产低温碱性蛋白酶黄海黄杆菌YS-9412-130的复合诱变原生质体选育   总被引：7，自引：0，他引：7  

王跃军  孙谧  张云波  洪义国  阎晓玲  王春波  刘晓萍 《海洋水产研究》2000,21(4):20-25

以黄海黄杆菌YS－9412－130突变株SW1－104为出发菌,在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体,对原生质体进行复合诱变,对大量再生突变株进行筛选和淡水驯化,最终获得了高产、稳定的碱性蛋白酶产生菌SW2－104,在自来水培养基中能够大量产酶,产酶活力为3910U／ml。从而解决了黄海黄杆菌YS－9412－130低温碱性蛋白酶大规模工业化生产设备和产业化区域的局限性。  相似文献   

产低温碱性蛋白酶黄海黄杆菌YS-9412-130高产菌株的选育   总被引：6，自引：0，他引：6  

张云波  孙谧  洪义国  王跃军  阎晓玲  董美娜  桑玉泉  田杰  王瑞娟 《海洋水产研究》2000,21(4):14-19

以黄海黄杆菌YS－9412－130菌株为出发株,经亚硝基胍、硫酸二乙酯、紫外线（UV）与微波（MI）复合诱变和自然选育,获得1株产低温碱性蛋白酶高产稳定的突变株YS－9412－130－SW1－104,其产低温碱性蛋白酶为出发株的16倍。在摇瓶发酵培养条件下,酶活力达2320U／ml(20℃测定）,该诱变株具有Ref^r、Str^r、Amp^r和Met^-、Lys^-标记。突变株与出发菌株在细胞形态上比较,结果表明二者没有显著差异。  相似文献   

黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶的基因克隆和序列测定   总被引：4，自引：0，他引：4  

洪义国  孙谧  郑家声  王跃军  张云波  郝建华  王瑞娟  向悟生 《海洋水产研究》2000,21(4):46-53

黄海黄杆菌YS－9412－130具有稳定的分泌低温碱性蛋白酶的能力。将其染色体DNA用Sau3AⅠ部分酶切后,低熔点琼脂糖回收2－10Kb的DNA片段,用Klenow大片段酶半补齐,与用SalⅠ酶切且半补齐的质粒pUC19连续后,转化E.Coli.JM109,构建基因文库。且酪蛋白平板法和酶联免疫吸附（ELISA）的活性筛选方法从基因文库中筛选到一株产海洋低温碱性酶的阳性克隆（命名为pHH1）。序列测定分析表明,此重组质粒包含有长度为768bp低温碱性蛋白酶基因的完整的开放读码框架（ORF）和上游基因调控序列。此片段编码由256个氨基酸组成的酶,计算分子量为83000Dal。通过Southern杂交证实了此片段来自于黄海黄杆菌YS－9412－130基因组DNA。  相似文献   

黄海黄杆菌YS-9412-130产酶发酵条件的优化   总被引：4，自引：0，他引：4  

张云波  孙谧  王跃军  洪义国  阎晓玲  田杰  谢峰  姜展军 《海洋水产研究》2000,21(4):26-35

以产低温碱性蛋白酶的黄海黄杆菌YS－9412－130突变株SW2－104为培养菌株,进行碳源、氮源、无机盐、起始pH值、培养时间、接种量和接种龄等发酵条件的优化实验。实验结果证明,在以1％葡萄糖为碳源,以3.5％豆饼粉为氮源,无机盐：0.4%Na2HPO4、0.03%KH2PO4、0.02%MgSO4、0.1%Na2CO3、0.2?Cl2,起始pH值7.0,接种12h种龄的种子4％,20℃、250r/min的条件下在旋转摇床中培养36h,菌株产酶活性最高。  相似文献   

黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶活性必需基团分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

洪义国  孙谧  修朝阳  张云波  王海英  王跃军 《海洋水产研究》2002,23(3):26-29

用化学修饰法结合酶的紫外吸收光谱变化研究黄海黄杆菌YS－9412－130分泌的海洋低温蛋白酶的功能基团性质，结果表明，羟基、咪唑基、ε－氨基及胍基均与酶活性有关，而羟基、巯基与酶活性无关。酶的性质与丝氨酸蛋白酶有很大的相似性。  相似文献   

黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶性质鉴定   总被引：8，自引：3，他引：8  

孙谧  修朝阳  王跃军  陈丽芳  张云波  洪义国  阎晓玲  韩艳波  李晶  陈良 《海洋水产研究》2001,22(2):1-10

对黄海黄杆菌YS-9412-130菌株产低温碱性蛋白酶的理化性质研究表明，该酶由256个氨基酸组成，分子量为33000Dar，等电点pI为9.45，米氏常数Km为5×10-3mmol/L；酶的最适作用pH范围为9.5～10.5，最适作用温度30℃，具有一定的抗氧化稳定性。Ca2+、Mn2对酶有激活作用，而Hg2+、Ag+对酶有抑制作用。DFP、NBS严重抑制酶的活性,而同时该酶也能被EDTA抑制。结果表明该低温碱性蛋白酶为一新型的丝氨酸蛋白酶。  相似文献   

一株产低温碱性蛋白酶嗜冷海洋细菌YS-9412-130的分离和培养条件研究   总被引：17，自引：0，他引：17  

孙谧  王跃军  张云波  洪义国  阎晓玲  陈毓桢  王春波  刘晓萍 《海洋水产研究》2000,21(4):1-5

自海水贝类中取样,经分离培养基和酪蛋白培养基复合培养,用检测蛋白酶产生水解圈和Folin-酚碱性蛋白酶活性测定相结合的方法从1000多份样品中初步筛到了产碱性蛋白酶活力高、性能优良的菌株YS－9412－130。对其初步研究结果表明,该菌只能利用有机氮源生长;在接近自然海水盐度、温度20℃、pH在7.0-9.0条件下,菌体生长和产酶较好。  相似文献   

黄海黄杆菌YS-9412-130固定化细胞产酶技术   总被引：2，自引：0，他引：2  

张云波  王跃军  洪义国  孙谧  刘惠  王春波  刘晓萍 《海洋水产研究》2000,21(4):36-40

3种不同的包埋材料固定化YS－9412－130菌体细胞,进行半连续发酵。结果表明,用2.5%卡拉胶固定化细胞,产酶效率最高;添加明胶对产酶不利而添加豆饼粉与玉米粉后,酶活力有显著提高;卡拉胶固定化细胞发酵液中游离菌体浓度随发酵时间变化略有上升,总体水平较低。发酵液酶活随菌体浓度的增大而呈上升趋势;固定化细胞半连续发酵效率远高于游离细胞分批发酵的效率。  相似文献   

黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶的制备工艺研究   总被引：8，自引：0，他引：8  

王跃军  孙谧  洪义国  张云波  沙珍霞  阎晓玲  苗小庆  姜展军 《海洋水产研究》2001,22(2):11-20

对黄海黄杆菌所产低温碱性蛋白酶的工业生产技术和电泳纯级试剂酶的分离纯化工艺进行了实验。按照设计的中试生产技术，每吨发酵液可得酶粉20kg，粗酶比活大于20×10  相似文献   

黄杆菌属中的一个新种   总被引：3，自引：0，他引：3  

孙谧  张云波  洪义国  王跃军  邱秀宝  董美娜  桑玉泉  王春波 《海洋水产研究》2000,21(4):6-13

由海产贝类中分离到一菌株YS-9412-130,为革兰氏阴性短杆菌、末端圆、有鞭毛、不能滑行运动、大小为0.4～0.7μm×1.0～1.5μm,裂殖生殖,不生成芽孢,胞内无多-β-羟基丁酸颗粒。菌落光滑,黄色、半透明,边缘完整。其色素无荧光,含类胡萝卜素,其正己烷提取液经光谱测定最大吸收峰为450nm。该菌生长的温度范围为0～25℃,最适为18～22℃,最高25℃(在25℃生长极弱或几乎不生长)。此菌株于pH7.0～9.0能生长,最适pH为7.5,耐6％NaCl,80μg／m1的链霉素或80μg/ml的氨卞青霉素。YS-9412-130菌株为好气菌,严格的有氧呼吸代谢,过氧化氢酶、氧化酶阳性和磷酸酶阳性,利用多种糖、水解淀粉但不分解纤维素、琼脂和几丁质。水解干酪素、胨化石蕊牛奶最后变碱。液化明胶试验阴性,还原硝酸盐;不产H2S和吲哚;MR和V．P．试验阴性;YS-9412-130菌株DNA中G+C含量为32.2mol％。该菌株的特征符合黄杆菌属的特征,但与此属中的其他种比较又有显著的差别,因此将其定为黄杆菌属一新种,命名为黄海黄杆菌（Flavobacteriumyellowseasp.nov）。  相似文献   

利用马氏珠母贝4个壳色系F₃培育厚层优质珍珠   总被引：1，自引：1，他引：0  

符韶  谢绍河  邓岳文  梁飞龙 《水产学报》2012,36(9):1418-1424

为了评价红、金黄、白和黑壳色系F3育珠性状,设立两个实验,分别利用马氏珠母贝红、金黄、白和黑壳色系F3作为植核(受体)贝和小片(供体)贝进行植核育珠。实验Ⅰ:利用红、金黄、白和黑壳色系F3为插核贝和小片贝建立16个组合,另外利用以普通养殖群体为插核贝、金黄壳色系F3为小片贝建立了1个组合,共建立17个组合,育珠期为24个月;实验Ⅱ:分别利用红、金黄、白和黑壳色系F3为植核贝和小片贝建立16个组合,育珠期为18个月。结果表明,育珠期结束后实验Ⅰ和Ⅱ的4个壳色系F3平均壳高和成活率均存在显著性差异(P<0.05),实验Ⅰ和Ⅱ的黑壳色系F3具有最大的平均壳高,实验Ⅰ金黄壳色系F3具有最高的成活率,实验Ⅱ黑壳色系F3具有最高的成活率。实验Ⅰ:各组合间的留核率、商品珠率、优良珠率和育珠绩效均存在显著性差异(P<0.05),珍珠层厚度差异不显著(P>0.05);BW组具有最大的留核率、商品珠率、珠层厚度和育珠绩效值,RB组具有最大的优良珠率;实验Ⅱ:各组合的留核率、商品珠率、优良珠率、珍珠层厚度和育珠绩效均存在显著性差异(P<0.05)。黑壳色系F3作为插核贝具有较好的育珠效果,经进一步测试其育珠性能,可在珍珠生产中推广应用。  相似文献   

角毛藻对营养盐的吸收/释放速率常数的测定   总被引：3，自引：0，他引：3  

韩秀荣  王修林  祝陈坚 《海洋水产研究》2001,22(2):52-56

采用1次培养的实验方法，测定了角毛藻对氮、磷等营养盐的吸收情况，并根据王修林等提出的生态动力学模型，测定了该藻种对营养盐吸收／释放的动力学参数。其中，对NO^-3的吸收速率常数和释放速率常数分别为0．42/d和0．15/d，对PO^3－4的吸收速率常数和释放速率常数分别为1．72d和0．77/d。这表明，角毛藻对PO^3-4的吸收和释放均大于NO^-3.  相似文献