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以假臭草叶片为材料，对影响其随机扩增多态DNA(RAPD)反应的各因素进行优化，建立了假臭草RAPD的优化反应体系和程序，即在10 μL反应体系中，5 ng(/10 μL)模板DNA，1.0 μmol/L随机引物F15，150 μmol/L dNTPs，2.0 mmol/L Mg2+，1.0 U Taq DNA聚合酶；扩增程序为95℃预变性4 min，95℃变性40 s，36℃退火40 s，72℃延伸1 min，10个循环，后94℃变性30 s，35℃退火30 s，72℃延伸1 min，35个循环，72℃ 相似文献
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目的确定药用人参最佳随机扩增多态DNA(RAPD)分析方法。方法以药用人参新鲜叶为材料,研究对影响RAPD反应的各因素进行优化。结果药用人参RAPD反应体系及程序为:在25μL反应体系中,含40ng模板DNA,0.3μmol/L随机引物,0.2mmol/LdNTPs,2.5μL10×PCRBuffer,2.0UTaq酶;扩增程序为:第一步94℃预变性2min,第二步94℃变性1min,第三步36℃退火45s,第四步72℃延伸90s,返回至第二步重复40个循环,第六步72℃延伸10min,最后4℃保存以备电泳。结论建立了人参RAPD的优化反应体系及程序。 相似文献
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苎麻属植物RAPD反应体系影响因子的研究 总被引：12，自引：0，他引：12
以苎麻属植物中的4个种为材料，用SDS和CTAB2种方法提取基因组DNA并比较其RAPD分析的效果；对RAPD反应体系中的一些重要参数进行了优化，建立了适合苎麻属植物RAPD分析的反应体系。即在25μL的反应总体积中Mg^2 浓度为1.5mmol/L，dNTPs浓度为0.20mmol/L，40ng模板DNA，Taq酶1.0单位；反应程序为95℃预变性5min；前5个循环为94℃变性1min，36℃结合1min，72℃延伸2min；后40个循环为94℃30s，℃36℃1min，72℃2min（最后1个循环为10min）；共45个循环。该反应体系具有良好的稳定性和重复性。 相似文献
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为了建立显性多子房小麦RAPD反应的最佳体系,保证反应结果的稳定性和可靠性,降低反应成本,在相同PCR扩增程序(94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min,45个循环,72℃延伸10min,4℃保存)下,对多子房小麦基因组DNA的RAPD扩增体系各参数进行比较筛选,创建其最佳反应体系为:25μl反应体系中,模板DNA50ng,10×PCR缓冲液2.5μl,dNTPs0.2mmol/L,Taq酶1u,Mg2+浓度为2.0mmol/L,ddH2O12.17μl,随机引物10ng。 相似文献
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本文以嫩芽和鲜叶为材料,建立了十里香茶高效、微量基因组DNA提取方法,提取的DNAOD260/280在1.7～2.0之间,DNA产率在81.8～483.5 ng/mg之间,能够满足RPAD的需要。同时建立了十里香茶RAPD分子标记方法,25μL PCR反应体系中包含:50 ng DNA模板,1.2μL引物,2.5μL 10×PCR Buffer,2.5μL 25 mMMgCl2,2μL 10 mM dNTP,14.8μL ddH2 O1,U Taq聚合酶。PCR扩增程序为94℃预变性3 min,94℃变性1 min,36℃退火1 min 20 s,72℃延伸2 min4,0个循环后72℃延伸10 min。15个RAPD随机引物以十里香1号DNA为模板,分别扩增出1～7条带。 相似文献
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甜菜ISSR-PCR反应体系的优化 总被引：3，自引：0，他引：3
以甜菜基因组DNA为模板,研究了ISSR的主要影响因素,建立一套适宜于甜菜的ISSR优化反应体系及程序,并对该优化体系进行了验证.实验结果表明:①优化的ISSR扩增的反应体系为:20μL的反应体积中包括2.5mmol/L MgCl2,0.25mmol/L dNTPs,1.5U Taq DNA聚合酶,0.5μmol/L引物,10×PCR Buffer 2μL,100ng DNA模板.②优化的PCR扩增条件为:94℃预变性3min,然后94℃变性30s,45℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环后,72℃延伸5min.③利用优化的反应体系仅用1条引物就能将10份甜菜材料区分开. 相似文献
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为探索甘薯最佳TD-SSR-PCR体系,利用L16(43)正交设计研究2×PCR Mix、引物、模板DNA等主要影响因素的适宜浓度,并在此基础上对扩增程序和聚丙烯酰胺凝胶电泳上样量进行优化。结果表明,优化后的TD-SSR-PCR反应体系包括:10μL 2×PCR Mix、100 ng模板DNA、0.4μmol/L引物,1μL甘油,总体积20μL;优化后的扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性45 s、Tm+5℃~Tm-5℃(每循环退火温度下降0.5℃,Tm选用一对引物中的较小Tm值)退火30 s(退火时间因扩增片段大小而异)、72℃延伸1 min共20个循环,94℃变性45 s、Tm-5℃退火30 s、72℃延伸1 min共15个循环,最后72℃延伸7 min,4℃保存;聚丙烯酰胺电泳上样量以1.5~2μL为宜。在此条件下,利用引物Z37对10份甘薯材料进行PCR扩增,得到的条带清晰、多态性高,表明此条件适用于甘薯的TD-SSR-PCR反应体系。 相似文献
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茶树RAPD反应系统和扩增程序优化 总被引：23，自引：3，他引：20
以龙井43为材料，使用国产PCR仪，对茶树RAPD分析中影响PCR扩增结果的因素进行了研究，确定了茶树RAPD的最适反应系统和扩增程序，即在25μl反应体系中，含25～50ng模板DNA、2mmol／LMgCl2、各0．2mmo／LdNTPs、0．2μmol／L引物和0．5～1．0UTanDNA聚合酶；扩增程序为：94℃预变性180s，94℃变性60s，38℃退火90s，72℃延伸120s，共进行40～45个循环，最后72℃延伸300～600s，这样可以取得较好的扩增结果。 相似文献
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以荷花叶片提取的基因组DNA为材料,通过对影响ISSR—PCR扩增效果的一些因素,如dNTPs浓度、Mg2＋浓度、TαDNA聚合酶用量、引物用量、模板DNA用量以及退火温度等进行筛选和优化,确立了可用于荷花ISSR—PCR分析的最适宜的PCR反应体系：20μL PCR反应体积含O．4mmol·L-1 dNTPs、3．5mmol·L-1Mg2＋、1．5U TαqDNA聚合酶、0．4μmol·μL-1引物、3ng模板DNA。PCR扩增程序为：94℃预变性2min,94oC变性30s,54．5℃退火30s,72℃延伸1min,45个循环,最后72℃延伸7min,置4℃保存。应用该ISSR体系对6份荷花种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性。 相似文献
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以巨竹叶片提取的基因组DNA为材料,用引物UBC810（序列为GAGAGAGAGAGAGAGAT）研究了PCR反应体系的主要成分、退火温度及循环次数对该种植物ISSR扩增结果的影响。结果表明,20μL的反应体系含40ng模板DNA、0．6μmol·L^-1引物,1．0UTaqDNA聚合酶,2．5mmol·L^-1 Mg^2＋,0．25mmol·L^-1dNTPs,1×Buffer。PCR扩增程序为：94℃预变性5min;94℃变性45s,54．5℃复性30S,70℃延伸90S,循环40次;72℃延伸10min,置4c℃保存。 相似文献
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通过单因子、双因子实验研究了胡椒ISSR-PCR反应体系中热参数和5个主要成分,即退火温度、循环数、变性时间、退火时间、延伸时间以及Mg2+、dNTPS、引物、模板DNA、Taq DNA聚合酶对扩增结果的影响,建立了适合胡椒ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在25 μL反应体系中,内含2 mmol/L Mg2+、200 μmol/L dNTPS、1×PCR Buffer、2 μmol/L引物、100 ng模板、1 U Taq DNA聚合酶。扩增程序为94℃预变性3 min, 94℃变性120 s,复性60 s,72℃延伸 3 min,循环35个,结束后72℃延伸7 min。这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术进行胡椒种质鉴定、遗传多样性分析奠定了基础。 相似文献
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大豆SSR检测体系的优化研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以大豆为试材,研究了大豆SSR检测体系中PCR扩增的各主要成分对检测结果的影响,确立了适宜的退火温度和反应体积,改进了PCR扩增程序和银染方法,进一步优化了适用于大豆的SSR检测体系.优化后的SSR反应体系为:10×Buffer 1.00μL、2.00 ng/μL模板DNA、0.15μmol/L SSR引物、150.00μmol/L dNTPs、0.50 U Taq酶、2.00mmol/L Mg2 ,加ddH20至终体积10.00μL.优化的PCR扩增程序为:94℃预变性3 min;94℃变性25s,47℃退火25s,72℃延伸30s,共35个循环;72℃延伸5min,4℃保存.优化后的检测体系更为经济有效. 相似文献
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小麦RAPD分析中温度循环参数的优化 总被引：17，自引：2，他引：17
为了解决小麦材料RAPD分析中的重复性差，多态性低等问题，对反应中的温度循环参数进行了优化研究。通过比较不同变性时间，复性温度和升温速度等的扩增效果，设计出了适于小麦RAPD分析的PCR程序：94℃预变性5min；开始的5个循环为94℃1min,38℃1min,0.3℃/s升温，72℃2min;后40个循环为94℃10s，38℃1min,0.3℃／s升温，72℃2min,最后72℃5min。在后40个循环中用1－2s的变性时间，则能够有目的地扩增600bp左右及以下片段。利用该程序，每条引物检测的位点数平均达17．6个左右，高于一般报道的1－10个，该程序在小麦遗传多样性研究，分了标记鉴定等方面有较高的实用价值。 相似文献
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甜菜SRAP-PCR反应体系的优化 总被引：7，自引：0，他引：7
为了建立适宜甜菜的SRAP反应体系,以40个不同类型的甜菜品系为试验材料,研究了PCR反应体系的主要成分对SRAP扩增结果的影响。对SRAP反应体系中的DNA模板浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度以及dNTP浓度进行了探索,确立了适合甜菜的SRAP反应体系为:在20μL反应体系中,模板DNA为40ng,Taq DNA聚合酶1.0U,引物60ng,dNTP(2.5mmol/L)为1.6μL,扩增程序为94℃预变性3min,反应前5个循环在94℃1min,35℃1min,72℃1min的条件下运行;随后的35个循环复性温度提高到50℃,最后72℃延伸10min。并利用该反应体系对甜菜40个不同品系进行SRAP反应,用6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,不同品系间DNA谱带多态性丰富,证实该体系稳定可靠,可以用于甜菜的分子标记研究。 相似文献
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目的蕲蛇是蝰科动物五步蛇Agkistrodon acutus(Giienther)的干燥体,具有祛风,通络,止痉的功效。近年来,由于资源有限,价格昂贵,出现了用其他蛇冒充蕲蛇或在蕲蛇体内掺假的现象。可采用分子生物学方法来鉴定蕲蛇的真伪,并建立一种鉴定蕲蛇的方法。方法制备蕲蛇水提物、醇提物。提取蕲蛇粉末、蕲蛇水提物、蕲蛇醇提物、市售蕲蛇以及风湿祛痛胶囊的DNA,采用PCR方法得到PCR产物,并电泳鉴定其产物大小,鉴定蕲蛇真伪,通过实验验证方法的稳定性。结果研究发现含有蕲蛇的制剂的PCR产物均在240 bp之间有单一条带,并摸索得出鉴定的条件为:95℃预变性5 min,35个循环(95℃变性30 s,64℃30 s,72℃30 s),72℃延伸5 min,经过验证具有稳定性。 相似文献
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针对小麦黄花叶病毒(WYMV)和中国小麦花叶病毒(CWMV)在症状、传播途径、发生规律等方面高度相似、难以用常规手段鉴定的问题,根据两种病毒基因序列的异同点设计了三条引物CWWY-R2、CW1-F2和WY1-F2,以植物总RNA为模板、CWWY-R2为引物反转录合成cDNA.通过优化建立了一种同步检测两种病毒的反应体系:cDNA1.6 μL,引物(10 μmol·L-1)各0.4 μL,10×PCR Buffer(不合Mg2+)2μL,dNTPs(10 mmol·L-1 each)0.4 μL,Taq DNA聚合酶(5U·μL-1)0.8μL,MgCl2(25 mmol·L-1)0.8μL,ddH2O 13.2 μL,合计20 μL; PCR反应条件:94 ℃预变性5 min,94℃ 50 s,50℃50 s,72℃90 s,共30个循环,72℃延伸10 min.WYMV和CWMV的PCR扩增预期目的片段分别为508和918 bp.利用该方法对江苏高邮、扬州和大丰的样本进行检测,它们分别为WYMV、WYMV、CWMV单一侵染,证明该方法准确性较高,可用于两种病害同步检测. 相似文献
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目的地龙是巨蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum (E.Perrier)、通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓Pheretima guillelmi (Michaelsen)或栉盲环毛蚓Pheretima pectinifera Michaelsen的干燥体。具有清热定惊,通络,平喘,利尿的功效。近年来,由于需求量大,出现地龙掺假的现象,于是采用分子生物学方法来鉴定地龙的真伪,同时建立一种鉴定地龙的方法。方法提取地龙粉末、地龙水提物、地龙醇提物、风湿祛痛胶囊的DNA,采用PCR方法得到PCR产物,并电泳鉴定其产物大小,鉴定地龙真伪,通过实验验证方法的稳定性。结果研究发现含有地龙的制剂的PCR产物均在260bp之间有单一条带,并摸索得出鉴定的条件为:95℃预变性5 min,35个循环(95℃变性30 s,58℃30 s,72℃30 s),72℃延伸5 min,经过验证具有稳定性。 相似文献
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SSR指纹技术是一种非常有效的遗传分析技术,在生物遗传多样性分析、遗传图谱构建、品种鉴定和品种保护等方面有着广泛的用途。SSR技术简单、重复性高、采用银染显色技术等优点,为SSR的广泛应用奠定了良好的基础和可行性。在SSR扩增过程中,影响因素很多,如Mg2 、dNTPs、Taqpolymeras、引物等。本实验通过对各种影响因素不同浓度梯度的比较,得出优化后的SSR扩增的反应体系为:20μL的反应体积中包括2.0mmol/LMg2 ,0.1mmol/LdNTPs,0.25μmol/L引物,0.5UTaqDNA聚合酶,10×PCRbuffer2.0μL和40ng模板DNA。扩增条件为94℃预变性5min,94℃1min,60℃2min,72℃2min,35个循环,最后72℃5min。 相似文献
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以玉米丹2100和高粱辽杂10号的可见叶片为材料,应用RAPD筛选技术,对玉米、高粱基因进行分子标记.主要结果如下:(1)对玉米丹2100和高粱辽杂10号叶片总DNA提取纯化的方法进行优化,确定提取总DNA的最佳方法.即CTAB法.(2)初步建立了玉米丹2100和高粱辽杂10号RAPD反应体系,并确定了RAPD反应体系中最佳的引物种类及PCR扩增的最佳反应条件,获得了稳定高效的RAPD扩增结果及多态性较好的DNA.(3)应用RAPD技术筛选14个随机引物,共扩增出45条谱带.A2、G4、Y13分别扩增出3条差异谱带分别为OPG-04800、OPA-02450、OPY-13500. 相似文献