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克隆中介蝮蛇(Gloydius intermedius)纤维溶解酶(Fibrinolytic enzyme,FLE)基因,分析其基因序列并对该基因的功能进行分析.从中介蝮蛇毒腺细胞中提取总RNA,通过RT-PCR法扩增纤溶酶基因,与pMD18-T载体连接进行TA克隆,再进行序列的测定并且对该序列进行分析.扩增得到完整开放读码框在内的长为777 bp的纤溶酶基因序列.成功克隆了编码中介蝮蛇纤溶酶的基因序列,推导其编码的氨基酸序列.开放读码框编码258个氨基酸,含有大量疏水氨基酸.其中,前1～19位氨基酸编码信号肽;根据同源性推测,以His65、Asp110和Ser204组成纤溶酶的活性中心并高度保守;序列内合12个Cys.两两配对结合成的6个二硫键对纤溶酶的高级构型和稳定性至关重要.成功克隆中介蝮蛇毒纤溶酶基因为进一步研究该基因的遗传特征以及为该酶在原核及真核生物中的表达研究提供依据. 相似文献
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为获取微生物源溶栓药物,从土壤中获得产纤溶酶活性较高的1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Z-3。从Z-3菌株的发酵液中提取纤溶酶,利用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和聚丙烯酰凝胶电泳等方法,对纤溶酶进行分离纯化。分离纯化得到1个单一组分(BSFE-1),SDS-PAGE电泳检测为单一条带,BSFE-1表观分子量为48 kDa,等电点为10.5,属丝氨酸蛋白酶类,纤维蛋白平板法检测纤溶酶活性BSFE-1的比活力为4 494.099 U/mg,BSFE-1在4~50℃和pH 4~11之间活性较稳定。 相似文献
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【目的】获得家蚕溶茧酶基因的全长序列,实现溶茧酶基因在大肠杆菌中的融合表达。【方法】利用cDNA末端扩增技术（RLM-RACE）克隆了家蚕溶茧酶基因cDNA序列（GenBank 登录号：EF428980）。【结果】家蚕溶茧酶基因cDNA序列全长1 047 bp,其中780 bp的蛋白质编码区可编码260个氨基酸,预测蛋白质分子量为27.6 kD,等电点（pI）为8.89。家蚕溶茧酶基因包含4个内含子。用Signal P 3.0 Server程序分析家蚕溶茧酶基因,预测其从第1～22位为信号肽序列。SMART分析结果预测其第34～254位氨基酸序列具有类胰蛋白的丝氨酸蛋白酶活性。重组质粒pET-32a-Cocoonase 转化E.coli BL21进行原核表达,SDS-PAGE分析结果表明,家蚕溶茧酶基因以融合蛋白形式表达,相对分子量为48 kD。【结论】本研究成功地克隆、表达了家蚕溶茧酶基因,分析和预测了它的结构和功能,为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。 相似文献
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枯草芽孢杆菌纤溶酶植物根系分泌表达生物反应器模型的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
[目的]枯草芽孢杆菌纤溶酶是一种碱性丝氨酸蛋白水解酶,具有强烈的纤溶活性,临床上可用于预防和治疗血栓栓塞性疾病,可用于开发新型溶栓药物。[方法]该研究采用PCR法克隆枯草芽孢杆菌纤溶酶基因及其前导肽序列,通过农杆菌介导转化野生型拟南芥,并利用纤维蛋白平板法检测BSFE纤溶活性。[结果]通过农杆菌介导转化获得转BSFE基因拟南芥,PCR检测证实BSFE基因已在转基因拟南芥基因组内整合,纤溶活性检测进一步证实BSFE可在转基因拟南芥体内表达,并可通过组织及根系分泌型表达,建立植物组织及根系分泌表达外源蛋白的系统模型。[结论]该研究为进一步阐明外源蛋白分泌表达机理及建立植物根系分泌生物反应器提供依据。 相似文献
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根据已发表的豆豉纤溶酶基因DNA序列(GeneBank AY720895.2),设计并合成了一对引物,应用PCR技术以筛选的来自豆豉的产纤溶酶的芽孢杆菌的总DNA为模板,扩增出了豆豉纤溶酶基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,进行了序列测定,测序结果经Genetool序列分析表明该基因长1 089 bp,编码363个氨基酸,与已发表Brevibacillus laterosporus豆豉纤溶酶基因序列在核苷酸水平上与所发表的序列有98%的同源性;在氨基酸水平上与已发表的芽孢杆菌豆豉纤溶酶同源性为100%。并将该基因克隆到大肠杆菌表达载体pET22b上,在大肠杆菌中实现了高效表达。 相似文献
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蚯蚓纤溶酶的研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
蚯蚓纤溶酶是近年发现的一种新型溶栓物质,该酶具有纤溶活性和溶栓活性,故其研究受到了极大的关注。文章概述了蚯蚓纤溶酶结构特点、药用价值、酶学活性、基因获取与表达、开发利用等方面近10年以来的研究进展。 相似文献
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[目的]为豆豉纤溶酶的进一步研究与应用奠定基础。[方法]以从芽孢杆菌中提取的总DNA为模板,根据GenBank的豆豉纤溶酶基因(AY720895.2)DNA序列设计1对引物,克隆豆豉纤溶酶基因并进行序列测定。构建毕赤酵母表达载体pL3,在毕赤酵母中表达豆豉纤溶酶基因。[结果]经PCR扩增可获得约1.1 kb的DNA片段。序列分析表明所克隆DNA片段包含1个1089 bp的开放阅读框,编码363个氨基酸。该克隆基因与所发表的豆豉纤溶酶基因序列的核苷酸序列同源性为98%,而氨基酸序列同源性达100%。[结论]所克隆的豆豉溶纤酶基因在毕赤酵母中成功表达,且表达产物具有正常的生物学活性。 相似文献
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[目的]从豆豉产品中筛选分离活性较高的豆豉纤溶酶产酶菌,并对菌种进行保藏。[方法]用自制的猪血粉为底物配制筛选培养基进行豆豉纤溶酶产酶菌的筛选,然后根据水解圈的大小筛选活性高的产酶菌株,最后将其保藏于LB培养基中。[结果]成功从湖南、广东、江西等地产的豆豉中筛选到一株溶栓活性相对较高的产酶菌。[结论]该研究为新型溶栓药物的开发奠定了基础。 相似文献
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[目的]对延边黄牛CAPN3基因多态性与氨基酸含量关系进行研究。[方法]应用PCR-SSCP检测了96头延边黄牛CAPN3基因多态性,并采用SPSS软件对各基因型的氨基酸含量进行差异显著性分析。[结果]CAPN3基因发生G55556A突变,差异显著性分析结果显示,该位点不同基因型之间的脂肪酸和氨基酸含量存在差异,其中AA基因型油酸含量显著低于GG基因型（P〈0.05）。不同基因型个体天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、络氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和脯氨酸含量上存在显著性差异,且均表现为AA基因型氨基酸含量显著高于GG基因型。[结论]CAPN3基因与延边黄牛氨基酸含量显著相关。 相似文献
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《西南农业学报》2019,(12)
【目的】人微小纤溶酶原是由261个氨基酸组成的肽链,位于人纤溶酶原第549～790位,含有纤溶酶原活性区域,被激活后具有纤溶活性,能够降解纤维蛋白。本文旨在优化人微小纤溶酶原cDNA在毕赤酵母中的表达条件。【方法】在NCBI中获取人微小纤溶酶原氨基酸序列,根据毕赤酵母密码子偏爱性原理,设计对应的DNA序列,然后进行人工合成。合成的基因序列经测序验证后酶切与表达载体pPICZαA连接形成重组表达质粒pPICZαA-mPlg,转入大肠杆菌JM109中扩增质粒,提取阳性菌落中的重组质粒,双酶切获得人微小纤溶酶原的表达单元,然后构建4拷贝(表达单元)pPICZαA-mPlg,单酶切线性化质粒。然后电转化导入感受态毕赤酵母SMD1168中,经表型筛选、PCR筛选阳性克隆,获得高表达人微小纤溶酶原工程菌。培养工程菌后,甲醇诱导工程菌细胞让人微小纤溶酶c DNA表达,用SDS-PAGE检查其分子量,发色底物法检测微小纤溶酶原活性,通过发酵条件优化提高人微小纤溶酶原的产量,用SP-Sepharose fast flow凝胶层析方法纯化目标蛋白。【结果】SDS-PAGE检测到符合人微小纤溶酶原分子量大小的蛋白条带,同时发色底物法检测出样品中含有纤溶活性,其水平达到90 U/mL。【结论】本文为后续进行大规模表达人微小纤溶酶原打下了基础。 相似文献
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草莓根系分泌物和腐解物中氨基酸的检测及其化感作用研究 总被引：16，自引：1，他引：15
运用ACCQ．Tag法测定了草莓根系分泌物和腐解物中8种氨基酸的含量,并研究了不同氨基酸对草莓根病病原菌的化感作用。结果表明：根系分泌物和腐解物水提液中氨基酸含量高于醇提液,检测出的6种氨基酸中．丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸和精氨酸对Fusarium oxysporum和Rhizoctonia solani的菌丝生长有明显的促进作用。苏氨酸、脯氨酸和精氨酸对F．axysporum有明显促进作用,天冬氨酸和谷氨酸对3种病原菌菌丝生长均有明显的抑制作用;谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、脯氨酸和精氨酸对Verticillium dahliae孢子萌发有明显促进作用,而苏氨酸对其孢子萌发有抑制作用。天冬氨酸和苏氨酸对F.axysporum的孢子萌发有明显抑制作用,谷氨酸对F.axysporum孢子萌发无明显作用,其余3种能明显促进F．axysporum孢子萌发。 相似文献
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通过对猪囊尾蚴虫体 (CWag)、囊液 (CFag)、头节 (CSag)、囊壁 (CBWag)、脲溶抗原 (UCWag)和成虫抗原(TSag)的水解氨基酸以及抗原反应原性的分析 ,确定了各氨基酸与抗原反应原性的关系。试验结果表明 ,几种抗原都含有 17种氨基酸 ,通过数据处理软件SPSS对各种抗原组成差异分析显示 ,各种抗原在天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、组氨酸的组成上无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,且CSag、CBWag之间在所有氨基酸组成上均差异不显著 ;而UCWag却与其它抗原在氨基酸组成上差异显著 (P <0 .0 5 )。UCWag的敏感性和特异性均较高 ,脯氨酸与抗原反应的敏感性呈正线性相关 ,谷氨酸与抗原反应的特异性呈正线性相关 相似文献
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《（《农业科学与技术》）编辑部》2015,(9)
[目的]为氮肥的合理施用提供依据。[方法]分析高羊茅在氮胁迫条件下蛋白质、叶绿素、酶和氨基酸等的生理变化特征。[结果]在氮胁迫下,高羊茅叶片中叶绿素含量降低,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、谷氨酰胺合成酶(GS)活性增强。在分析的20种氨基酸中,天冬酰胺、丝氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、丙氨酸、精氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸含量明显下降。[结论]该试验为今后合理利用氮元素、发掘植物生态潜能提供理论依据。 相似文献
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用DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析从中草药蒲黄中分离纯化一种纤维蛋白溶解酶,用纤维蛋白板检测分离后组分的纤溶蛋白活性,天然电泳检测分离效果,分离后得到了比活力为25.29的单一组分,SDS电泳确定该组分的表观分子量为31 000 D,同时比较了不同蛋白酶抑制剂对该组分的抑制作用。结果表明:该组分的纤维蛋白水解酶活性被PMSF、亮抑肽素、抑肽酶、大豆胰蛋白酶抑制剂以及苯甲脒强烈抑制,表明该粗提物中的蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族。 相似文献