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1.
辣椒离体植株再生及其变异的SSR检测 总被引：1，自引：0，他引：1
采用6个不同基因型辣椒（Capsicum annuum L.）的子叶、下胚轴、去除生长点并带下胚轴和各切去一半的两片子叶、去除生长点并带下胚轴和半片子叶为外植体，分别培养在附加不同激素和 AgNO3 的MB5和MS培养基上，研究不同基因型、外植体、激素配比和AgNO3等对外植体不定芽诱导和芽伸长的影响。结果表明，不定芽诱导以MB5+2.0 mg·L-1 TDZ+1.0 mg·L-1 IAA+4 mg·L-1 AgNO3培养基最佳，诱导率最高可达100 %。而芽伸长的最佳培养基为MB5+3.0 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 IAA+5.0 mg·L-1 AgNO3+2.0 mg·L-1 GA3，最高伸长率可达87.5 %。生根培养基为MS+0.2 mg·L-1 IAA+0.1 mg·L-1 NAA，生根率均达100 %。不同的外植体类型具有不同的不定芽诱导和芽伸长的能力，以去除生长点并带下胚轴和各切除一半的两片子叶作外植体时的诱导效果最好。用50对SSR引物检测再生植株，其中86株伏地尖的再生植株和对照植株间均没有扩增出差异条带，而茄门再生植株的SSR检测结果有12对引物表现多样性。 相似文献
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培育苹果转基因植株的研究 总被引：15，自引：2，他引：13
采用“皇家嘎拉”苹果白化面外植体，通过根癌农杆菌ＥＨＡ１０５介导，证明了培养基中存在生长素可促进基因转化，转化效率比对照提高２倍以上。将外植体下ＥＨＡ１０１株系在含有生长素的２基中共培养，获得了转基因植株。采用ＰＣＲ分析和ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ核酸杂交，确定ＧＵＳ基因已整合到苹果植株的染色体上。组织化学染色确定了ＧＵＳ基因在杆株体内的表达。 相似文献
3.
【目的】将苹果Md DRB1基因转入番茄中,探究苹果MdDRB1基因在番茄中的异位表达与功能。【方法】采用农杆菌介导法,将苹果基因Md DRB1转入番茄植物体内,用PCR检测到该基因已整合到番茄总DNA中。对获得的5个转基因番茄株系进行半定量RT-PCR分析,挑选MdDRB1基因表达水平由低到高的3个株系,用实时荧光定量PCR检测与生长素有关的mi RNAs及相应靶基因的相对表达量。并对非转基因和转基因番茄进行3μmol·L-1IAA和5μmol·L-1IAA处理,对植株进行向光性检测。【结果】转基因株系中miR164、miR160、mi R393表达量下调,mi R167表达量上调,同时,它们分别对应的番茄中的靶基因SlNAC1、SlARF10和SlARF16、SlTIR1的相对表达量上调,SlARF8相对表达量下调。IAA处理后,转基因株系幼苗的侧根数目比未转基因植株增多,同时,转基因株系幼苗的向光性也增强。【结论】苹果Md DRB1基因在番茄中的异位表达,通过抑制生长素响应相关的mi R164、miR160、miR393和增加miR167的积累水平,部分解除其对下游靶基因SlNAC1、SlARF10和Sl ARF16、SlTIR1以及增加Sl ARF8的转录后基因沉默作用,进而提高了转基因番茄对生长素响应的敏感性。 相似文献
4.
建立了以紫红线茄下胚轴为外植体的高效转基因体系。利用该方法,以获得茄子SmARF8基因RNA干涉转基因植株为目的,构建了以NPTⅡ基因为筛选标记的融合表达载体pCAMBIAI 35S-2300-SmARF8-INT,并通过农杆菌介导,侵染茄子下胚轴外植体。含有2 mg · L-1吲哚乙酸,0.5 mg · L-1玉米素,25 mg · L-1卡那霉素和500 mg · L-1头孢氨苄的MS选择培养基可直接诱导外植体产生转基因分化苗,再生率达到80%。转基因苗继续生长并在不含激素的MS培养基上产生健壮根系,最终获得转基因株系。RT-PCR和qRT-PCR分析验证了T0代转基因株系中内源基因SmARF8被干涉后不表达或表达量降低,Southern blot分析显示选择的T0代转基因株系中存在1个T-DNA插入拷贝。以上研究结果表明利用建立的转基因体系SmARF8基因在茄子中被成功敲除。 相似文献
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提高苹果基因转化效率的研究 总被引：6，自引：1，他引：5
采用根瘤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）强株系ＥＨＡ１０５（ｐ３５ｓＧＵＳ－ｉｎｔｒｏｎ）研究了影响‘皇家嘎拉’苹果（Ｍａｉｎｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｂｏｒｋｈ．）外植体的β-葡萄糖醛酸酶（ＧＵＳ）基因的瞬时、稳定表达水平和转基因植株的再生。证明在培养基生长素（ＩＢＡ、ＮＡＡ）存在的条件下，外植体的ＧＵＳ基因的瞬时表达水平提高了３－４倍，而共培养两周后稳定表达水平提高２倍以上，产生９．８个ＧＵＳ愈伤组织表达区域。白化处理促进外植体的基因转化，白化处理的新梢顶端第一节间外植体ＧＵＳ表达区域比常用的叶片外植体高４倍。在生长素存在的条件下 ２％外植体获得了转基因植株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ＢｌｏｔＤＮＡ杂交和组织化学染色分析证明ＧＵＳ基因已整合到苹果的染色体上，并得以表达。 相似文献
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四倍体西瓜子叶植株再生试验 总被引：2，自引：0，他引：2
四倍体品种西瓜含糖量高、抗逆性强,可直接作为商品瓜,同时以西瓜四倍体品种作母本与二倍体品种杂交,可以选育无籽西瓜新品种。现有的四倍体材料许多都具有亲缘关系,由于优良亲本材料重复使用,使遗传基础变得狭窄,导致西瓜多倍体抗病育种越来越难。采用组织培养技术将抗逆基因导入四倍体品种,是获得四倍体新种质的一条捷径,国内外已着手西瓜植株再生及转基因方面工作,关于西瓜四倍体品种子叶植株再生少见报道。本文通过研究2个四倍体品系不定芽的植株再生,建立了四倍体西瓜品种子叶外植体再生完整植株的技术体系,以期为日后开展转基因技术研… 相似文献
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秋水仙素处理离体叶片获得皇家嘎拉苹果四倍体植株 总被引：6，自引：0，他引：6
采用皇家嘎拉苹果（Malus domestica Borkh.)离体新梢叶片作为外植体，研究了不同浓度的秋水仙素长时间处理（5d)诱导四倍本的效率。结果表明，以不定芽再生培养基附加25mg/L秋水仙素效果最好，最高在36．7％的叶片外植体上获得了四倍体植株。高浓度（75－200mg/L)秋水仙素处理严重抑制组织的再生。采用流式细胞技术测定出诱变植株的细胞核DNA含量比对照高出一倍，确定了植株为四倍体。四倍体植株不仅在遗传上而且在外观形态上也明显区别于二倍体。四倍体植株已移栽于大田，并进行了嫁接育苗和大树高接。 相似文献
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新疆野生樱桃李S-RNase基因分离与鉴定的初步研究 总被引：2，自引：1，他引：1
从4对已报道的李属树种S-RNase基因引物组合中筛选出扩增效果较好的PruC2和PruC4R组合，首次对新疆野生樱桃李（Prunus cerasifera Ehrh.）的45个株系的基因组DNA进行S-RNase基因特异性PCR扩增，并对其PCR产物进行克隆测序。这些核酸序列及其相应的氨基酸序列在GenBank中进行比对, 皆与李属的S-RNase基因有最大同源性，为新疆野生樱桃李的4种S-RNase基因，分别命名为S1 （511 bp），S2 （787 bp），S3 （1859 bp）和S4 （464 bp），在GenBank的登录号分别为EF638726、EF641276、EF661873和EF661874。45个株系中，43个株系的S基因型分别为S1S2、S1S3、S2S3、S2S4和S3S4，而10号和15号株系分别只鉴定了一种S-RNase基因，其S基因型组成有待于进一步研究。 相似文献
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秋水仙素处理离体叶片获得皇家嘎拉苹果四倍体植株 总被引：30，自引：5，他引：25
采用皇家嘎拉苹果（Malus domestica Borkh．）离体新梢叶片作为外植体，研究了不同浓度的秋水仙素长时间处理（5 d）诱导四倍体的效率。结果表明，以不定芽再生培养基附加25 mg／L秋水仙素效果最好，最高在36．7％的叶片外植体上获得了四倍体植株。高浓度（75～200 mg／L）秋水仙素处理严重抑制组织的再生。采用流式细胞技术测定出诱变植株的细胞核DNA含量比对照高出一倍，确定了植株为四倍体。四倍体植株不仅在遗传上而且在外观形态上也明显区别于二倍体。四倍体植株已移栽于大田，并进行了嫁接育苗和大树高接。 相似文献
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转基因植物的花粉特性研究是进行遗传改良和转基因生态风险评价的一项基础工作。对7~8年生转Cp TI基因‘嘎拉’苹果花粉特性进行了研究,结果表明:转基因苹果花粉在大小、形态和表面纹饰等方面与对照花粉没有明显差别;转基因苹果花粉中畸形花粉多;供试的13个株系中12个株系的花药中花粉量显著低于对照,6个株系的花粉离体萌发率显著降低;测定了3个转基因株系的花粉生活力,其中2个株系显著低于对照。转基因‘嘎拉’苹果花粉人工授粉至普通‘富士’苹果柱头上能正常萌发,但中后期花粉管伸长较慢,花粉管到达胚珠的时间比对照延后约8 h。花器不同发育阶段内源激素测定表明,转基因株系各时期GA3含量均低于对照,而ABA含量在花蕾期低于对照,在气球期和平展期高于对照。对花药和花粉发育过程显微观察发现,转基因株系花药的结构及其发育正常,而花粉囊壁绒毡层的延迟分解影响了花粉发育可能是其花粉数量少、育性低的原因。 相似文献
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为提高苹果抗病性,利用根癌农杆菌介导的叶片转化法,将带有NPTⅡ筛选基因、GUS标记基因及β–1,3葡聚糖酶目的基因质粒导入‘富士’和‘嘎拉’苹果。具有卡那霉素(Kan)抗性的转化株系,经GUS组织化学染色及PCR扩增检测,得到17个‘嘎拉’阳性株系和11个‘富士’阳性株系。选取‘嘎拉’和‘富士’各3个阳性株系进行Southern blot检测,结果表明外源目的基因已整合到所试转化株系中。选取‘嘎拉’及‘富士’各5个阳性株系进行半定量RT-PCR检测,除1个‘富士’株系没有条带外,其余株系均有阳性条带,且各条带的明亮清晰程度有差别,说明不同转基因株系中目的基因的表达量有差异。转化植株离体叶片接种苹果斑点落叶病菌进行抗病性表型检测结果证实,‘嘎拉’10个转化株系中8个株系表现抗病,7个‘富士’转化株系中2个株系表现一定的抗病性,抗病性的增强与目的基因的表达水平有关。 相似文献
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利用同源克隆法得到抗白粉病的中国野生毛葡萄‘丹凤–2’芪合酶基因VqSTS11和VqSTS23的开放阅读框，并构建过表达载体；通过器官发生途径诱导不抗白粉病的欧洲葡萄‘无核白’分生愈伤组织并采用农杆菌介导法对其进行转化；经过PCR检测和Western blot鉴定，获得了5株VqSTS11超量表达植株和3株VqSTS23超量表达植株；人工接种白粉菌发现，转基因植株中白粉菌菌丝生长速度慢，孢子萌发受到一定的抑制，并且转基因植株中芪合酶基因相对表达量升高，抗病相关基因表达上调，芪类物质含量积累增多。本研究结果进一步证明中国野生毛葡萄‘丹凤–2’芪合酶基因VqSTS11和VqSTS23对白粉菌具有抗性，‘丹凤–2’可以为改良欧洲葡萄品种抗病性提供抗病基因，作为抗病育种的资源。 相似文献
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Tetraploid muskmelon plants were induced successfully from diploid Cucumis melo inbred M01-3 (2n = 24) by colchicine. The morphological characteristics and fruit qualities of diploid and tetraploid muskmelons were investigated. The results showed that the leaves and flowers of the tetraploid plants were markedly larger, the plants were obviously higher, and the stems were thicker than those of the diploid plants. Transmission electron microscope observation revealed that the numbers of chloroplast, granule and grana, and the length of chloroplast and granule of the tetraploid plant leaves were significantly more or longer than those of the diploid plants. The soluble solid, soluble sugar and vitamin C contents in the tetraploid fruit were distinctly higher than those in the diploid fruit. The weight of the tetraploid fruit was 30% heavier than that of the diploid fruit. And the seeds from the tetraploid plants were broader and thicker than those from the diploid plants. Together, our results suggest that the tetraploid muskmelon exhibited better agronomical characteristics than the diploid muskmelon and the tetraploid muskmelon could be used as the improved variety and a potential germplasm for the development of triploid fruit. 相似文献
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C. Hättasch H. Flachowsky 《The Journal of Horticultural Science and Biotechnology》2013,88(6):188-194
SummaryThe conventional selection system for apple transformation is based on the selectable marker gene, nptII, encoding antibiotic resistance against kanamycin. We tested an alternative selection system based on the use of D-amino acids using the gene, D-amino acid oxidase 1 (dao1) as the selectable marker, in order to avoid the presence of antibiotic resistance genes in the resulting transgenic apple plants. In addition, dao1 allowed the selection as well as the elimination of dao1-transgenic plants, based on differences in the toxicity of different D-amino acids. Regeneration experiments using apple leaf explants revealed that 2 mM D-serine or D-alanine inhibited shoot regeneration. We performed transformation experiments using the apple cultivars ‘Gala’, ‘Holsteiner Cox’, and a progeny of the apple cultivar ‘Pinova’, and the vector p35S::dao1-intron, containing the dao1 and nptII selectable marker genes. Several shoots regenerated successfully on selection media containing various concentrations of D-serine or D-alanine, but transgenic shoots were not obtained. However, three dao1/nptII transgenic apple lines were obtained after selection with kanamycin, indicating that the vector was functional. Furthermore, we showed that 20 mM D-serine could be used to select dao1-transgenic shoots from non-transgenic in vitro shoots, whereas 13 mM D-isoleucine had the opposite effect. 相似文献
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以‘青香蕉’苹果(Malus×domestica‘White Winter Pearmain’)α–法尼烯合酶基因(MdAFS)为目标基因,构建叶绿体定位的植物过表达载体,并通过农杆菌介导遗传转化拟南芥,获得使MdAFS在叶绿体中过表达的拟南芥转基因株系。将pBI122-rbcS1-pla-MdAFS-GFP表达载体瞬时表达本氏烟,分析表明叶绿体定位肽能成功将MdAFS蛋白定位到叶绿体中。定量测定莲座期和盛花期拟南芥光合色素,结果显示,转基因拟南芥叶绿素和类胡萝卜素含量较野生型显著增加。qRT-PCR分析萜类代谢相关基因转录表达水平表明,尤其在盛花期,过表达MdAFS能显著影响萜类代谢基因表达上调。应用静态顶空固相微萃取法收集拟南芥挥发物并结合GC–MS分析鉴定萜类挥发物成分,转基因拟南芥中萜类挥发物含量和种类明显增加。这些结果表明,过表达MdAFS能显著影响萜类代谢流的重新定向,增加萜类代谢挥发物。叶绿体是萜类代谢工程一个理想的亚细胞空间。 相似文献
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将来自黑曲霉的葡萄糖氧化酶( glucose oxidase, GO ) 基因与病原诱导启动子Prp1-1融合,构建了植物表达载体pCPGO, 该载体具有抗除草剂PPT选择标记。经农杆菌介导转入番茄自交系, 获得了阳性转基因植株58株, Southern杂交结果表明, GO基因已整合到番茄基因组中。通过淀粉- KI显色反应和定量检测, 表明GO基因已经表达。转基因植株花器及开花正常, 种子一旦萌发, 其生长、发育各时期均正常。但结实率有所减少, 种子萌发率有所降低。用番茄叶霉病( Fulvia fulva) 病原菌1.2.3.4生理小种侵染T1 代转基因植株, 结果显示转基因番茄植株的抗病性有不同程度的提高, 多数发病时间推迟, 病情明显减轻。经测定与抗病性相关的几个指标, 结果转基因番茄叶片中SOD、POD、CAT的活性和蛋白质含量均增高。 相似文献
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苹果MdFT基因对番茄的遗传转化 总被引：3，自引：0，他引：3
通过RT2PCR扩增, 从苹果叶片cDNA中克隆了FT基因的同源基因MdFT, 构建了花椰菜病毒35S启动子驱动的MdFT植物表达载体35S: : MdFT, 并利用根癌农杆菌介导法将其导入番茄栽培品种‘中蔬四号’; 同时转化拟南芥A tFT基因作为阳性对照。从添加卡那霉素的筛选培养基上再生了抗性植株,PCR扩增证明, 外源基因MdFT和AtFT已经整合到转基因番茄的基因组, 半定量RT-PCR则证明它们已经在转基因番茄中得到异位过量表达。形态鉴定发现, 转基因番茄植株比非转基因对照植株开花早, 表明成功地从苹果中克隆了成花素基因MdFT, 该基因具有通过转基因缩短苹果树童期的潜在价值。 相似文献