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1.
探究PUGNAc对罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)的抑制作用.通过建立PUGNAc对NAGase的抑制动力学模型,表明PUGNAc对NAGase的抑制是一种缓慢的、可逆的反应,IC_(50)为0.18μmol·L~(-1),抑制类型为混合性;与自由酶结合的抑制平衡常数K_I为0.110μmol·L~(-1),K_(IS)为0.827μmol·L~(-1);微观速率常数k_(+0)大于k′_(+0),表明游离酶分子比抑制剂存在下的酶—底物复合物更脆弱,从而推测底物的存在对PUGNAc抑制下的NAGase起着保护作用.  相似文献   

2.
【目的】捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是反刍动物主要的胃肠道线虫之一,该病在中国呈全国性流行。为研究捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)脂肪酸代谢相关蛋白DAF-22的生化特性,对其基因进行了克隆、原核表达,并对重组蛋白进行了体外酶活性测定。以期了解捻转血矛线虫Hc-DAF-22蛋白在过氧化物酶体脂肪酸β氧化中的作用。【方法】根据NCBI公布的H.contortus ZJ株daf-22 cDNA序列(Gen Bank:HQ738470.1)设计特异性引物,克隆Hc-daf-22基因并构建重组质粒pET-22b-Hc-daf-22,经测序鉴定正确后将其转化E.coli BL21,经终浓度为0.1 m mol·L~(-1) IPTG(isopropyl-β-d-thiogalactoside)诱导表达4h,离心菌液,50 mmol·L~(-1)浓度的PBS溶液重悬菌体溶液,冰浴超声破碎后上清沉淀分别进行SDS-PAGE分析。超声破碎后产物以镍柱亲和色谱法分离纯化重组蛋白Hc-DAF-22,并用SDS-PAGE检测蛋白纯化情况及以抗His血清作为一抗Western Blot鉴定。纯化后蛋白用超滤管浓缩除去盐分,并按照蛋白浓度测定试剂盒进行蛋白浓度测定。利用天然状态下的乙酰乙酰CoA(AcAc-CoA)分子会发生酮-烯醇互变形成烯醇化合物特性,酶活试验以乙酰乙酰辅酶a为底物建立标准曲线。硫解酶体外测活体系为(50 mmol·L~(-1) Tris-Cl pH 8.1,20 mmol·L~(-1) MgCl_2,60μmol·L~(-1)CoA,10μmol·L~(-1) AcAc-CoA,加入约0.1μg蛋白),通过记录反应过程中由于底物(AcAc-CoA)的减少而引起303 nm波长下的吸收值的变化,从而计算出硫解反应的初始反应速率,最终确定复性后的Hc-DAF-22的硫解酶活性。在相同条件下,取AcAc-CoA底物浓度为10μmol·L~(-1)的反应体系(50 mmol·L~(-1) Tris-Cl pH 8.1,20 mmol·L~(-1)MgCl_2,60μmol·L~(-1) CoA,10μmol·L~(-1) AcAc-CoA,加入约0.1μg蛋白于室温起始反应),分别调节反应体系的温度及pH梯度,确定Hc-DAF-22最佳酶活反应温度及pH条件。【结果】成功克隆Hc-daf-22基因,测序结果与NCBI已公布的H.contortus ZJ株Hc-daf-22基因序列比对基因相似度为99.9%,并实现重组子pET-22b-Hc-daf-22在E.coli BL21体内进行表达,表达产物经SDS-PAGE和Western Blot检测显示,pET-22b-Hc-daf-22基因在大肠杆菌中成功表达,呈部分可溶性,融合蛋白的分子量约为59 k D,测得蛋白浓度为1.70μg·μL~(-1);针对该表达产物的酶活分析结果表明,原核表达的Hc-DAF-22具有一定的硫解酶活性,其最适反应pH为8.0,最佳反应温度为37℃,酶学常数Km值和Vmax值分别为33.765μmol·L~(-1)和1 784 nmol·L~(-1)·min~(-1)。【结论】捻转血矛线虫DAF-22是过氧化物酶体脂肪酸β氧化的关键酶之一,本试验通过体外酶活试验成功测定Hc-DAF-22蛋白的酶活性,证明Hc-DAF-22具有一定硫解酶活性,但与秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)同源蛋白相比硫解酶活性较低。  相似文献   

3.
本试验采用离体培养的方法,分别用0.4mol·L~(-1)、0.6 mol·L~(-1)、0.8 mol·L~(-1)的NaCl处理3个月季品种的叶片,并于处理后24 h、48 h、72 h测定盐害指数。结果表明:NaCl浓度为0.4 mol·L~(-1)时,各月季品种叶片受盐害症状不明显,盐害指数相差较小,不宜作为月季耐盐性筛选浓度;而NaCl浓度为0.8 mol·L~(-1)时,各月季品种的叶片迅速受害,盐害指数相差很大,故可用于大批量月季品种的快速粗略的耐盐性筛选;而NaCl浓度为0.6 mol·L~(-1)时,各月季品种的受害速度适中,盐害指数差异大且相对稳定,是筛选月季耐盐品种的最佳浓度。  相似文献   

4.
应用分光光度法研究丝瓜多酚氧化酶及过氧化物酶酶学特性的影响因素,为丝瓜酶促褐变的研究提供基础。以普通丝瓜果肉为材料,PPO以邻苯二酚为底物,POD以愈创木酚为底物,研究分析反应温度、反应时间、pH及测量波长、底物的浓度、PPO提取酶液添加量对丝瓜PPO、POD活性的影响。丝瓜褐变相关酶提取和测定方法的优化:(1)PPO最佳反应体系:测定波长408nm、反应温度是35℃、pH为6.0、酶液用量0.15mL,最适底物为邻苯二酚,底物浓度为0.056mol·L~(-1);(2)POD最佳反应体系:测定波长410nm,反应温度为40℃,最佳pH为5.5,酶液用量0.1mL,底物是愈创木酚,浓度为0.067mol·L~(-1)。  相似文献   

5.
盐度胁迫对入侵生物福寿螺的急性毒性效应   总被引:1,自引:0,他引:1  
【目的】研究黑壳和黄壳福寿螺Pomacea canaliculata的耐盐性.【方法】采用急性盐度试验,观察人工咸水胁迫下2种壳色福寿螺的行为表现并计算半致死浓度(LC50);测量ρ(NaCl)=0、5、10 g·L~(-1)持续养殖1个月2种壳色福寿螺的生长及存活指标.【结果和结论】2种壳色福寿螺在ρ(NaCl)=20和15 g·L~(-1)时厣壳紧闭,处于生长抑制状态;在ρ(NaCl)=10 g·L~(-1)时出现逃逸现象,反应迟钝;ρ(NaCl)=5 g·L~(-1)与ρ(NaCl)=0(对照)行为表现类似,反应灵敏,活动自如.黄壳福寿螺48 h死亡率(y)与盐度(x)回归方程为:y=4.143x~(-1)4.762(R2=0.842),48 h半致死浓度(LC50)=15.63 g·L~(-1);黑壳福寿螺则为:y=3.958x~(-1)3.152(R2=0.866),48 h的LC50=15.96g·L~(-1).ρ(NaCl)=0、5、10 g·L~(-1)(低盐度)养殖生长试验表明:养殖1月后,2种壳色福寿螺在ρ(NaCl)=10g·L~(-1)下死亡率均最高.ρ(NaCl)=0、5、10 g·L~(-1)黄壳福寿螺绝对增质量分别为0.954、1.278和0.683 g,黑壳福寿螺则分别为0.845、1.073和0.877 g.2种壳色福寿螺均在ρ(NaCl)=5 g·L~(-1)时绝对增质量最大.因此,福寿螺能够耐受一定盐度,在盐度较低的咸水中也能生长良好,存在向河口地区入侵的风险.  相似文献   

6.
黄淮海平原小麦吸收镉与土壤可浸提镉间关系研究   总被引:7,自引:2,他引:5  
土壤重金属镉浸提量与小麦吸收镉量关系是评价浸提方法以及土壤中镉有效性的重要依据,为了给黄淮海平原小麦产区土壤镉污染评价提供科技支撑。分别采用0.43 mol·L~(-1)HNO_3、0.1 mol·L~(-1)HCl、0.05 mol·L~(-1)EDTA浸提土壤镉的方法对黄淮海平原11个不同地点大田土壤样品和24个小麦植株样品进行了测定,并对3种不同浸提剂浸提的土壤有效态镉量间的相互关系,及土壤浸提镉含量与小麦镉含量间的关系进行了探讨。结果表明:不同浸提剂浸提的土壤Cd含量、全量间的相关关系均达极显著水平;3种浸提剂的Cd浸提率为58.7%(0.43 mol·L~(-1)HNO_3)53.2%(0.05 mol·L~(-1)EDTA)25.9%(0.1 mol·L~(-1)HCl),不同浸提剂浸提的土壤有效态Cd含量与小麦植株Cd含量的相关性顺序为r=0.74(0.05 mol·L~(-1)EDTA)r=0.64(0.43 mol·L~(-1)HNO_3)r=0.49(0.1 mol·L~(-1)HCl);在pH为7.71~8.59和土壤全Cd含量范围为0.107~0.212 mg·kg~(-1)条件下,以EDTA浸提的土壤Cd含量及土壤Cd全量结合土壤pH值建立的方程可以较好地预测小麦籽粒Cd含量;经推算,EDTA浸提的土壤Cd和土壤Cd全量的安全临界值可分别为0.671 mg·kg~(-1)和1.02 mg·kg~(-1)。  相似文献   

7.
为了提高木质素降解子囊菌Paraconiothyrium variabile GHJ-4产漆酶的能力,采用响应面分析法优化其产酶培养基。最优的发酵培养基组成为:麸皮30 g·L~(-1),可溶性淀粉58.08 g·L~(-1),牛肉浸膏3.39 g·L~(-1),NaNO_3 1 g·L~(-1),KH_2PO_4 3 g·L~(-1),CuSO_4 0.554 g·L~(-1)。采用该优化培养基,GHJ-4菌株的漆酶酶活达到410.04 U·m L~(-1),比优化前提高9.5倍。以愈创木酚为底物,该菌株纯化漆酶的最适反应温度为50°C,最适反应pH为5.0,米氏常数Km为62.07μmol·L~(-1),最大反应速度Vmax为68.97 mmol·(L·min)-1;该漆酶在55°C以下、pH3.5~6.5的范围内较为稳定,Cu~(2+)、Mg~(2+)、Zn~(2+)对漆酶酶活有明显促进作用,而Hg~(2+)、Fe3+、Ag+对漆酶酶活有显著抑制作用。结果表明,Paraconiothyrium variabile GHJ-4是一株高效的漆酶产生菌株,具有潜在的工业化应用前景。  相似文献   

8.
以循化线辣椒果实黄色突变体H0809和高代自交系0599-1为试材,采用L_9(3~4)正交试验设计,研究线辣椒SSR-PCR反应体系的主要成分对扩增结果的影响,并对420对SSR分子标记进行筛选。结果表明,最优的反应体系为:总体积20μL,基因组DNA 20 ng,dNTP 100μmol·L~(-1),引物0.6μmol·L~(-1),Mg~(2+)2.5 mmol·L~(-1),Taq DNA聚合酶1.5μmol;通过筛选,获得72对具有多态性的SSR标记,多态性率为17.1%,平均每个标记扩增出2.67个等位基因。本试验建立的SSR-PCR反应体系和筛选的多态性标记可用于线辣椒种质资源分析、分子标记辅助育种、分子遗传图谱构建及基因克隆等研究。  相似文献   

9.
采用改良CTAB法提取国兰花苞基因组DNA。优化部分如下:(1)在裂解细胞核前加入洗净液(0.4 mol·L~(-1)葡萄糖+3%可溶性PVP+10 mmol·L~(-1)β-巯基乙醇);(2)抽提时加入1/4体积的无水乙醇;(3)用等体积异丙醇沉淀DNA的同时加入1/2体积NaCl(5 mol·L~(-1))。结果表明,采用该法提取的DNA浓度介于216.5~245.8 ng·μL~(-1)之间,1.78D_(260 nm)/D_(280 nm)1.81,浓度和纯度均能满足常规分子生物学研究的需求。  相似文献   

10.
洛克沙胂在土壤柱中的淋溶迁移   总被引:1,自引:0,他引:1  
畜禽粪便中残留的兽药进入土壤后的移动性是评价其淋溶能力(对地下水的污染风险)的重要信息.通过土壤柱稳定流实验,考察了不同淋溶剂、粪浸液等对洛克沙胂在不同深度(0~20、20~50、50~80 cm)灰潮土中的迁移行为影响.结果表明,水、0.01mol·L~(-1) CaCl_2、0.01 mol·L~(-1) EDTA-Na2淋溶剂,对不同深度土壤柱中洛克沙胂的淋溶穿透曲线(BTCs)呈现不同程度的不对称性,在不同深度土壤柱中对洛克沙胂的淋出率分别为:水为92.3%~97.1%,0.01 mol·L~(-1) CaCl_2为71.0%~84.9%,0.01 mol·EDTA-Na_2为75.4%~91.2%;土壤柱先用粪浸液通过后,洛克沙胂的穿透曲线峰时间均有不同程度的提前,淋出率均有增加,在不同深度土壤柱中的淋出率分别为:水为96.4%~110.4%,0.01 mol·L~(-1) CaCl_2为94.5%~106.8%,0.01 mol·L~(-1) EDTA-Na_2为90.8%~103.2%.说明洛克沙胂随粪便进入土壤后可较快地淋溶迁移,可进入地表水和地下水中,对水环境质量的影响较大.  相似文献   

11.
5-苄基-4-叔丁基-2-氨基噻唑与芳香醛缩合制备了11 种5-苄基-4-叔丁基-2-苄亚氨基噻唑.结构经1H NMR和元素分析确证, 并用单晶 X-射线衍射测定了化合物Ⅰc的晶体结构.化合物Ⅰc晶体属单斜晶系, 空间群为 P21/n,晶胞参数为:a= 1.437 53(11) nm,b= 0.986 65(8) nm,c=1.465 65(12) nm,β=114.256 0(10)°;Z=4,V=1.895 3(3) nm3, Dc=1.349 g/cm3, F(000)=808, R1=0.050 7, wR2=0.116 3,S=1.03.体外筛选结果表明,化合物Ⅰb, Ⅰk 在10 μmol/L 浓度下对COX-2的抑制率超过50%.  相似文献   

12.
对大久保和绿化3号桃果实的多酚氧化酶(PPO)的性质进行了初步研究,分别就酚类物质、PPO 的底物专一性、pH 值与底物浓度对 PPO 活力的影响进行探讨。结果表明,两个桃品种的多酚氧化酶均有几个最适 pH 值;大久保的 PPO 最适天然底物为咖啡酸,绿化3号则是儿茶酚;对底物动力学研究表明,大久保在 pH 5.6,17.5℃条件下 Km=39.65mmol·L~(-1),Vm=3.86 OD·min~(-1),绿化3号在 pH5.02,17.5℃条件下 Km=16.6mmol·L~(-1),Vm=1.64 OD·min~(-1),说明对底物儿茶酚的亲和力大久保弱于绿化3号。  相似文献   

13.
采用溶液培养的方法,研究了不同钾素水平对苗期玉米地上、地下部铬的吸收、转运及其生理特性的影响.结果显示,在六价铬作用下,玉米幼苗的各项生理指标均受到一定的影响,生物量随着铬浓度的升高而呈现降低趋势.在铬浓度0-100μmool·L~(-1)之间,植株地上、地下部六价铬的含量随外界铬处理浓度的增加而增加,在100μmol·L~(-1)时,铬含量达到最大;叶绿素含量、根系活力随六价铬浓度的增加而降低,在100μmol·L~(-1),叶绿素、根系活力最小;丙二醛(MDA)含量呈先降低后上升趋势,在40μmol·L~(-1)时,丙二醛含量最小.钾素可缓解重金属铬对玉米幼苗的毒害作用,在400-1 600μmol·L~(-1)间,不同钾水平处理均可显著减少玉米幼苗地下部对铬的吸收,钾浓度为1 600μmol·L~(-1),铬含量最小.随着钾浓度的提高,叶绿素含量、根系活力都增加,但丙二醛(MDA)含量变化没有呈现明显的规律.值得注意的是,当溶液中铬浓度在0-20μmol·L~(-1)间时,地上部铬含量随着钾浓度的增大而逐渐减小,当铬浓度为40-100μmol·L~(-1),随着钾浓度的增大而呈增加趋势,说明高浓度铬处理时,钾町不同程度地促进铬由地下向地上部的转运.  相似文献   

14.
研究旨在建立苹果砧木M26和M9-T337组培快繁体系,为工厂化育苗奠定基础。通过对苹果砧木M26和M9-T337离体培养,筛选出两种砧木较适宜的外植体消毒方法以及初代、增殖和生根培养基。研究结果表明,M26和M9-T337最佳的外植体消毒方法为0.1%HgCl_2处理8 min;M26外植体建立最适宜的激素组合为6-BA1.0 mg·L~(-1)+NAA0.025 mg·L~(-1),M9-T337最适宜的激素组合为6-BA1.0 mg·L~(-1)+IBA0.5 mg·L~(-1);M26最佳的继代培养激素配比为6-BA0.5 mg·L~(-1)+NAA0.05 mg·L~(-1),M9-T337最佳的继代培养激素配比为6-BA 0.5 mg·L~(-1)+IBA0.5 mg·L~(-1);两个品种最适宜的生根培养基1/2WPM+IAA0.5 mg·L~(-1)+IBA0.5 mg·L~(-1)。  相似文献   

15.
竹柳(Salix fragilis)具有较强的抗逆性,在干旱区新疆引种是较好的城市绿化举措。探明竹柳引种克拉玛依市过程中的光合特性变化规律,寻找适宜的灌溉咸水矿化度,可为干旱区竹柳及其他先锋植物的引种积累经验并提供理论依据。2014年6月,在克拉玛依市乌尔禾区选定样地,设置了3个灌溉咸水矿化度:0、5g·L~(-1)和10g·L~(-1),沟灌嫁接竹柳(砧木为旱柳)2年生健康幼株,次日,自8:00起至20:00,间隔2h,用Li-6400便携式气体交换系统测定其成熟叶片的光合生理参数(净光合速率、蒸腾速率等)。结果表明:灌溉咸水矿化度处理0、5g·L~(-1)和10g·L~(-1),竹柳的净光合速率(Pn)差异极显著(F=60.822,p=0.0000.01);按照Pn对光合有效辐射的定积分,竹柳的Pn积分值排序依次为5g·L~(-1)(102.35)0g·L~(-1)(84.87)10g·L~(-1)(64.37);按照水分利用率(WUE)对光合有效辐射的积分值排序为:5g·L~(-1)(14.54)0g·L~(-1)(12.01)10g·L~(-1)(11.41);5g·L~(-1)竹柳Pn积分值在3个处理中最大,WUE积分值也最高。说明在新疆北部克拉玛依,春季(5-6月)引种竹柳(2年生嫁接苗)适宜的灌溉咸水矿化度是5g·L~(-1)。  相似文献   

16.
水解酸化-UASB-A/O工艺处理规模化养猪场污水工程设计   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用水解酸化-UASB-A/O工艺对一规模化养猪场污水进行了处理工程设计,对于主要污染物浓度范围分别为COD_(CR)=10000~12000mg·L~(-1).BOD_5=4000-4500mg·L~(-1),SS=300~500mg·L~(-1),pH=9~11,NH_3-N=3000~4000mg·L(-1)的养猪场污水,拟出水水质为:COD_(CR)≤400mg·L~(-1),BOD_5≤150mg·L~(-1),SS≤80mg·L~(-1)pH=6-9,NH_3-N≤600mg·L~(-1),满足GB18596-2001的要求.本文从水质水量、工艺、各构筑物规格以及投资和运行成本等方面对此设计进行了阐述.  相似文献   

17.
甾醇载体蛋白2(SCP-2)在昆虫体内甾醇吸收及运输过程中有着重要的生理功能。试验构建重组表达质粒pET-22b/HaSCP2,转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,并对IPTG浓度、诱导时间及温度进行优化,经Ni柱分离纯化后分析其与胆固醇结合活性。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白相对分子质量约为16 ku,且在25℃,IPTG终浓度0.2 mmol·L~(-1)下诱导10 h为最佳诱导表达条件。经荧光探针8-苯胺-1-萘磺酸(1,8-ANS)竞争分析,胆固醇与HaSCP-2结合半数有效浓度(EC50)为29.03μmol·L~(-1)。该研究为深入研究棉铃虫SCP-2的功能以及后续HaSCP-2抑制剂的筛选研究奠定了基础。  相似文献   

18.
生长调节剂与杀菌剂混用在富贵竹加工的研究   总被引:7,自引:0,他引:7  
用富贵竹剥除叶片的茎干剪取做富贵竹塔的枝段为材料,设置3种植物生长调节剂 杀菌剂的3因子3水平正交试验9个处理组合,研究其对富贵竹植株修口效果、顶侧芽生长及生根的影响。结果表明,爱多收 瑞毒霉锰锌、IBA 甲基托布津2因子3水平间的差异均显著或极显著,B-1活力素 百菌清因子3水平间差异不显著;植株顶侧芽长度分别与生根数、根长、根鲜重呈极显著的正相关;最佳处理组合,出口美国为(0.3ml·L~(-1)爱多收 0.8g·L~(-1)瑞毒霉锰锌)24h (O.3ml·L~(-1)B-1活力素 1.0g·L~(-1)百菌清)3次 (30mg·L~(-1)IBA 1.0g·L~(-1)甲基托布津)12h;出口其他国家为(0.3ml·L~(-1)爱多收 0.8 g·L~(-1)瑞毒霉锰锌)48 h (0.3ml·L~(-1)B-1活力素 l.0 g·L~(-1)百菌清)3次 (30mg·L~(-1)IBA l.0 g·L~(-1)甲基托布津)12 h。  相似文献   

19.
施锌对冬小麦亚细胞镉分布和镉化学形态的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
为深入了解施锌(Zn)对冬小麦镉(Cd)吸收的影响,本研究选冬小麦品种矮抗58,试验共设置了2个Cd水平(0、5μmol·L~(-1))和4个Zn水平(0、2、8和15μmol·L~(-1)),通过营养液试验,研究了施Zn对Cd胁迫下冬小麦Cd吸收、亚细胞分布和化学形态的影响。结果表明,冬小麦的生物量随Cd浓度的增加而降低,而Zn能够减轻Cd对冬小麦生物量的毒害作用。同时,根和地上部Cd含量随Zn浓度提高而降低。另外,施Zn显著降低了冬小麦幼苗各个亚细胞组分的Cd含量,增加了冬小麦根中1 mol·L~(-1)NaCl提取态和体积分数2%醋酸提取态Cd的含量。在Cd浓度为5μmol·L~(-1),Zn浓度为2和8μmol·L~(-1)时,冬小麦地上部细胞壁和可溶性部分Cd所占的比例增加;在Cd浓度为5μmol·L~(-1),Zn浓度为8和15μmol·L~(-1)时,冬小麦根部细胞壁和可溶性部分Cd所占的比例增加。冬小麦地上部去离子水提取态Cd所占比例随Zn浓度增加而降低,体积分数2%醋酸提取态Cd所占比例随Zn浓度增加而增加。因此,施Zn通过调节冬小麦亚细胞Cd分布和Cd的化学形态,促进了冬小麦体内活性Cd向惰性Cd的转化,减轻了Cd对冬小麦的毒害效应,降低了冬小麦根部Cd的迁移能力。  相似文献   

20.
研究狗头枣过氧化物酶(POD)的催化特性及抑制剂和激活剂对其活性的影响。结果表明:以愈创木酚为底物时,狗头枣POD最适pH 6.5~7.5左右,最适温度40℃,最适底物浓度0.1mol·L~(-1);抑制剂浓度0~21mol·L~(-1)时,抑制强弱顺序为抗坏血酸L-半胱氨酸EDTA,当抗坏血酸浓度21 mmol·L~(-1)时,狗头枣POD残存酶活为12.8%,狗头枣POD活性随三氯化铁和硫酸铜浓度的升高而增加,三氯化铁的激活效果明显高于硫酸铜;当温度高于55℃时,热处理对狗头枣POD的钝化效果较显著;55℃处理30 min,POD残存活力68.2%;80℃处理25 min、85℃处理20 min或90℃处理10 min可以完全钝化狗头枣POD。  相似文献   

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