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水稻叶片cDNA-AFLP技术体系的建立和优化 总被引：1，自引：0，他引：1
以高温和常温处理的水稻幼苗叶片为材料,对影响cDNA-AFLP分析体系的关键因素进行了分析,建立了适宜水稻的cDNA-AFLP分析体系,并得到了清晰可辨的cDNA-AFLP指纹图谱。结果表明:离心柱式试剂盒提取的RNA较完整,纯度较高;双链逆转录试剂盒形成的cDNA经EcoRⅠ(37℃,2 h)和MseⅠ(65℃,2 h)完全酶切后,4℃连接过夜;20μL的体系中,连接产物稀释10倍液5.0μL作为预扩增的模板,并且预扩增反应的循环数为35,预扩增产物稀释20倍作为选择性扩增的模板,扩增结果较佳;6%PAGE分离快速银染法显示,64对选择性扩增引物中筛选出多态生条带丰富的AFLP引物50对。本研究为利用cDNA-AFLP分析水稻抗高温基因进行深入的研究奠定了基础。 相似文献
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本研究以高感、高抗大白菜小黑点病的大白菜叶柄为试材,对影响cDNA-AFLP分析体系的几个关键因素进行分析,建立了适宜大白菜的cDNA-AFLP分析体系,并得到了较为清晰可辨的cDNA-AFLP图谱。结果表明:试剂盒法提取的NA较完整,纯度较高;400ng的cDNA利用FastDigest EcoRⅠ和Fast-Digest MseⅠ进行快速双酶切50min,酶切充分;在20μL的体系中,连接产物取原液作为预扩增反应的模板,并且预扩增反应的循环数为35,预扩增产物稀释20倍作为选择性扩增的模板,扩增结果最佳;MBI2×PC Master Mixture反应体系满足扩增反应的需要,不需要另外摸索反应条件,节省了试验成本;选用64对AFLP引物进行扩增,筛选出具有多态性条带丰富的AFLP引物45对。本研究为利用cDNA-AFLP分析大白菜小黑点病的的发病机理奠定了基础。 相似文献
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油茶cDNA-AFLP技术反应体系建立的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以小果油茶和普通油茶的嫩叶及种仁为材料,对影响其cDNA-AFLP反应体系的关键因子进行优化分析,筛选出适合油茶的cDNA-AFLP反应体系。结果表明：分别用EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒和Trizol法能成功获得高质量的油茶嫩叶和种仁总RNA;从总RNA中分离的mRNA经合成双链cDNA后,用限制性内切酶EcoRⅠ和MseⅠ在37℃下5 h内酶切完全,经5 U T4连接酶16℃连接的产物稀释10倍后可直接用于预扩增;在20μL选择性扩增体系中,以预扩增产物稀释30倍为模版、dNTP (10 mmol/L)1.5μL、引物(10μmol/L)1.0μL、Taq酶用量1.25 U时的扩增效果较好。利用优化体系成功筛选出61对可以获得带型丰富且重复性好的引物组合。差异片段回收及PCR检测的结果表明,优化后的cDNA-AFLP分析体系适用于油茶相关差异基因的表达研究。 相似文献
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辣椒cDNA-AFLP体系的优化与应用 总被引：1，自引：0，他引：1
以辣椒花蕾和嫩叶为试验材料,对影响辣椒cDNA-AFLP体系的关键因素进行了探讨,建立了适宜于辣椒基因差异表达的cDNA-AFLP体系。结果表明,Trizol法适用于辣椒花蕾和嫩叶总RNA提取;SMART法合成双链cDNA效率较高;利用Taq I/Ase I分步酶切cDNA各3h可酶切完全;连接产物最佳稀释倍数为15倍;预扩产物稀释15倍经选择性扩增,PAGE电泳可以获得带型丰富且重复性好的结果。辣椒cDNA-AFLP反应体系的建立为辣椒基因的差异表达分析奠定了基础。 相似文献
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选用新疆甜瓜伽师和皇后为试材,研究了影响cDNA-AFLP反应体系的几个关键因素,建立了适合于甜瓜的cDNAAFLP反应体系.结果表明:适用于甜瓜cDNA-AFLP分析的RNA可以用Trizol试剂提取的总RNA,双链cDNA合成应用置换法,双链酶切用Vsp Ⅰ、Taq Ⅰ和EcoR 、Mse Ⅰ,效果均能达到目标.相比较而言,Vsp Ⅰ、Taq Ⅰ酶切组合更为理想.酶切cDNA用量、连接产物、预扩增产物稀释倍数参照常规AFLP技术中的常用即可满足要求.检测采用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显色,操作较文献介绍的变性胶方法简单、方便.实验得到了较为理想的甜瓜mRNA指纹图谱,建立的反应体系可以应用于甜瓜差异基因表达分析等方面的研究. 相似文献
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小麦cDNA-AFLP技术体系建立的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究以小麦栽培品种为材料,对cDNA-AFLP技术的关键技巧作了研究和详细叙述,并建立起该技术体系,为小麦分子育种研究提供借鉴。采用Trizol法提取小麦叶片RNA,按照通常cDNA-AFLP技术方法进行,经过优化试验,使用Trizol法提取RNA,用PCR仪酶切连接,稀释20倍的预扩产物进行选扩后用AFLP银染技术可以得到理想的cDNA-AFLP结果。 相似文献
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以橡胶树品种热研88-13为试材,研究了橡胶树SAM-SSR法中各个过程（酶切、连接、抑制性和预扩增）中各因素对SAM法结果的影响。实验结果表明：5U MseⅠ和5U PstⅠ双酶切1h为最合适酶切浓度、方式和时间; 100~300ng为适宜的DNA模板浓度; 合适的连接温度和时间为16℃连接过夜;连接产物和抑制性PCR产物分别稀释20倍,为抑制性PCR和预扩增PCR的适宜模板浓度。 SAM扩增产物用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶检测,结果显示,扩增条带分布在 200~750bp之间,能够满足建立橡胶树SSR基因组文库的需要。 相似文献
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葡萄糖氧化酶对山葡萄酒陈酿过程花色苷含量的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
以‘左山二’山葡萄酒为试验材料,研究葡萄糖氧化酶对山葡萄酒陈酿过程中总花色苷及四种单体花色苷含量的影响。本试验总花色苷含量测定采用分光光度法,单体花色苷含量的测定应用高效液相色谱技术。结果表明,山葡萄酒在80天的陈酿过程中,葡萄糖氧化酶使山葡萄酒总花色苷及二甲花翠素-3,5-双葡萄糖苷含量下降缓慢,而花青素-3,5-双葡萄糖苷、甲基花翠素-3,5-双葡萄糖苷、花翠素-3,5-双葡萄糖苷含量变化与对照无显著差异。山葡萄酒中加入0.6 mg/L葡萄糖氧化酶能显著减缓酒中总花色苷及二甲花翠素-3,5-双葡萄糖苷含量的降解速率,对提高山葡萄酒的品质具有积极作用。 相似文献
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套袋对山葡萄花色苷及相关品质的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
为了研究套袋对山葡萄果实可溶性固形物、可滴定酸、还原糖和总花色苷含量的影响,为生产优质山葡萄提供理论指导。以‘双红’山葡萄为试验材料,应用HPLC技术,研究套袋对山葡萄花色苷及相关品质的影响。结果表明,套袋可使果实的滴定酸含量显著增加,可溶性固形物和含糖量降低,总花色苷含量无显著差异,花青素-3-葡萄糖苷含量显著低于对照组。在采收期提前解袋可使还原糖增加,总花色苷含量无显著差异,花青素-3-葡萄糖苷含量增加显著。 相似文献
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山葡萄霜霉病发生规律及其抗病性的进一步探讨 总被引：2，自引：2，他引：0
霜霉病是山葡萄的主要病害。通过对葡萄园气象条件与霜霉病的多年观测,我们对山葡萄霜霉病的发病规律有了进一步的认识,发现在一定的气候条件下病害的潜育期不超过24小时,比前人揭示的病害潜育期明显缩短。同时,发现在某一品种寄主下的病原菌,在品种间的传播能力有显著差别。为此在防御措施上提出了新的见解。 相似文献
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为了探明MADS-box基因在山葡萄性别分化中的作用,笔者利用实时荧光定量PCR技术对Vv MADS5和Vv MADS8 2个基因在山葡萄雌、雄花发育过程的表达情况进行分析。结果表明,2个基因在山葡萄雌花和雄花中都有表达,Vv MADS8在雌花和雄花中的表达趋势以及表达量基本相同。Vv MADS5在雌花和雄花中的表达类型相同,而其在雌花中的表达量显著高于雄花。Vv MADS8在花芽膨大期(4月30日)表达量最高,而Vv MADS5在花序展露期(5月14日)表达量最高。Vv MADS8、Vv MADS5参与山葡萄性别分化,但不是控制性别分化的关键基因。 相似文献
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研究NaOH处理打破紫椴种子休眠的效果及NaOH处理后对紫椴种子萌发过程中贮藏物质的影响。采用不同质量分数NaOH处理紫椴种子,结合变温层积,定期统计发芽势、发芽率,并在层积过程中定期随机取样进行贮藏物质的测定。结果表明：30%NaOH处理1.5 h对紫椴种子休眠解除效果最好,发芽势平均为38%,发芽率平均为71.66%,20%NaOH处理1.5 h及10%NaOH处理6 h效果次之。与对照相比,NaOH处理后种子在整个层积过程中,淀粉、可溶性蛋白和可溶性糖含量显著下降,淀粉酶活性变化剧烈,呈“W”型。说明NaOH处理能够有效地解除紫椴种子的休眠,同时有效地改善了种子的透水透气性,在一定程度上加速了紫椴种子休眠解除过程中生理生化反应的进程。 相似文献
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温度对紫椴种子萌发及萌发过程中物质转化的影响 总被引：2，自引：1，他引：1
为研究经层积处理解除休眠的紫椴种子适宜萌发的温度条件,及不同温度条件下种子萌发过程中储藏物质的动态变化,开展了紫椴在5种恒温和4种变温下种子的发芽率和发芽指数的研究,并选择萌发最适与最差温度重新进行发芽试验,探讨2种温度对种子萌发过程中储藏物质的转化的影响。结果表明：紫椴种子适宜萌发的恒温条件为10℃和变温条件为15℃/10℃,温度高于20℃时,温度越高,萌发率越低。不同温度下储藏物质转化研究表明,高温下,淀粉酶活性在一定程度上受到抑制,导致种子中的淀粉分解缓慢,可溶性糖和蛋白代谢也受到不同程度的抑制,从而导致种子不能正常萌发。 相似文献
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中国野生葡萄抗寒基因的RAPD标记及其序列分析 总被引：3，自引：0，他引：3
以抗寒性存在差异的83份葡萄种质及3个杂交组合玫瑰香(Vitis vinifera)×黑龙江实生(V.amurensis)、北醇(V.vinifera×V.amurensis)自交、燕山-1(V.yes hanensis)×河岸-3(V.riparia Beaumont)的F1代122株为试材,进行了中国野生葡萄抗寒基因RAPD标记的研究。通过对110个随机引物的筛选,获得了2个与中国野生山葡萄抗寒基因相连锁的RAPD标记S241-670和S238-800。通过克隆、测序,这2个RAPD标记的实际长度分别是717bp和854bp,因此重新命名为S241-717和S238-854,其序列的GenBank登录号分别为GQ338290和GQ338289。经序列分析,S241-717与29条欧洲葡萄全基因组鸟枪序列有77%~97%的同源性,S238-854与6条欧洲葡萄全基因组鸟枪序列有82%~100%的同源性;二者分别编码欧洲葡萄的一种假定蛋白。RAPD标记S241-717和S238-854可用于葡萄抗寒育种的早期分子标记辅助选择。 相似文献