毁灭炭疽菌RAPD和ISSR-PCR最佳反应体系的建立   总被引：2，自引：0，他引：2  

邢红梅  丁平  王克荣  周晓云 《广东农业科学》2009,(5):94-98

对影响PCR反应的主要因子-Md2+、dNTP、Taq酶、引物浓度进行优化,建立起适合于毁灭炭疽菌基因组DNA的RAPD和ISSR反应体系.RAPD反应体系(25μL):Mg2+浓度为2.5 mmol/L,dNTP浓度为200 μmol/L,Taq酶用量为1U,引物浓度1μmol/L.ISSR反应体系(25μL)为:Mg2+浓度为2 mmol/L,dNTP浓度为150μmol/L,Taq酶用量为0.5 U,引物浓度为1.25 μmol/L.  相似文献   

正交设计优化广藿香基因组SRAP扩增体系的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴友根  郭巧生  何际婵  林尤奋 《江苏农业科学》2010,(4)

以改良CTAB法提取的广藿香叶片DNA为模板,采用正交试验设计,从Mg2+、dNTP、引物浓度和DNA聚合酶4因素3水平,对SRAP扩增效果进行研究,比较不同模板DNA浓度对PCR扩增的影响,确立适合广藿香SRAP-PCR反应的最佳体系.利用SRAP-PCR优化体系对引物进行了全面筛选.结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响,总体积20μL的SRAP-PCR优化反应体系中含有:2 μL 10×buffer、20 ng模板DNA、1.5 mmol/L Mg2+、250 μmol/L dNTP、0.3 μmol/L Primer、Taq DNA聚合酶1.5 U.运用该体系对部分广藿香单株进行检验,证明该体系稳定可靠;以此体系为基础从90对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物18对.  相似文献   

药用植物白术ISSR-PCR反应体系的正交优化研究     

马辉  张智俊  罗淑萍  何福基 《新疆农业科学》2009,46(1):40

采用正交试验设计的方法,对白术ISSR-PCR反应体系进行优化,确立了适合于白术的ISSR-PCR反应的最佳体系,即在25 μL反应体系中,10×buffer 2.5 μL,Mg2+3 mmol/L,Taq酶0.75U,模板200 ng,dNTP 0.3 mmol/L,引物0.5 μmol/L,通过梯度PCR试验得到相应引物的最佳退火温度为55.0℃.  相似文献   

薄壳山核桃ISSR-PCR反应体系的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

王涛  贾晓东  李永荣  宣继萍  徐菲  刘永芝  郭忠仁 《江苏农业科学》2011,39(5)

采用正交试验设计,对薄壳山核桃ISSR - PCR反应体系的主要影响因子(TaqDNA聚合酶、dNTP、引物、Mg2+和模板DNA)进行了优化,并得到了适合薄壳山核桃的ISSR - PCR扩增体系.结果表明,在20μL的ISSR - PCR反应体系中,1.0U的Taq酶、0.4 mmol/L的dNTP、0.2 μmol/L的引物、2.0 mmol/L的Mg2+和40ηg的模板DNA为适合薄壳山核桃的最佳反应条件.  相似文献   

贯叶连翘ISSR-PCR反应体系的建立与条件优化     

冯俊姣  何苗  联想 《安徽农业科学》2012,(36):17525-17527

[目的]建立贯叶连翘的ISSR-PCR反应体系,并对其条件进行优化.[方法]以贯叶连翘基因组DNA为模板,用L16(45)正交试验设计系统分析引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度、Mg2浓度、dNTP浓度和模板DNA浓度5种因素对贯叶连翘ISSR-PCR反应扩增结果的影响.[结果]正交试验设计的方法可以用于贯叶连翘1SSR-PCR反应体系的建立,经过优化得到贯叶连翘ISSR-PCR反应体系的最佳条件为:20μISSR-PCR反应体系中含10×PCR buffer,Mg2+浓度1.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度50 U/ml,DNA浓度20 ng/μl,dNTP浓度250 μmol/L,引物浓度0.75 μmol/L.[结论]试验建立的贯叶连翘的ISSR-PCR反应体系重复性好、分辨率高,结果稳定可靠.  相似文献   

槭属树种ISSR-PCR反应体系的确立   总被引：1，自引：0，他引：1  

张冬梅  魏华丽  苏金乐  钱又宇 《上海农业学报》2008,24(1):51-54

采用改良CTAB法提取槭属树种总DNA,分析了Taq聚合酶、样本浓度、Mg2 浓度、dNTP浓度以及引物浓度对ISSR-PCR扩增结果的影响,用四因素三水平正交法确定了Taq酶浓度、引物浓度、Mg2 浓度、dNTP浓度的最佳组合,并优化模板浓度,建立了稳定、可重复的槭属树种ISSR-PCR最佳反应体系及PCR扩增参数.ISSR-PCR的最佳反应体系为:在10 μL的反应体系内,Taq聚合酶宜加入0.25 U,dNTP最适浓度为0.3mmol/L,模板最适浓度为4 ng/μL,引物最适浓度均为0.5 μmol/L,不同的引物有其各自合适的Mg2 浓度.槭属树种ISSR-PCR引物筛选及反应体系的建立,为利用ISSR标记技术开展槭属树种的系统进化和亲缘关系研究提供一个强有力的工具.  相似文献   

茶树ISSR-PCR反应体系的正交优化   总被引：2，自引：0，他引：2  

宁静  黄建安  李娟  钟兴刚  朱旗 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2010,36(4):414-417

对茶树ISSR-PCR反应体系中的5因素(Taq酶浓度(U/(20μL))、Mg2+浓度(mmol/L)、模板DNA质量浓度(ng/(20μL))、dNTP浓度(mmol/L)、引物浓度(μmol/L))在4水平上进行正交优化试验,筛选出各因素的最佳水平,建立茶树最佳ISSR-PCR反应体系,即20μL反应体系中,TaqDNA聚合酶为1.0U/(20μL),Mg2+为2.0mmol/L,模板为40ng/(20μL),dNTP为0.20mmol/L,引物为0.25μmol/L.对茶树ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火试验,确定引物ISSR1、UBC881的最适退火温度分别为52.4、59.0℃.  相似文献   

菊属ISSR反应体系的建立及优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

缪恒彬  陈发棣  房伟民 《江苏农业科学》2007,199(5):94-97

以菊属野生种和不同类型菊花品种为试验材料,通过正交试验对菊属ISSR-PCR反应体系进行初选,在此基础上对体系中的dNTP、引物、Mg2 、TaqDNA聚合酶、模板DNA等最佳浓度进行了筛选,通过稳定性检测,优化了菊花ISSR-PCR反应体系:总体积20μl,DNA模板量60 ng;引物浓度0.5μmol/L;dNTP浓度100μmol/L;Mg2 浓度1.875 mmol/L;Taq聚合酶1 U。  相似文献   

不结球白菜SRAP体系优化与品种聚类分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

单晓政  侯喜林  李英  吴海涛  王枫  李梅 《江苏农业学报》2009,25(3)

通过单因素试验确定了Mg2+、dNTP、TaqDNA 聚合酶和引物4种因素在不结球白菜SRAP反应体系中的适宜浓度范围,并在此基础上利用正交试验设计对不结球白菜SRAP反应体系进行优化,确立了适合不结球白菜的SRAP反应体系,即25μl反应体系中,含Mg2+ 2 mmol/L、dNTP 0.2 mmol/L、TaqDNA 聚合酶1.5 U、引物 0.36 μmol/L、1×PCR Buffer、模板DNA 30 ng.运用优化的体系,利用30个引物组合对17个不结球白菜品种进行遗传多样性的SRAP标记分析,20个多态性的引物组合共检测到90个多态性位点.应用聚类分析(UPGMA)结果显示,园艺性状相似的品种在较近的遗传距离聚类,表明SRAP可有效用于不结球白菜品种资源鉴定与聚类分析.  相似文献   

葛属植物ISSR-PCR扩增条件的正交优化   总被引：2，自引：0，他引：2  

陈元生  彭建宗 《广东农业科学》2010,37(1):120-123

利用正交试验设计法L9(34),从引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度和dNTP浓度4种因素3个水平,对葛资源ISSR-PCR反应体系进行优化分析,并在此基础上对PCR反应的退火温度进行梯度筛选。结果表明,25μL最佳的葛资源ISSR-PCR反应体系是:1×PCR buffer、0.20 mmol/L dNTP、0.4μmol/L引物、2.5 mmol/L Mg2+和0.5 U TaqDNA聚合酶,引物UBC809的最佳退火温度为57.9℃。  相似文献