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一种有效的菊花总RNA提取方法 总被引：1，自引：1，他引：0
菊花组织或器官中含有大量的酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物质,影响了菊花总RNA的提取质量。本研究用改良TRIZOL法提取菊花不同器官总RNA,并用凝胶电泳、紫外分光光度计对提取的总RNA质量和完整性进行检测,并对叶片总RNA进行反转录,通过RT-PCR扩增了菊花管家基因Actin的部分片断。结果表明,采用改良TRIZOL法提取的RNA条带清晰、完整性好、质量高,其中A260/A280比值在2.08~2.19。通过RT-PCR从叶片中扩增出了目的基因cDNA片断。该方法是一种快速、有效的提取菊花总RNA的方法;该方法适用于根、茎、叶、花等器官或组织总RNA的提取,可作为菊花不同组织和器官总RNA提取的通用方法。 相似文献
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血红鸡爪槭叶片总RNA提取方法的比较研究 总被引：1，自引：0，他引：1
血红鸡爪槭叶片中富含多糖、多酚物质,严重影响了RNA提取纯度和质量。为了获得适宜血红鸡爪槭叶片总RNA提取的方法,采用柱式植物RNAout法、TRIZOL法和改良CTAB法3种提取方法对其叶片总RNA提取效果进行比较分析。结果显示,采用柱子法提取获得的总RNA产率最高,但是有DNA污染;TRIZOL法提取的总RNA OD260∕OD280为1.65,可能有多糖和酚类物质的污染,并且产率最低;改良CTAB法提取的总RNA纯度很高,OD260/OD280平均值在2.0左右,产率在上述两种方法之间,电泳图清晰,而且改良CTAB法提取的总RNA,经RT-PCR获得了清晰的特异性条带。表明改良CTAB法提取的总RNA纯度和产率高,完全可以满足进一步分子生物学研究的需要,是血红鸡爪槭叶片总RNA提取的适宜方法。 相似文献
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因为多糖等大分子的污染,传统Trizol法难以从香石竹的叶片中获得完整RNA。本研究以香石竹为材料,对传统的Trizol法进行改良,成功地从香石竹花瓣和叶片中提取了总RNA,经琼脂糖电泳,紫外分光光度计测定总RNA完整性好,纯度大,花瓣的OD260/OD280=1.96,每0.1g花瓣可获得RNA61μg,叶片RNA的OD260/OD280=1.94,每0.1g幼叶可获得RNA33μg,花瓣的RNA产量普遍高于叶片。经改良Trizol法提取的被香石竹斑驳病毒侵染的植株的花瓣和叶片的总RNA,经RT-PCR获得了特异性条带,说明用改良Trizol法从香石竹花瓣和叶片中提取的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于香石竹进一步的分子生物学研究。 相似文献
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《分子植物育种》2020,(11)
毛葡萄叶片中含有大量多糖、多酚等多种次生代谢物,严重影响RNA提取质量,筛选从毛葡萄叶片中提取高质量RNA的方法是开展相关分子研究的基础。本研究采用改良CTAB法、改良SDS/酚法和三种试剂盒法,筛选适合转录组测序的提取毛葡萄叶片总RNA的方法。结果显示,五种方法均可以获得毛葡萄叶片总RNA,但在纯度和完整性上差别较大。改良CTAB和改良SDS/酚法提取的总RNA OD_(260)/OD_(230)比值小于1.8,试剂盒A法提取的总RNA在纯度和完整性上均可以满足转录组测序要求,试剂盒B法和试剂盒C法提取的总RNA降解严重。相比其他四种方法,试剂盒A法提取的毛葡萄叶总RNA质量更好,在纯度和完整性上均能满足转录组测序及其他分子生物学实验的要求。 相似文献
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紫叶李叶片总RNA提取方法的改进与比较 总被引：11，自引：0，他引：11
从紫叶李叶片中提取高质量RNA是研究叶色相关基因表达调控的必要前提。实验室常用的RNA提取方法和RNA提取试剂盒有很多种,每种方法只适合某些组织材料。对彩叶植物来说,组织中的次生代谢物含量很高,叶片中的花色素苷、多糖更是高质量核酸提取过程中难以去除的干扰成分。本文利用CTAB法、SDS法以及Trizol法从富含花青素类物质的彩叶植物紫叶李叶片中提取总RNA。电泳检测显示:CTAB法提取的总RNA其28S、18S条带清晰,紫外光谱分析A260/A280比值为1.93,A260/A230比值为2.04,RNA产量可达141μg·g-1·FW-1;而且通过RT-PCR扩增出了目的基因的cDNA片段,说明利用此法分离的RNA纯度和浓度符合反转录PCR的要求,而且能去除色素分子的干扰。SDS法提取的总RNA产量较低,且纯度不高。而Trizol法很难从紫叶李中提出完整的RNA。因此CTAB法是一种从富含花青苷的紫叶李叶片中有效提取高质量总RNA的方法。 相似文献
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甘蔗种质总RNA提取方法的研究 总被引：4，自引：1，他引：3
甘蔗是重要的糖料及能源作物之一。甘蔗种质RNA的提取是甘蔗分子生物学研究的前提。本实验是以成熟甘蔗的叶片为材料,通过对前人的植物RNA提取方法进行改良,寻求最佳的甘蔗总RNA提取方法。通过改良最后得到的异硫氰酸胍法Ⅲ具有成本低、操作简单、省时等特点。用该法提取得到的甘蔗总RNA经琼脂糖凝胶电泳可获得28S、18S和5S rRNA3条带,并且28S rRNA的亮度大于18S rRNA的亮度。表明该方法提取的RNA完整性好,纯度高。另外对所得部分甘蔗种质的总RNA进行RT-PCR检测,可特异扩增出目标片段,说明用异硫氰酸胍法Ⅲ提取的甘蔗种质总RNA,可以直接用于后续的分子生物学试验。 相似文献
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RT-PCR快速检测3种烟草病毒技术 总被引：1，自引：0，他引：1
为了快速提取植物叶片的总RNA,并对烟草病毒进行检测,对提取及检测方法进行了研究.结果表明:以黄瓜叶片、白肋烟叶片为试材,用TRIzol试剂盒在1 h内提取到纯度高、完整性好的总RNA.设计烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的特异性引物,RT-PCR检测,从感病叶片中分别扩增出313,326,392 bp的目的片断,而健康叶片中无此扩增带.构建这3种病毒重组质粒,对核苷酸序列与GeneBank中报道的进行比较,同源性分别为99.36%,97.55%,98.21%.用这种方法快速、可靠,为烟草病毒的检测提供科学依据. 相似文献
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为了快速提取植物叶片的总RNA,并对烟草病毒进行检测,对提取及检测方法进行了研究。结果表明：以黄瓜叶片、白肋烟叶片为试材,用TRIzol试剂盒在1 h内提取到纯度高、完整性好的总RNA。设计烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的特异性引物,RT-PCR检测,从感病叶片中分别扩增出313,326,392 bp的目的片断,而健康叶片中无此扩增带。构建这3种病毒重组质粒,对核苷酸序列与GeneBank中报道的进行比较,同源性分别为99.36%,97.55%,98.21%。用这种方法快速、可靠,为烟草病毒的检测提供科学依据。 相似文献
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旨在通过苗期人工接种鉴定,筛选高抗疫病的甜瓜材料,为甜瓜抗病育种以及抗疫病遗传学研究奠定基础。本研究采用灌根接种法,向植株根茎部土壤注入浓度为1×106个/mL的游动孢子悬浮液,对收集到的166份甜瓜材料进行了抗性鉴定,这些材料中有薄皮类型甜瓜41份,厚皮类型甜瓜104份,野生材料15份,近缘种6份。最终筛选到4份免疫材料,25份高抗材料。在供试的厚皮类型甜瓜中有66%的材料抗性水平在中抗及以上,而薄皮类型中有98%的抗性水平是感病或高感。通过相关性分析,发现厚皮类型甜瓜对疫病的抗性要显著高于薄皮类型甜瓜。通过对不同材料的果实性状进行调查,发现在免疫和高抗材料中有14份单瓜重达到1 kg以上,有8份果实可溶性固形物含量在10%以上。这些兼具高抗、高产和高可溶性固形物的材料,可用于抗病基因的定位、克隆等遗传学研究,也可作为育种亲本将抗病基因转移到农艺性状优良但抗性差的甜瓜品种中。 相似文献
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为建立适合甜瓜(Cucumis melo L.)叶片蛋白质组分析的双向电泳体系(2-D),以甜瓜植物叶片为试验材料,比较了2种不同植物叶片蛋白的提取方法,并对双向电泳的2个重要的环节技术即聚焦参数和上样量进行了优化。结果表明：与Tirs-酚提取法相比,使用改良后的Mg/NP-40/PEG3350/TCA丙酮提取法提取叶片蛋白,经过SDS-PAGEF分析之后,所得的蛋白含量较高,Rubisco酶去除的较好,条带清晰。采用 pH 3~10,18 cm的IPG胶条进行双向电泳时,适当增加低电压聚焦时间,得到了较为清晰的2-D图谱。蛋白上样量为800 μg时,得到的蛋白点数最多,低峰度蛋白较为清晰。研究建立了适用于甜瓜叶片蛋白分析的双向电泳体系,得到了蛋白点数目多且分辨率高的双向电泳图谱。为下一步在蛋白组学水平上分析与甜瓜抗病、产量、性状等相关蛋白提供了技术支持。 相似文献
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乙烯在高等植物生长发育等多个方面都具有重要的调控作用,而ACS(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid(ACC)synthase,1-氨基环丙烷-1羧酸合成酶)是乙烯生物合成途径的限速酶,由多基因家族编码,不同的发育、环境、激素刺激等信号诱导不同的ACS基因表达。本研究以甜瓜品种‘河套蜜瓜’(Cucumis melo L.cv.Hetao)为实验材料,应用生物信息学的方法从其基因组数据库中鉴定并筛选出ACS基因家族的全部成员,共鉴定得到11个甜瓜ACS基因。系统发生与进化关系分析结果表明,甜瓜ACS基因中,CmACS1和CmACS2属于Ⅰ型,CmACS7、CmACS10、CmACS11和CmACS12属于Ⅱ型,CmACS3和CmACS5属于Ⅲ型。启动子预测结果显示,甜瓜ACS基因启动子序列中,主要含有参与防御和胁迫响应的顺式作用元件和参与响应各种激素的顺式调控元件。半定量和实时荧光定量检测结果表明,甜瓜ACS基因表达具有组织特异性,CmACS1和CmACS11在果实跃变期表达量升高;CmACS3和CmACS5在各个组织中均未检测到表达量;CmACS7只在根中略有表达;而CmACS10和CmACS12在叶中表达量较高。这些结果预示着甜瓜ACS基因的转录调控可能参与了果实发育、成熟衰老过程以及对各种逆境的响应,这为该基因家族各成员的功能鉴定奠定了理论基础。 相似文献
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薄皮甜瓜果实总蛋白质双向电泳优化体系的建立 总被引：2，自引：2，他引：0
为建立适宜的薄皮甜瓜果实总蛋白质双向电泳的试验体系,以‘京蜜11号’薄皮甜瓜为试材,从果实总蛋白质的提取方法、等电聚焦条件、IPG胶条梯度等方面进行了探索优化。结果表明,酚-甲醇/醋酸铵沉淀法能够高效的提取薄皮甜瓜果实总蛋白质,选用24 cm pH 4~7的IPG胶条,800 μg上样量,120000 Vhs聚焦,SDS-PAGE电泳后采用胶体考马斯亮蓝染色。该优化的体系可以获得背景清晰、分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。 相似文献
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适宜当归实时荧光定量分析的总RNA提取方法研究 总被引：1，自引：1，他引：0
为了有效消除次生物质、多糖和多酚类物质的严重干扰,获得高质量适宜于实时荧光定量分析的当归总RNA,本研究采用CTAB法、试剂盒法和Trizol法分别提取当归根、茎、叶组织的总RNA,并通过紫外可见光分光光度计、非变性琼脂糖凝胶电泳和反转录荧光定量PCR检测总RNA的纯度、产率、完整性及质量。结果表明：CTAB法提取的当归根、茎、叶组织总RNA纯度较高、完整性较好且叶组织总RNA得率较高;试剂盒法所提的总RNA完整性亦较好,但纯度略差且各组织的得率均较低;Trizol法提取的茎组织总RNA能满足荧光定量PCR要求,但提取的根和叶组织总RNA均出现严重污染,无法满足后续研究要求。因此,CTAB法是一种经济、可靠、适宜当归实时荧光定量分析的总RNA提取方法。本研究结果为今后有效开展当归分子生物学研究奠定了方法学基础,也为其他药用植物总RNA的提取提供了参考。 相似文献
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Isozymes of eight enzymes in Cucumis hystrix Chakr. and two cultivated Cucumis species (C. sativus L. and C. melo L.) were
analysed electrophoretically to investigate the biosystematics of these three species. Cluster analysis using data from six
enzymes indicated that considerable genetic distance existed between both C. hystrix and melon and between C. hystrix and
cucumber. C. hystrix might be a key species for studying the evolution and taxonomy of genus Cucumis.
This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date. 相似文献
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利用CTAB法、SDS法、Trizol法,从绿豆叶片中提取了总RNA：利用改进的GT法从绿豆叶、茎和子叶中提取了总RNA,提取结果通过凝胶电泳和紫外吸光光度值检测。结果显示：用改良的GT法提取的总RNA,凝胶电泳图上28S条带是18S条带亮度的两倍以上：而用其它3种方法提取的总RNA电泳条带不如GT法提取的总RNA清晰。用GT法从绿豆叶片中提取的总RNA的A260/A280值为1．94,可以用于RT-PCR、DDRT-PCR和Northern杂交等实验。通过RT-PCR,得到绿豆钙调蛋白基因约450bp,从而进一步检验了提取的总RNA的质量。改良的GT法可以认为是一种简便、快速的提取绿豆RNA的方法。 相似文献
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本研究以黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染的黄瓜叶片为材料,应用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（DAS-ELISA）、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、核酸斑点杂交（NASH）技术,进行了检测灵敏度比较研究。三种检测方法灵敏度实验结果表明：RT-PCR检测灵敏度高于地高辛标记的核酸斑点杂交技术,以血清学为基础的DAS-ELISA检测灵敏度最低。通过灵敏度对比分析得出,核酸斑点杂交技术可以替代RT-PCR应用于基层的检疫检测。 相似文献