h,采用Hoechst33258荧光染色法检测PC12细胞凋亡,Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)、Bax、Bcl-2蛋白表达含量,试剂盒检测Caspase-3活性。与对照组相比,125、250μg.mL-1硫酸黏菌素剂量组细胞PC12细胞Cyt-C、Bax蛋白表达量、Caspase-3活性显著升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),具有剂量-效应关系。说明线粒体途径介导PC12细胞凋亡是硫酸黏菌素神经毒性作用机制之一。 相似文献
10.
目的研究蒲黄黄酮对缺氧损伤血管内皮细胞人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)活性、内皮素(ET)、一氧化氮(NO)含量的影响。方法缺氧诱导血管内皮细胞损伤,MTT比色法观察蒲黄黄酮对血管内皮细胞的影响,酶联免疫法测定细胞培养液中内皮素-1(ET-1)、NO的含量。结果蒲黄黄酮可提高缺氧时HUVE-12细胞活性,减少NO降低程度(P<0.05),抑制ET-1的生成(P<0.05),蒲黄黄酮对HUVE-12细胞的这种保护作用与其浓度存在一定的量效关系。结论蒲黄黄酮对缺氧损伤的血管内皮细胞HUVE-12具有保护作用,其作用可能与NO和ET-1的生成有关。 更多还原 相似文献
11.
[目的]观察不同剂量三氧化二砷(As2O3)对体外培养的大鼠成骨细胞增殖、骨形成蛋白-2(BMP-2)基因表达的影响。[方法]不同浓度(10、1、0.1μmol/L)的三氧化二砷作用于体外培养的成骨细胞48和72 h后,观察成骨细胞的形态,采用MTT法检测成骨细胞的增殖,并通过RT-PCR检测成骨细胞BMP-2基因的表达情况。[结果]10μmol/L As2O3组可见部分成骨细胞变圆变小,细胞核固缩、碎裂,细胞膜皱褶、凹陷;1μmol/L As2O3组成骨细胞数目众多和分裂相明显;0.1μmol/L As2O3组成骨细胞间连接紧密。10μmol/LAs2O3组大鼠成骨细胞OD值明显低于对照组,而72 h OD值低于48 h OD值,有显著性差异(P0.01);1μmol/L组As2O3OD值明显高于对照组,而72 h OD值高于48 h OD值,有显著性差异(P0.01);0.1μmol/L As2O2组72 h OD值与48 h OD值无显著差异(P0.05),且OD值与对照组无显著差异(P0.05)。RT-PCR结果表明,10μmol/L组72 h BMP-2基因表达明显低于48 h,且BMP-2的表达明显低于对照组,有显著性差异(P0.01);1μmol/L As2O3组72 h BMP-2基因表达与48 h无显著差异(P0.05),且BMP-2基因表达与对照组(P0.05);0.1μmol/L As2O3组72 h BMP-2基因表达明显高于48 h,且BMP-2的表达明显高于对照组,有显著性差异(P0.01)。[结论]As2O3对体外培养大鼠成骨细胞增殖和BMP-2 mRNA表达具有双向调节作用,并且呈剂量-时间依赖性。 相似文献
12.
热应激大白鼠脾脏和肝脏组织HSP70和NOS的表达变化 总被引：1，自引：0，他引：1
随机选用42只6月龄健康雄性SD大白鼠,研究热应激处理1 h后恢复0、2、4、8、12、48 h6个时段脾脏和肝脏组织热应激蛋白70(HSP70)和一氧化氮合成酶(NOS)免疫组织的化学变化规律.结果表明:(1)热应激处理后恢复4 h,大白鼠脾脏组织HSP70的阳性表达达到高峰,大量细胞破裂,8 h后呈逐渐下降的趋势;恢复0、2、4、8、12 h的阳性表达与对照的差异均达极显著水平(P0.01),恢复48 h的阳性表达与对照的差异不显著(P0.05).(2)热应激处理后各恢复期肝脏组织HSP70的阳性表达与对照的差异均不显著(P0.05).(3)热应激处理后恢复8 h,肝脏组织NOS的阳性表达达到高峰,而后逐渐下降;恢复0、2、4、8、12 h的阳性表达与对照的差异均达极显著水平(P0.01);恢复48 h的阳性表达与对照的差异不显著(P0.05),恢复0、2、4、8、12 h间的阳性表达差异均达极显著水平(P0.01);(4)热应激处理后各恢复期脾脏组织NOS的阳性表达与对照的差异均不明显. 相似文献
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血必净注射液治疗大鼠脓毒症的实验研究 总被引：1，自引：0，他引：1
目的 观察血必净注射液(XBJ)对脓毒症大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响,探讨XBJ治疗脓毒症的作用机制.方法 120只雄性SD大鼠随机等分为假手术组(A组)、盲肠结扎穿孔组(B组)、XBJ早期治疗组(C组)、XBJ晚期治疗组(D组).采用盲肠结扎穿孔术制作大鼠脓毒症模型,C组术后立即腹腔注射XBJ,D组术后24h注射XBJ.术后0h、6h、12h、24h、48h、72h随机处死大鼠,采用ELISA和RT-PCR分别检测血浆、肝组织中HMGB1表达.另取30只大鼠以B、C、D3组同样的模型及处理方式观察生存时间.结果 B组大鼠的脓毒症表现最为明显,其生存时间比C组和D组明显缩短(P＜0.01).A组各时间点均较低;B组大鼠血浆HMGB1水平在术后6h开始升高,24h达到峰值;C组24h浓度显著低于B、D组(P＜0.05或0.01);D组仅在72h时显著低于B组(P＜0.01).B组大鼠肝组织HMGB1表达水平在术后12h开始升高,24h达到高峰;C组24、48、72h水平显著低于B组(P＜0.01);D组48h显著低于B组,而24、72h高于C组(P＜0.01或0.05).结论 血必净是治疗脓毒症的可靠药物,其作用机制可能与抑制HMGB1的表达有关. 相似文献
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【目的】利用朊蛋白双基因敲除（PRNP-/-）羊制备朊蛋白多克隆抗体,并对其特性进行分析。【方法】构建山羊朊蛋白（PrP）原核表达载体,转入大肠杆菌并诱导表达,纯化获得羊PrP;将获得的PrP免疫PRNP-/-山羊,制备朊蛋白特异性的多克隆抗体;并对获得的朊蛋白多克隆抗体进行ELISA及Western-blot检测。【结果】获得了大量的朊蛋白特异性抗血清,间接ELASA检测抗血清中朊蛋白多克隆抗体的效价为25600;Western-blot检测显示所制备抗体不仅可以识别鼠、牛、羊脑组织内源性朊蛋白,而且能识别鼠脑组织内朊病毒。【结论】PRNP-/-转基因山羊可用于制备大量高亲和力朊蛋白多克隆抗体,获得的抗体可用于多种动物朊蛋白及朊病毒类疾病的检测。 相似文献
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Chesebro B Trifilo M Race R Meade-White K Teng C LaCasse R Raymond L Favara C Baron G Priola S Caughey B Masliah E Oldstone M 《Science (New York, N.Y.)》2005,308(5727):1435-1439
In prion and Alzheimer's diseases, the roles played by amyloid versus nonamyloid deposits in brain damage remain unresolved. In scrapie-infected transgenic mice expressing prion protein (PrP) lacking the glycosylphosphatidylinositol (GPI) membrane anchor, abnormal protease-resistant PrPres was deposited as amyloid plaques, rather than the usual nonamyloid form of PrPres. Although PrPres amyloid plaques induced brain damage reminiscent of Alzheimer's disease, clinical manifestations were minimal. In contrast, combined expression of anchorless and wild-type PrP produced accelerated clinical scrapie. Thus, the PrP GPI anchor may play a role in the pathogenesis of prion diseases. 相似文献
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Knockdown of the Meq gene in Marek's disease tumor cell line MSB1 might induce cell apoptosis and inhibit cell proliferation and invasion 
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下载免费PDF全文 ZHAO Chun-fang LI Xin HAN Bo QU Lu-jiang LIU Chang-jun Jiu Zhou SONG YANG Ning LIAN Ling 《农业科学学报》2020,19(11):2767-2774
Marek's disease (MD), a highly cell-associated and contagious disease of chickens caused by Marek's disease virus (MDV) can result in neural lesions, immunosuppression and neoplasia in chicken. The Meq gene is an important oncogene in the MDV genome, and it is expressed highly in MD tumor tissues and MD T-lymphoblastoid cell lines. An experiment was conducted to elucidate the role of Meq in MD tumor transformation. RNA interference technology was used to block its expression, and then analyzed the biological effects of Meq knockdown on the MD tumor cell line MSB1. A small interfering RNA with an interference efficiency of 70% (P<0.01) was transfected into MSB1 cells to knock down the expression of Meq gene. The cell proliferation, cycle and apoptosis were detected post-Meq knockdown. The results showed that MSB1 cell proliferation was downregulated remarkably at 48 h (P<0.01), 60 h (P<0.05) and 72 h (P<0.01) post-Meq knockdown. The cell cycle was unaffected (P>0.05). B-cell lymphoma 2 gene (BCL2) was anti-apoptotic and caspase-6 was the effector in the apoptosis pathway. The activity of caspase-6 was upregulated (P<0.05) significantly and BCL2 gene expression was downregulated (P<0.05) significantly post-Meq knockdown, suggesting cell apoptosis might be induced. MSB1 cell migration did not exhibit any obvious change (P>0.05) post-Meq knockdown, but the expression of two genes (matrix metalloproteinase 2 (MMP2) and MMP9) that are correlated closely to cell invasion was downregulated (P<0.05) remarkably post-Meq knockdown. The Meq knockdown might affect the main features of tumorous cells, including proliferation, apoptosis, and invasion, suggesting that the Meq gene might play a crucial role in interfering with lymphomatous cell transformation. 相似文献
17.
Heppner FL Musahl C Arrighi I Klein MA Rülicke T Oesch B Zinkernagel RM Kalinke U Aguzzi A 《Science (New York, N.Y.)》2001,294(5540):178-182
Variant Creutzfeldt-Jakob disease and bovine spongiform encephalopathy are initiated by extracerebral exposure to prions. Although prion transmission from extracerebral sites to the brain represents a potential target for prophylaxis, attempts at vaccination have been limited by the poor immunogenicity of prion proteins. To circumvent this, we expressed an anti-prion protein (anti-PrP) mu chain in Prnp(o/o) mice. Transgenic mice developed sustained anti-PrP titers, which were not suppressed by introduction of Prnp+ alleles. Transgene expression prevented pathogenesis of prions introduced by intraperitoneal injection in the spleen and brain. Expression of endogenous PrP (PrP(C)) in the spleen and brain was unaffected, suggesting that immunity was responsible for protection. This indicates the feasibility of immunological inhibition of prion disease in vivo. 相似文献
18.
Wadsworth JD Asante EA Desbruslais M Linehan JM Joiner S Gowland I Welch J Stone L Lloyd SE Hill AF Brandner S Collinge J 《Science (New York, N.Y.)》2004,306(5702):1793-1796
Variant Creutzfeldt-Jakob disease (vCJD) is a unique and highly distinctive clinicopathological and molecular phenotype of human prion disease associated with infection with bovine spongiform encephalopathy (BSE)-like prions. Here, we found that generation of this phenotype in transgenic mice required expression of human prion protein (PrP) with methionine 129. Expression of human PrP with valine 129 resulted in a distinct phenotype and, remarkably, persistence of a barrier to transmission of BSE-derived prions on subpassage. Polymorphic residue 129 of human PrP dictated propagation of distinct prion strains after BSE prion infection. Thus, primary and secondary human infection with BSE-derived prions may result in sporadic CJD-like or novel phenotypes in addition to vCJD, depending on the genotype of the prion source and the recipient. 相似文献
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文章以肉鸡脂肪细胞为模型,探讨槲皮素对过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)调节脂质代谢作用。试验分对照组(5%培养液)、DMSO对照组(5%培养液+DMSO)、试验组1(5%培养液+10 mg.L-1槲皮素)、试验组2(5%培养液+20 mg.L-1槲皮素)、试验组3(5%培养液+40 mg.L-1槲皮素)。采用ELISA法检测脂肪细胞加槲皮素培养24、48、72 h后PPARγ、脂肪酸合成酶(FAS)、脂蛋白酯酶(LPL)、脂肪酸转运蛋白1(FATP1)、瘦素(leptin)蛋白含量,利用荧光定量PCR检测PPARγ、FAS、FATP1和LPL mRNA表达,利用酶法检测脂肪细胞甘油三酯(TG)含量。结果表明,与对照组相比,24 h,试验组3 PPARγmRNA表达显著降低(P<0.05);试验组1、2和3FATP1 mRNA表达均显著降低(P<0.05);试验组3 FAS mRNA表达显著降低(P<0.05),而试验组1和2有降低趋势(P=0.052),而试验组3 FAS蛋白含量显著降低(P<0.05);试验组2和3 TG含量均显著降低(P<0.05);试验组3leptin含量显著提高(P<0.05)。48 h,试验组3 PPARγmRNA表达显著降低(P<0.05),而试验组1和2有下降趋势(P=0.053),试验组1、2和3 PPARγ蛋白含量均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3 LPL mRNA均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3 FAS mRNA表达有下降趋势(P=0.05),而试验组2、3FAS蛋白含量均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3 FATP1 mRNA表达和蛋白含量均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3TG含量均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3 leptin含量均显著提高(P<0.05)。72 h,试验组1、2和3 PPARγmRNA表达和蛋白含量均显著降低(P<0.05);试验组2 LPL mRNA显著降低(P<0.05);试验组3 FATP1 mRNA表达显著降低(P<0.05),而试验组1和2有下降趋势(P=0.057),试验组1、2和3 FATP1蛋白含量均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3 FASmRNA表达均显著降低(P<0.05),而试验组3FAS蛋白含量显著降低(P<0.05);试验组1、2和3TG含量均显著降低(P<0.05);试验组1、2和3 leptin含量均显著提高(P<0.05)。综上所述,槲皮素可以抑制脂肪水解、跨膜转运和脂肪胞内沉积,从而抑制脂肪细胞脂肪合成代谢,但作用效果未见槲皮素浓度和时间依赖性。即槲皮素可抑制鸡脂肪细胞PPARγ调节脂肪合成代谢,进而减少肉鸡脂肪沉积。 相似文献