具几丁质酶抑制活性的中性蛋白酶的筛选与纯化     

张新军  谢洁  蓝希钳  肖杰  潘国庆  周泽扬 《西南大学学报(自然科学版)》2006,28(3):513-517

利用平板快速筛选法,从土壤中筛选到一株细菌BacillusSp.2108,其代谢物对几丁质酶具有较强的抑制活性。对其发酵液离心,用硫酸铵盐析后,经Sephadex G-25脱盐柱脱盐、DEAE Sephrose Fast F low阴离子交换柱层析和低压液相色谱Superdex G 75凝胶过滤层析等步骤进行分离纯化,最后通过SDS-PAGE检测,得到一条单带。纯品经SDS-PAGE,转膜,测序,及序列比对,初步判定此抑制物是一种中性蛋白酶。  相似文献   

关于卤虫卵壳作为保水剂的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

王文全  侯平  郑春霞  李志强  周疆明  易秋香  石晓翠  喻梅辉 《新疆农业大学学报》2003,26(2):56-58

以卤虫卵壳作为材料研究了其保水特点。结果表明：原始的卤虫卵壳pH值为6．5～7．0，含盐量为3．38％；要将原始卤虫卵壳开发为保水剂，关键在于降低其含盐量，实验表明脱盐过程卤虫卵壳与水以1：80的重量比，分两次等量冲洗处理可将其含盐量降低到无盐害状态。脱盐处理后的卤虫卵壳的容积吸水比为0.95：1；经脱盐处理后的卵壳与土壤等体积配比保水性好。  相似文献   

稻瘟病菌一假定几丁质酶在毕赤酵母中的表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

周洁  陈鑫  郑祥梓  林成增  王宗华  鲁国东 《福建农林大学学报(自然科学版)》2009,38(6)

本研究从稻瘟病菌菌株Guy11中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增到一假定几丁质酶基因MGG_08054.6的cDNA序列,将其亚克隆至带有His-tag标签的酵母表达载体pPIC3.5K中,构成重组质粒pPIC3.5K-ws,电击转化至毕赤酵母菌菌株GS115,通过MD-MM平板筛选及PCR验证获得重组酵母转化子GS115-PICH-ws;阳性转化子在甲醇诱导下,成功分泌出重组蛋白.SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子质量为48 ku,与其理论计算值基本相符;Ni-NTA法分离纯化后的重组蛋白经DNS法测定具有几丁质酶活性.  相似文献   

抗逆生防木霉筛选及其相关因子诱导   总被引：1，自引：0，他引：1  

袁素贤  阚国仕  陈红漫 《安徽农业科学》2007,35(16):4716-4718,4739

对供试各木霉菌株经303、5、404、55、0℃保温24 h后,于28℃培养6~7 d,进行耐高温菌株筛选。结果表明,耐高温生防木霉菌株T-30经热激后可产生抗逆蛋白,且表达量较大。对高温抗逆蛋白进行DEAE-32及Sephadex G-100柱层析得到单一蛋白洗脱峰。SDS-PAGE电泳发现该抗逆蛋白含有2个亚基,分子量分别为30和42 kD。酶学检测发现,该高温抗逆蛋白有几丁质酶活力,其最适pH值为5.0,最适温度为50℃,Km值为0.91 mg/ml,对Na+有较强的耐受性。  相似文献   

海洋产几丁质酶菌株的筛选及发酵条件优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

张灿  黄德智  李丰硕  王硕  薛永常 《吉林农业大学学报》2012,34(2):141-146

通过透明圈法初筛、DNS复筛,从大连近海海域的海泥中分离出一株高产几丁质酶的菌株,经初步鉴定为扩展短杆菌(Brevibacterium linens).采用不同碳源、氮源、温度、pH值等对培养条件进行了优化及正交试验.结果表明:该菌产酶最适条件是在28℃、pH7.0、蛋白胨1g/L、胶体几丁质10g/L、NaCl 20g/L条件下,几丁质酶活力可达0.508 U/mL,比优化前其产酶活力提高了9倍.  相似文献   

高产几丁质降解酶菌株的分离鉴定及其酶学性质研究     

时杰  杨勋  刘平怀 《广东农业科学》2012,39(23):190-194

从海南热带海洋红树林土样中分离得到一株高产几丁质酶菌株HN12,经形态、生理生化和16S rDNA基因手段鉴定,其为一新种,命名为Chitiniphilus haikoumanggrovensis(GenBank No.HQ877498,type strain CGMCC No.5142)。单因素试验研究菌种酶学性质,结果显示:其最适酶反应温度为50℃,但在此温度下酶活力下降较快,综合酶的温度耐受性,酶促反应温度定为40℃;最适酶促反应pH值为7.0;在测试的9种金属离子中,未发现有金属离子能提高酶活力;酶解产物主要为几丁四糖;在优化后的酶解反应条件下测定酶活力达到2.1 U/mL。  相似文献   

鸭肝过氧化氢酶的分离纯化及部分性质研究     

邱慧  郭小路  易燚波  唐云明 《西南大学学报》2008,30(4)

新鲜鸭肝经匀浆、磷酸缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝过氧化氢酶电泳纯制品,回收率为18.23%,比活达4 780.38 U/mg,纯化倍数为66.15.最适温度为40℃,最适pH为7.0,该酶在20～40℃,pH 5～8内稳定.经凝胶过滤和SDS-PAGE测得该酶的全分子量为250 KD,亚基分子量为62.5 KD.  相似文献   

棉花黄萎病菌拮抗细菌TYG-2抑菌蛋白的分离纯化     

孙瑶 《山西农业大学学报(自然科学版)》2011,31(5):400-407

拮抗细菌TYG-2是从根际土壤中分离得到的一株芽孢杆菌,其菌株发酵液产生的抑菌物质对棉花黄萎菌具有较强的抑制作用。为了得到它的抑菌活性组分,将TYG-2菌株去菌体发酵液经硫酸铵沉淀,得到的沉淀物脱盐后经DEAE-Sepharose Fast Flow分离得到4个组分,经抑菌活性测定得到一个抑菌活性组分,再通过Sephacry S-100凝胶过滤分离得到两个组分P1和P2,经检测表明P1组分对V.dahliae的菌丝生长具有抑制作用,为有效抑菌活性组分。经SDS-PAGE电泳纯化为单一蛋白带,分子量约为30kDa。  相似文献   

番茄菌根根际土壤产几丁质酶细菌的分离及其几丁质酶活性研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

朱娟  张树生  李岳峰  茆泽圣  冉炜  沈其荣 《南京农业大学学报》2009,32(3)

对盆栽试验根际土壤微生物数量计数结果表明,接种丛枝菌根(AM)真菌苏格兰球囊霉菌(Glomus caledonium)的番茄菌根根际土壤的细菌、真菌、放线菌和产几丁质酶细菌总数显著高于非菌根根际土壤.从番茄菌根根际土壤中分离得到1株产几丁质酶细菌,该菌能够抑制黄瓜尖镰孢的生长.经16S rDNA和生理生化鉴定,该菌为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)菌株.该菌在pH 6～8范围几丁质酶活性没有显著差异,产酶的最适温度为35 ℃,最适装液量为1/5(250 mL三角瓶).在几丁质液体培养基中摇床培养125 h后酶活性与蛋白质含量达到平衡.表明:该菌株具有稳定的产几丁质酶能力,因此具有潜在的生物防治功能.  相似文献   

高山红景天UGT72B14-2基因克隆及其原核表达     

胡滢滢  薛飞燕  杨明峰  吕鹤书  柳春梅  马兰青 《北京农学院学报》2016,31(4):7-11

[目的]旨在构建UGT72B14-2的原核表达体系,为进一步研究其功能与应用奠定基础.[方法]利用RT-PCR技术从高山红景天茎叶中分离获取UGT72B14-2基因,在大肠杆菌中表达后,经Ni2+亲和柱纯化、PD-10柱脱盐处理,利用SDS-PAGE检测目标蛋白.[结果]测序结果表明UGT72B14-2基因长度为1 422 bp,预测其编码473个氨基酸,蛋白质相对分子量(Mr)为51.49 kDa,等电点(pI)为6.30;SDS-PAGE检测结果表明当初始菌液OD600约0.6时,诱导4h后目标蛋白即可大量表达,纯化、脱盐和浓缩处理后可获得较高纯度的重组蛋白.[结论]UGT72B14-2属于UDP-葡萄糖基转移酶家族的一员,能够在大肠杆菌中表达.  相似文献