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1.
抗草甘膦转基因大豆及加工品LAMP检测研究 总被引：9，自引：0，他引：9
将环介导的等温核酸扩增技术应用于转基因大豆及加工品检测.针对抗草甘膦Roundup Ready转基因大豆及加工品外源基因EPSPS设计2对特异性引物进行扩增,成功建立起定性检测转基因大豆及加工品的LAMP检测方法.优化LAMP反应条件,反应温度为65℃,反应时间为1h.结果表明:该体系能快速、灵敏、有效地检测转基因大豆及加工品中整合的EPSPS基因,检测限为0.01%,低于国际现行最低检测量0.5%的要求.检测EPSPS基因操作简单,成本低、特异性强、灵敏度高.LAMP检测结果可信,稳定性好,可对目前批准的抗草甘膦RoundupReady转基因大豆及加工品进行定性检测. 相似文献
2.
采用PCR技术检测CaMV 35S启动子,并进一步通过PCR检测RoundUp Ready Soybean(RRS)和Btl76 Maximaizer的特异性DNA片段,判断大豆和玉米加工产品中是否含相应转基因成分.在1份豆粕和豆腐样品中检测到了RoundUp Ready大豆特异性的498 bp片段,而在玉米粒样品中检测到了Btl76特异性转基因成分.PCR检测的灵敏度达到0.1%,稳定性良好.结果表明,PCR技术检测外源基因是灵敏和准确的,可以广泛地应用到转基因作物及其加工产品的转基因成分检测中. 相似文献
3.
利用多重PCR技术快速检测五个转基因大豆品系 总被引：2，自引：0，他引：2
转基因大豆305423、MON89788、CV127、GTS40-3-2、356043作为商品化应用最为广泛的大豆品系,种植面积占世界转基因大豆总种植面积的80%以上。根据大豆内标准基因Lectin和5种转基因大豆品系的边界序列设计特异性引物。通过验证引物的适用性、特异性和灵敏度,优化多重PCR检测体系中不同引物的用量及反应退火温度,建立了能同时扩增大豆内源基因Lectin和5个转基因大豆品系的六重PCR检测体系。结果表明:确定的大豆内源基因和5个转基因大豆品系的引物具有很好的特异性,引物之间无交叉扩增和非特异性扩增,多重PCR方法的检测灵敏度达到0.1%。该方法可作为转基因大豆及其产品成分检测的辅助手段,快速检测转基因大豆及其产品中的相应品系。 相似文献
4.
PCR-ELISA法对大豆品种的转基因定性检测研究 总被引：4，自引：0，他引：4
以共价交联在PCR管壁上的寡核苷酸作为固相引物进行PCR扩增,对PCR扩增的固相和液相产物分别进行杂交和凝胶电泳检测的PCR-ELISA法,对黑龙江省常规选育品种合丰35和黑农37、外源DNA直接导入大豆的分子育种所获品种黑生101、及大连进口的美国2号等大豆,进行转基因定性检测.结果表明:该方法高效可靠,可作为一种快速定性检测转基因产品的方法;检测结果:美国2号为转基因大豆,黑生101、合丰35和黑农37为非转基因大豆.上述结果对分子育种、生态保护、安全监测及对建立黑龙江省非转基因大豆生产保护区等具有重要意义. 相似文献
5.
据估测 ,1 999/0 0年度不同类型的转基因抗虫棉在美国的种植面积分别为 :Bollgard(单抗鳞翅目害虫 ) 64.75万公顷 ;Roundup Ready(单抗除草剂 )1 61 .90万公顷 ;Roundup Ready/Bollgard(双抗棉铃虫和除草剂 ) 56.66万公顷1999/00年度美国转基因棉面积@王淑民 相似文献
6.
PCR-ELISA方法在转基因大豆检测中的应用 总被引：5，自引：0，他引：5
利用共价交联在PCR管上的瓜核苷酸作为固相引物进行PCR扩增，扩增产物可分为固定在管壁上的固相产物和游离在液体中的液相产物。分别对两种产物进行检测分析，进行双重检测，灵敏度高。可靠性强，易于操作，是适合推广的一种转基因大豆检测的快速方法。 相似文献
7.
第二代抗草甘膦大豆PCR检测方法研究 总被引：10，自引：0，他引：10
为建立转基因大豆Roundup RReady2Yield"(RR2Y)转化体特异性定性PCR检测方法,以lectin基因作为内参照基因,根据RR2Y外源插入片段5'端与植物基因组连接区序列设计特异性引物,从RR2Y中特异性地扩增出223bp的预期产物.对该方法进行重现性、特异性、灵敏度、稳定性和可重复性测试,结果显示:陔方法能够特异性检测出RR2Y转化体;将100%RR2Y基因组DNA用A3244基因组DNA进行梯度稀释,以100 ng DNA为模板,该方法的检测灵敏度达到0.05%,约为40个起始模板拷贝;以RR2Y DNA含量为10%、1%、0.1%的样品为模板,进行稳定性和可重复性,假阴性率为0.结果表明:此方法适用于RR2Y的转化体特异性定性PCR检测. 相似文献
8.
华南农业大学根系生物学研究中心采用拟南芥的紫色酸性磷酸酶基因AtPAP15转化大豆品系粤春03－3（YC03-3）,获得了酸性磷酸酶活性明显提高、可高效利用土壤磷素的转基因大豆新品系AP15-1。以AP15-1为研究对象,应用TAIL－PCR技术,根据载体序列设计特异引物,获得了转化载体左侧插入的旁邻序列。设计事件特异性检测引物,进行PCR扩增,只能在AP15-1的样品中扩增出特异性条带,进一步用实时荧光定量PCR作分析,结果显示,该引物对重复性好,融解曲线显示只有一个特异峰值。本实验应用该引物对建立的检测方法,检测的灵敏度可以达到0.01%,实时荧光定量PCR检测的极限值可以达到9个基因组的拷贝数,能够满足对转基因大豆新品系AP15-1及其衍生品种检测的需要。 相似文献
9.
10.
改良环介导等温扩增技术快速检测转基因大豆 总被引：6，自引：0，他引：6
采用改良环介导等温扩增(LAMP)技术,建立一套准确、快速、可靠的用于转基因大豆检测及DNA提取的方法.以CP4-EPSPS外源基因为检测的目的片段,设计内、外引物和环引物,并采用改进的方法提取DNA,进行LAMP扩增,实际检测已知转基因大豆和市售大豆,通过肉眼观察白色沉淀,判断检测结果.改进的DNA提取方法与经典的CTAB方法相比,提取时间至少缩短了1 h,降低了提取成本.环介导等温扩增(LAMP)技术对转基因大豆的检出限为0.01%,是普通PCR方法的20倍.因此,改良的LAMP检测转基因大豆方法灵敏度高,耗时短,方法简便. 相似文献
11.
Zorica Nikolić Ksenija Taški-Ajduković Mladen Tatić Svetlana Balešević-Tubić 《Industrial Crops and Products》2009,29(2-3):638-641
The Vojvodina province is the most important agricultural area of the Republic of Serbia and is its largest soybean producer. Serbian low forbids the introduction of genetically modified organisms (GMO) into the environment and demands labeling of food containing more than 0.9% GMO. This aim of this study is to monitor the Roundup Ready (RR) soybean in fields and in food products using PCR and immunoassays. A duplex PCR reaction was performed to analyze the lectin gene and 35S promoter using DNA isolated from soybean leaf and seed sample. Specific detection of RR markers was performed using nested PCR and verified by immunoassay. RR soybeans were found in 68 fields in samples from 2003 and 28 fields in 2004. The presence of the RR soybean was confirmed in 44 seed samples out of 7142 samples examined in 2006 and in 108 out of 7171 samples examined in 2007. The data presented here are the first to demonstrate the presence of RR soybean in the Serbia fields. 相似文献
12.
Roundup Ready大豆外源基因在食品加工过程中的降解变化 总被引：6，自引：0，他引：6
采用定性PER检测技术，通过分析豆腐、豆奶、豆粉3种大豆加工食品中磨浆、煮浆、调配、均质、杀菌、喷雾干燥等关键工艺对Roundup Ready大豆外源基因EPSPS的影响，揭示外源基因在不同加工过程中降解程度的变化规律。研究结果表明，外源基因EPSPS在3种大豆加工食品的各个工艺过程中均会受到不同程度的破坏和影响。在豆腐、豆奶、豆粉的加工过程中，片段大小为1512bp及807bp的外源基因仅能在原料中检测到；当原料经过磨浆后，EPSPS基因的片段大小骤然降至800bp以下；点浆、加热等工艺又使得外源基因继续降解至400bp左右；随着挤压成型、高温杀菌及喷雾干燥工艺的完成，3种大豆终产品中目的基因片段大小仅为190bp左右。 相似文献
13.
为了防止国外商业化生产的转基因番木瓜流入国内市场,建立转基因番木瓜 55-1 转化事件定性 PCR 检测方法,对于保护国内消费者知情权意义重大。本研究以转基因抗环斑病毒番木瓜 55-1 为研究材料,利用外源基因和番木瓜基因组序列设计了 9 对特异性检测引物,通过特异性引物筛选、熔解曲线分析、退火温度优化、特异性验证、灵敏度分析及检测限验证,建立转基因番木瓜 55-1 转化事件定性 PCR 检测方法。结果表明：本研究筛选出的检测引物,可特异的检出转基因番木瓜 55-1 转化事件,引物的检测灵敏度达到了 0.1%的标准,高于欧盟0.9%的检测要求,完全可满足转基因检测标识制度的顺利实施。 相似文献
14.
耐除草剂基因g10evo-epsps 在我国转基因农作物研发中常常被用作目标性状基因或筛选标记基因，因此
可作为转基因成分检测的重要筛查基因，但目前缺少相应的检测方法。本研究旨在建立g10evo-epsps 基因特异性
的实时荧光定量PCR（qPCR）检测方法，从而为转基因大豆的监测提供一种稳定可靠的方法体系。本研究基于转基
因大豆中的g10evo-epsps 基因序列设计了qPCR检测引物和探针，并对检测方法的特异性、灵敏度、准确度和精确性
进行了实验室内验证。结果显示，建立的g10evo-epspsqPCR检测方法能够特异性检测转基因大豆ZUTS-33中的
g10evo-epsps 目的基因；标准曲线分析表明，3次重复试验的扩增效率在90%以上，R2 均大于0.99；方法的检测限
（LOD）为不高于8拷贝，定量限（LOQ）推测为16拷贝；对含量为4.5%、2%、0.5%、0.09% 和0.045% 的转基因大豆
ZUTS-33基因组DNA进行准确度分析，发现该方法测定的平均值和预期值之间的偏差为0.00%~11.11%，3次重复
试验的RSDr为2.30%~17.10%。结果表明本研究建立的g10evo-epsps qPCR检测方法能够满足转基因大豆筛查检测
的要求，为转基因大豆监管和标识提供技术支撑。 相似文献
15.
以常规大豆品种中黄13为对照,研究了抗草甘膦转基因大豆AG5601对根际土壤可培养微生物的数量影响。经过大豆2个生长周期的研究发现：在相同时段内,转基因大豆AG5601和对照对根际土壤细菌、真菌和放线菌的数量变化影响趋势基本一致;除在第2生长周期的第30～100天（20100618～20100908）时转基因大豆极显著地抑制了根际土壤真菌数量（p<0.01）外,转基因大豆对根际土壤微生物数量的影响呈不规律变化;转基因大豆对根际土壤微生物有一定的影响,但无明显规律可循。此研究结果为在我国南繁地区开展转基因大豆AG5601安全评价提供数据支持。 相似文献
16.
以若干定性PCR方法部颁标准对含有0.5％的4份不同转基因混合样品进行检测,先以通用元件标准中的CaMV35s启动子、NOS终止子对混合样品进行初步定性PCR筛选。结果表明,4份样品中都含有转基因成分。Bt基因特异性标准检测表明,3#和4#样品含有转基因抗虫水稻成分。构建特异性标准PCR检测表明,2#、3#和4#样品含有转基因GTS-40-3-2大豆成分。以MON810、Bt176、NK603转化体事件标准进行品系特异性PCR检测,结果证实：1#和4#样品中含有Bt176转基因玉米成分;3#样品中含有Mon810转基因玉米成分;4份样品中均不含NK603转基因玉米成分。说明农业部颁布的定性PCR方法标准能满足于对多种转基因混合样品的检测,且检测结果准确,可靠。 相似文献
17.
《Journal of Cereal Science》2004,39(1):99-107
Maize GA21 line has integrated several tandemly repeated copies of the r-act 5-enol-pyruvylshikimate-3-phosphate synthase construct used for plant transformation. We were able to amplify a nucleotide sequence corresponding to the polylinker plasmid vector flanked by the r-act promoter and nopaline synthase 3′-terminator. A method for specific detection and quantification of Roundup Ready® transgenic maize line GA21 DNA using conventional and real-time PCR and based on this transgenic sequence is described. GA21 specific primers and probe were designed targeting the vector–promoter junction region and amplifying a 72-bp DNA fragment. Quantification methods were optimized through three different real-time PCR chemistries, i.e. SYBR® Green I, Amplifluor™ and TaqMan®. All three methods proved to be specific, highly sensitive and reliable for both identification and quantification of GA21 DNA.Plasmid pGAivr containing single copies of the GA21 and invertase amplicons was constructed for use as external standard in calibration curves. Using pGAivr, a TaqMan® based real-time PCR assay was optimized in duplex format targeting the maize species-specific ivr1 gene and the GA21 junction region. The detection limit of the method was 0.01% GA21, which is far below the established threshold for accidental presence of genetically modified organisms (GMO), this method therefore being suitable for use in routine GMO analysis. 相似文献
18.
一种大豆SNP分型新方法 总被引：1，自引：0，他引：1
单核苷酸多态性(SNP)在大豆基因组中分布广泛,SNP分型是大豆SNP遗传作图,关联分析、分子标记辅助选择等研究的重要技术.本文以Rhg4基因开发的5个SNP为例,介绍了一种大豆SNP分型的新方法-片段长度差异等位基因特异性PCR(FLDAS-PCR).采用AS-PCR原理,针对某个SNP位点设计2条相差4-5bp的特异引物和1个公用引物,PCR产物约100bp或150bp,2种等位基因型PCR产物相差4-5bp,在2个特异引物3'端第3和4碱基位置分别人为引入错配碱基来提高PCR特异性,通过6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可将纯合和杂合基因型检测出来.探讨了特异引物浓度和退火温度对Rhg4-1592扩增效果的影响,研究表明,可通过调整特异引物浓度和退火温度优化扩增效果.FLDAS-PCR对18份种质分型结果与PCR产物克隆测序法一致,表明本研究建立的FLDAS-PCR法是一种简便、快捷、新型的大豆SNP分型方法. 相似文献