共查询到20条相似文献，搜索用时 15 毫秒
1.
【目的】营养期杀虫蛋白Vip3A是一种由苏云金芽孢杆菌在对数生长期产生的新型杀虫毒素。Vip3A与敏感昆虫中肠上皮细胞的结合是其发挥杀虫活性的关键步骤。为进一步探究Vip3A毒素的杀虫机理,研究Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡(BBMVs)的结合特性。【方法】在大肠杆菌中用IPTG诱导表达Vip3Aa10,用亲和层析和离子交换层析的方法纯化蛋白,并用胰蛋白酶活化Vip3Aa10,得到Vip3Aa10-T。然后分析Vip3Aa10前毒素和Vip3Aa10-T对甜菜夜蛾的杀虫活性,用免疫印迹法和配体印迹法分析Vip3Aa10-T与甜菜夜蛾BBMVs的结合特性以及在甜菜夜蛾BBMVs上的结合蛋白。【结果】Vip3Aa10-T与Vip3Aa10前毒素对甜菜夜蛾的杀虫活性很高。Vip3Aa10-T在pH8.0时更容易与甜菜夜蛾BBMVs结合,并且能够与非敏感性昆虫黄粉虫BBMVs结合。在相同pH条件下,Vip3Aa10前毒素比Vip3Aa10-T更容易与甜菜夜蛾BBMVs结合。Vip3Aa10-T在甜菜夜蛾BBMVs上有4条结合蛋白,其分子量分别为80、38、31和22kDa。【结论】活化的Vip3Aa10与甜菜夜蛾BBMVs的结合是pH依赖性的,并且能与BBMVs上的4个蛋白结合。 相似文献
2.
《北京农学院学报》2020,(1)
【目的】营养期杀虫蛋白Vip3A是一种由苏云金芽孢杆菌在对数生长期产生的新型杀虫毒素.Vip3A与敏感昆虫中肠上皮细胞的结合是其发挥杀虫活性的关键步骤.为进一步探究Vip3A毒素的杀虫机理,研究Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡(BBMVs)的结合特性.【方法】在大肠杆菌中用IPTG诱导表达Vip3Aa10,用亲和层析和离子交换层析的方法纯化蛋白,并用胰蛋白酶活化Vip3Aa10,得到Vip3Aa10GT.然后分析Vip3Aa10前毒素和Vip3Aa10GT对甜菜夜蛾的杀虫活性,用免疫印迹法和配体印迹法分析Vip3Aa10GT与甜菜夜蛾BBMVs的结合特性以及在甜菜夜蛾BBMVs上的结合蛋白.【结果】Vip3Aa10GT与Vip3Aa10前毒素对甜菜夜蛾的杀虫活性很高.Vip3Aa10GT在p H80时更容易与甜菜夜蛾BBMVs结合,并且能够与非敏感性昆虫黄粉虫BBMVs结合.在相同p H条件下,Vip3Aa10前毒素比Vip3Aa10GT更容易与甜菜夜蛾BBMVs结合.Vip3Aa10GT在甜菜夜蛾BBMVs上有4条结合蛋白,其分子量分别为80、38、31和22k Da.【结论】活化的Vip3Aa10与甜菜夜蛾BBMVs的结合是p H依赖性的,并且能与BBMVs上的4个蛋白结合. 相似文献
3.
《北京农学院学报》2021,(1)
【目的】营养期杀虫蛋白Vip3A是一种由苏云金芽孢杆菌在对数生长期产生的新型杀虫毒素.Vip3A与敏感昆虫中肠上皮细胞的结合是其发挥杀虫活性的关键步骤.为进一步探究Vip3A毒素的杀虫机理,研究Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡(BBMVs)的结合特性.【方法】在大肠杆菌中用IPTG诱导表达Vip3Aa10,用亲和层析和离子交换层析的方法纯化蛋白,并用胰蛋白酶活化Vip3Aa10,得到Vip3Aa10GT.然后分析Vip3Aa10前毒素和Vip3Aa10GT对甜菜夜蛾的杀虫活性,用免疫印迹法和配体印迹法分析Vip3Aa10GT与甜菜夜蛾BBMVs的结合特性以及在甜菜夜蛾BBMVs上的结合蛋白.【结果】Vip3Aa10GT与Vip3Aa10前毒素对甜菜夜蛾的杀虫活性很高.Vip3Aa10GT在p H80时更容易与甜菜夜蛾BBMVs结合,并且能够与非敏感性昆虫黄粉虫BBMVs结合.在相同p H条件下,Vip3Aa10前毒素比Vip3Aa10GT更容易与甜菜夜蛾BBMVs结合.Vip3Aa10GT在甜菜夜蛾BBMVs上有4条结合蛋白,其分子量分别为80、38、31和22k Da.【结论】活化的Vip3Aa10与甜菜夜蛾BBMVs的结合是p H依赖性的,并且能与BBMVs上的4个蛋白结合. 相似文献
4.
甜菜夜蛾多酚氧化酶的特性及其对曲酸等抑制剂的反应 总被引：13，自引：3，他引：13
以甜菜夜蛾5龄幼虫为试材提取多酚氧化酶,经40%饱和度硫酸铵沉淀、SephadexG-100凝胶过滤等步骤部分纯化后,总活力回收率为26.67%,酶活力提高8.56倍。以邻苯二酚为底物,测得该酶反应的最佳条件:pH=6.5,T=40℃,米氏常数Km=10.73mmol·L-1。研究了曲酸、香草酸等5种化合物对该酶活力的影响,结果表明,除芦丁外均对其酶活力产生一定的抑制作用,其中以曲酸抑制力最强,其抑制中浓度I50为36.71g·ml-1。曲酸对该酶活力的抑制动力学研究表明,该化合物是典型的可逆竞争型抑制剂, 相似文献
5.
6.
为探求铜绿微囊藻藻毒素(microcystin)对昆虫产生胃毒影响的机理,选用棉铃虫作为研究对象,在pH=10.4和pH=5.6等不同的酸碱环境条件下,研究了铜绿微囊藻藻毒素粗提物对棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶的水解专性底物活性的抑制影响。结果显示微囊体藻藻毒素粗提物在碱性环境下对棉铃虫幼虫的类胰蛋白酶具有非常稳定的抑制作用,并与铜绿微囊藻毒素的浓度增加表现出显著的相关性。在pH=8.6的弱碱性条件下的抑制效率要高于在pH=10.4的强碱性条件下的抑制效率,证明铜绿微囊藻是一种很有潜力的生物杀虫物质,具备了应用于农业害虫防治的潜力。 相似文献
7.
青鱼胰蛋白酶的分离纯化及部分性质研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]为青鱼的养殖和综合利用提供试验依据。[方法]对青鱼胰蛋白酶进行分离纯化,测定青鱼胰蛋白酶的分子量、热稳定性和酸碱稳定性,探讨pH值、温度、金属离子和EDTA对青鱼胰蛋白酶活力的影响。[结果]经SDS-PAGE和凝胶过滤,测得青鱼胰蛋白酶的分子量分别为44和43.5 kD。青鱼胰蛋白酶具有一定碱性耐受性,在pH值为8～10时活性较高,其最适pH值约为9,最适反应温度为50℃。以酪蛋白为底物,在pH值8.5、37℃时测得该酶Km值为4.6×103 mg/L。Mg2+对该酶有明显促进作用,而Cu2+、Mn2+、Pb2+和EDTA对青鱼胰蛋白酶的抑制作用很大。[结论]EDTA能抑制青鱼胰蛋白酶的作用,说明该酶可能为金属蛋白酶。 相似文献
8.
枯草芽孢杆菌B25能够产生抗菌活性物质,对香蕉枯萎病具较好的抑菌效果.研究了抗菌活性物质产生的时间,以及对温度、pH值和蛋白酶(胰蛋白酶、蛋白酶K)的敏感性;并用10、30、50 ku的超滤管超滤.研究结果表明:抗菌物质是从对数期后期就开始产生的,稳定期活性上升到最大值并一直保持在这个水平;该活性物质对热稳定,可于100℃煮沸1h而不失活;在酸性、中性及微碱性条件下相对稳定,在强碱性条件下不稳定;对蛋白酶K和胰蛋白酶敏感,10、30 ku的超滤管时超滤膜下面的滤过液无活性,50 ku超滤管时超滤膜下面的滤过液才有活性. 相似文献
9.
虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】研究证实虫酰肼是否对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)酚氧化酶活性具有抑制作用。【方法】采用生物化学方法,分别测定虫酰肼对甜菜夜蛾5龄幼虫离体酚氧化酶的作用特点和用虫酰肼浸泡饲料饲喂5龄幼虫后,虫酰肼对幼虫头部、血淋巴及表皮组织酚氧化酶活性的抑制作用。【结果】随着虫酰肼浓度增大,酚氧化酶活力呈逐渐下降趋势,虫酰肼对酚氧化酶的抑制中浓度(IC50)为5.43μmol·L-1。虫酰肼对酚氧化酶的抑制作用表现为混合型抑制,游离酶抑制常数(K i)和酶-底物络合物抑制常数(K is)分别为11.223μmol·L-1和34.036μmol·L-1。通过研究金属铜离子和酶液对虫酰肼吸收峰的影响,推测虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用不是与该酶活性中心的铜离子结合,而可能是与酚氧化酶蛋白结合发生作用有关。用28.41μmol·L-1和85.23μmol·L-1亚致死剂量浓度的虫酰肼分别处理甜菜夜蛾5龄幼虫24、48和72h后,测定其头部、血淋巴和表皮酚氧化酶的活性。结果表明,随着用虫酰肼处理时间延长,两个剂量的虫酰肼对幼虫头部、血淋巴和表皮酚氧化酶的抑制作用基本呈逐渐增大趋势;处理后相同时间,高剂量的虫酰肼对酚氧化酶活性的抑制率基本上高于低剂量的抑制率;虫酰肼对头部酚氧化酶的抑制率最高,血淋巴次之,表皮最低。【结论】虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶具有明显的抑制作用,幼虫新表皮形成过程受到阻碍可能与虫酰肼抑制酚氧化酶的活性有关。 相似文献
10.
使用酶解法制备对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌都有抑制活性的小分子抗菌肽,以解决滥用抗生素饲料添加剂导致的抗药性和药物残留问题。实验通过单因素分析法和正交实验法,以加酶量、酶解时间、料液比和酶解pH 4个因素,优化制备蛴螬抗菌肽的条件。结果表明,胰蛋白酶为最适合用于制备蛴螬抗菌肽的蛋白酶,制备抗菌肽的最佳酶解条件为:加酶量50.00 ku/g,酶解时间90 min,料液比1∶10(g/mL)和酶解pH 7.50。酶解产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用最强,抑菌圈直径分别为11.50、8.70 mm。稳定性实验结果表明,蛴螬抗菌肽的最佳作用pH为6.00,高温环境下具有稳定的抑菌效果,对于不同的实验菌,盐浓度对抗菌肽的抑菌效果影响不同;蛴螬抗菌肽具有较好的胰蛋白酶水解稳定性,但不具有胃蛋白酶水解稳定性。制备得到的蛴螬蛋白酶解产物有抗菌效果,可以在农业、医药、食品、畜牧业等领域发挥重要作用。 相似文献
11.
旨在研究不同抑制剂和激活剂对梨星毛虫Illiberis pruni中肠蛋白酶活性的影响。利用生化技术分别测定梨星毛虫幼虫不同龄期的4种中肠蛋白酶（总蛋白酶、强碱性胰蛋白酶、弱碱性胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶）活性,进而在最适龄期（4龄幼虫）测定蛋白酶激活剂（EDTA,MgCl2,EGTA,CaCl2）和抑制剂（PMSF,TPCK,STI,TLCK,IAA,DTT）对梨星毛虫中肠蛋白酶活性的影响。结果表明：梨星毛虫幼虫中肠总蛋白酶、强碱性胰蛋白酶、弱碱性胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶均在4龄具有最高酶活性。所有试剂均对总蛋白酶有激活作用;5 mmol/L CaCl2对强碱性胰蛋白酶抑制作用最高;对弱碱性胰蛋白酶有抑制作用的仅有5 mmol/L DTT;对胰凝乳蛋白酶抑制效果最佳的为10 mmol/L EGTA。所筛选的对梨星毛虫主要中肠蛋白酶具有抑制作用的抑制剂,对以昆虫中肠蛋白酶为靶标的绿色害虫防控技术的开发具有参考价值。 相似文献
12.
海洋氧化短杆菌15E碱性蛋白酶的酶学性质 总被引：1，自引：1，他引：0
对氧化短杆菌15E菌株(Brevibacterium oxydans)所产的碱性蛋白酶酶学性质研究表明,15E菌株所分泌的碱性蛋白酶分子质量为49.0 ku、等电点为9.3.该酶的最适作用温度为60℃,最适pH值为7.0-9.0;Ca2+、Mg2+、K+对酶有激活作用.酶对一些变性剂如SDS、尿素、盐酸胍具有一定的耐受性;PMSF和AEBSF能抑制该蛋白酶,表明该酶属于丝氨酸蛋白酶;EDTA对该蛋白酶有抑制作用,说明该蛋白可能含有金属离子. 相似文献
13.
14.
通过热处理、硫酸铵盐析、膜超滤及SP-Sepharose离子交换层析,从章鱼内脏中纯化得到一种胰蛋白酶抑制剂（Octopus Trypsin Inhibitor,OTI）.Tricine-SDS-PAGE电泳结果显示,OTI的分子质量约为6500 u.性质分析结果表明：OTI在pH=1.0～11.0缓冲液中孵育30 min,抑制活性稳定;在100℃下加热1 h、2 h后仍分别具有90%和65%的抑制活性,具有良好的pH值稳定性和热稳定性;OTI能够显著抑制胰蛋白酶的活性,对胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶几乎无抑制活性;OTI能够有效抑制蓝圆鲹肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶（MBSP）引起的肌球蛋白降解. 相似文献
15.
鲶鱼骨酶解物的降血压肽活性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以鲶鱼骨蛋白为原料制备ACE抑制肽,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶进行酶解,通过体外检测法测定其抑制率,优选出最佳用酶。通过单因素试验和正交试验,确定了碱性蛋白酶酶用量、pH、酶解温度、酶解时间、底物浓度等因素对ACE活性抑制效果的影响。结果表明:利用碱性蛋白酶水解鲶鱼骨,酶用量为500U/g、pH值8.5、温度为60℃、底物浓度为0.33kg/L、时间6h时酶解液对ACE的抑制活性最强,抑制率为88.36%。通过比较,最佳酶解条件下得到的降血压肽的ACE抑制率要高于降血压药尼莫地平和硝苯地平的ACE抑制率。 相似文献
16.
本文研究了亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种晶体蛋白对大蜡螟幼虫肠道消化酶（蛋白酶、胰蛋白酶、淀粉酶）活性的影响。结果表明，经晶体蛋白处理后大蜡螟幼虫肠道蛋白酶和胰蛋白酶比活力均下降。电泳分析表明，演粉酶两种同功酶的活力均增强，蛋白酶各同功酶活力均下降。 相似文献
17.
菠萝蛋白酶部分酶学性质的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
通过菠萝蛋白酶的最佳吸收峰、酶的浓度及大小,红外光谱分析和酶活性的测定,研究菠萝蛋白酶的部分性质。结果表明,菠萝蛋白酶具有热稳定性,其大小约为28.8 kD ,且最适温度为60℃,最适p H为7.5。Fe^2＋对菠萝蛋白酶有激活作用,Z n^2＋、C u^2＋低浓度有促进作用,高浓度有抑制作用,NaCl对菠萝蛋白酶能起到一定的保护作用、KCl对酶反应影响不大,MgSO4·7H2O和无水CaCl2对菠萝蛋白酶活性均有一定程度的抑制作用。菠萝蛋白酶经pH2.5胃蛋白酶和 pH3.2胃蛋白酶作用后,随处理时间的延长,其酶活力都呈下降的趋势。其中,pH2.5条件下的胃蛋白酶对菠萝蛋白酶活力的影响较大。表明在模拟猪胃条件下pH2.5胃蛋白酶对菠萝蛋白酶影响较大。 相似文献
18.
家蚕肠液蛋白酶对家蚕消化吸收蛋白质及其生长发育有着十分重要的作用。为探明影响家蚕肠道蛋白酶活力的因素,从家蚕肠道内容物中分离出蛋白酶酶液,在不同温度、pH及金属离子处理条件下,用福林-酚法测定酶活力变化情况,确定家蚕肠液蛋白酶的最适作用条件,同时研究了家蚕中肠蛋白酶活力随龄期增长的变化规律。结果表明,在35℃、pH10.0左右条件下蛋白酶活力最大,低浓度Mn2+、Fe2+、Cu2+对酶活有抑制作用,高浓度Ca2+对酶有抑制作用,Mg2+浓度对酶活物影响不明显,家蚕中肠蛋白酶活力随龄期增长而增强。 相似文献
19.
通过离子交换层析和凝胶过滤层析,从黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus)血清中得到其白蛋白,命名为Bu-fom-SA。该蛋白有抑制胰蛋白酶水解小肽底物活性的作用,但对其他丝氨酸蛋白酶如凝血酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶无抑制。Bufom-SA对温度、pH及还原剂二硫苏糖醇的耐受性较强,3种因素对其胰蛋白酶抑制活性影响不大。黑眶蟾蜍血清白蛋白具有稳定的胰蛋白酶抑制活性,可能在黑眶蟾蜍防御天敌捕食的过程中发挥重要作用。 相似文献
20.
日本鳗鲡肠道蛋白酶的分离纯化及其酶学性质研究 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】从日本鳗鲡(Anguilla japonica)肠道中分离纯化蛋白酶并分析其酶学性质,为日本鳗鲡饲料的科学研制提供理论依据。【方法】通过硫酸铵沉淀分级分离及Sephadex G-100和Sephadex G-75两级凝胶柱层析纯化日本鳗鲡肠道蛋白酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-PAGE鉴定蛋白酶纯度和亚基分子质量,利用凝胶层析法测定酶的分子质量,用等电聚焦电泳法测定酶的等电点,并研究以酪蛋白为底物时蛋白酶催化反应的动力学参数及pH、温度、金属离子和修饰剂对蛋白酶活力的影响。【结果】日本鳗鲡肠道蛋白酶亚基分子质量为65.3ku,酶分子质量为260.3ku,等电点为8.23;该蛋白酶的最适pH为8.2,最适温度为55℃,米氏常数(Km)为4.832mg/mL,最大反应速度(Vmax)为0.269U/min。日本鳗鲡肠道蛋白酶在pH为6.6~9.0时表现稳定,在20~55℃时具有较好的热稳定性,在60℃以上稳定性迅速下降。Mg2+、Ca2+、Co2+、Ba2+、Mn2+、Cu2+、Zn2+和Hg2+对日本鳗鲡肠道蛋白酶的活力表现出不同程度的抑制作用,其中以Hg2+的抑制作用最强,1 mmol/L Hg2+可使酶活力丧失87.63%;而Fe2+有激活作用,5mmol/L Fe2+可使酶活力提高134.53%。修饰剂EDTA、对氯汞苯甲酸(pCMB)和Cys对酶活力没有影响,苯甲酰基磺酰氟(PMSF)和二硫苏糖醇(DTT)对酶活力则有不同程度的抑制作用。【结论】日本鳗鲡肠道蛋白酶由4条相同肽链组成,属于丝氨酸蛋白酶类,二硫键是维持其活性所必需的,酶活力易受环境中酸碱度、温度和金属离子调控。 相似文献